衰老相关的NADPH-diaphorase阳性反应在鸽子和鼠类脊髓和延髓中的比较研究

论文摘要

目的通过烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-黄递酶（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase,NADPH-d）的组织化学方法,来研究年轻鸽子脊髓和延髓中的NADPH-d阳性反应及其分布特点,并且从NADPH-d组织化学染色的角度来详细说明年轻鸽子的腰骶段脊髓后索及中央管背侧的灰质如何从闭合到开放再到闭合的过程,并探究在老年鸽子及老年小鼠的腰骶段脊髓及薄束核（gracile nucleus,Gr）、楔束核（cuneate nucleus,Cu）中是否有年龄相关性的NADPH-d阳性小体（aging-related NADPH-d positive body,ANB）,ANBs作为一种神经退行性变在不同物种中是否普遍存在?并通过比较老年鸽子、老年大鼠、老年小鼠在腰骶段脊髓及Gr、Cu部位的NADPH-d反应的异同,进一步阐述ANBs存在的深远意义。方法动物实验:实验动物分为两组,老年组:15只健康老年鸽子（Columba livia）（9年、14年、16年分别5只）;10只健康老年SD大鼠（18个月）;10只健康老年C57BL/6J小鼠（18个月）。年轻组:10只健康年轻鸽子（Columba livia）（1年）;10只健康年轻SD大鼠（2个月）;10只健康年轻C57BL/6J小鼠（2个月）。所有动物雌雄不限。各组动物均采用腹腔注射麻醉,充分暴露心脏,经心室灌流固定后,完整地取出动物的脊髓和延髓。同时,把年轻鸽子（1年）和老年鸽子（16年）的腰骶膨大处的背根神经节（dorsal root ganglia,DRG）也小心的取出。依据解剖学知识将各组动物的脊髓分为颈段、胸段、腰段、骶段四部分并将延髓平面的Gr及Cu充分暴露出来。各组织块经蔗糖脱水后切成40微米的冰冻切片。对年轻及老年鸽子、年轻及老年SD大鼠、年轻及老年C57BL/6J小鼠脊髓及延髓的Gr、Cu分别做NADPH-d组织化学染色,并且通过免疫荧光法观察神经元核心抗原（neuronal nuclei,NeuN）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic portein,GFAP）、小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白抗体（ionizedcalcium binding adapter molecule 1,Iba1）、微管相关蛋白2（microtubule-associated protein 2,MAP2）、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）分别在年轻及老年鸽子脊髓中的表达情况。结果年轻鸽子脊髓各节段的NADPH-d组织化学染色结果显示,NADPH-d阳性神经元主要集中分布在年轻鸽子的脊髓背角,中央管周围,胸段和上腰段的特尼尔柱（terni column,CT）,散在的分布在每个脊髓节段的腹角。此外,在脊髓白质中也有分布。统计学分析显示,NADPH-d阳性神经元不仅在年轻鸽子脊髓不同节段的分布上有差异（P<0.05）,而且在相同脊髓节段的不同部位上也有差异（P<0.05）。与年轻鸽子相比,老年鸽子在各脊髓节段背角中的NADPH-d阳性神经元的数目均有不同程度的下降（P<0.05）,除了胸段之外。此外,我们从NADPH-d的角度描述了年轻鸽子腰骶膨大处两侧的后索及灰质由闭合到开放再到闭合的形态学变化。免疫荧光结果显示,与年轻鸽子相比,老年鸽子腰骶段脊髓中的NeuN、MAP2表达减少（P<0.05）,而GFAP、Iba1、VIP的表达却增加（P<0.05）。值得一提的是,在老年鸽子腰骶段的背角及背联合核（dorsal commissural nucleus,DCN）区域并没有发现类似于老年大鼠那样的ANBs。但是,我们却在老年鸽子脊髓中的后索、Gr、Cu及外侧楔束核（cuneatus externus nucleus,CuE）中发现了ANBs。此外,在老年小鼠的Gr及腰骶段的DCN区域也发现了ANBs。在老年大鼠Gr内的ANBs数目大于老年鸽子的,后索内的ANBs也是如此。结论1.年轻鸽子脊髓中的NADPH-d阳性神经元主要分布在背角,中央管周围,此外,在腹角及白质内也有散在分布。在不同脊髓节段的不同部位分布都是不同的。相比年轻鸽子而言,老年鸽子在脊髓背角、CT区、克拉克柱（clarke’s column,CIC）区的NADPH-d阳性神经元均有不同程度的减少,说明某些神经元有衰老相关的功能改变。与此同时,NeuN、MAP2的减少,GFAP、Iba1、VIP的表达增加也证实了这一点。2.在老年鸽子腰骶段的背角及DCN区域没有发现类似老年大鼠那样的NADPH-d阳性异常结构。但是,我们却在老年鸽子脊髓中的后索、Gr、Cu及CuE中发现了ANBs。此外,在老年小鼠的Gr及腰骶段的DCN区域也发现了ANBs,可以认为ANBs作为一种神经退行性变在不同物种中普遍存在。据此,我们猜测ANBs是否可以作为一种与衰老相关的神经退变的标志物呢?

论文目录

• 中文论著摘要
• 英文论著摘要
• 英文缩略语表
• 前言
• 实验材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 本研究创新性的自我评价
• 参考文献
• 附录
•   一、文献综述 关于鸽子脊髓中NADPH-diaphorase的研究进展
•     参考文献
•   二、在学期间科研成绩
•   三、致谢
•   四、个人简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 贾云格

导师: 谭会兵

关键词: 脊髓,鸽子,衰老,延髓

来源: 锦州医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 锦州医科大学

分类号: Q42

DOI: 10.27812/d.cnki.glnyx.2019.000176

总页数: 53

文件大小: 10696K

下载量: 6