猪血蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)的提取、纯化

论文摘要

以猪血为原料,采用丙酮沉淀、硫酸铵分级盐溶盐析、透析及反渗透等方法使之部分纯化,并对其性质进行研究。结果表明,硫酸铵分级盐溶盐析和透析相结合的方法纯化后的PTP1B酶活力明显提高,其中70%透析酶的比活力为434.5 U/mg,高于60%(402.1 U/mg)和80%(154.7 U/mg)时的比活力,是粗酶比活力的3.36倍,可作为试验用酶。纯化后的蛋白酪氨酸磷酸酶K_m为4.25 mmol/L。在35～42℃温度范围内保持较高的活力,其最适温度为37℃;在pH 5.50～7.67范围内保持较高的活力,其最适pH为7.20。反应速度与酶量、底物浓度的关系均符合酶促反应动力学。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 蛋白酪氨酸磷酸酶粗酶液的制备
•       1.3.1. 1 分离红细胞
•       1.3.1. 2 洗涤
•       1.3.1. 3 红细胞溶血
•       1.3.1. 4 除血红蛋白
•       1.3.1. 5 沉淀
•     1.3.2 蛋白酪氨酸磷酸酶的纯化
•     1.3.3 蛋白酪氨酸磷酸酶活性测定
•       1.3.3. 1 不同类型透析酶液中蛋白含量测定
•       1.3.3. 2 透析酶比活力的比较
•     1.3.4 蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP1B）的酶活力影响因素分析
•       1.3.4. 1 酶量与酶活性的关系
•       1.3.4. 2 底物浓度与酶活性的关系
•       1.3.4. 3 温度对PTP1B活性的影响
•       1.3.4. 4 pH对PTP1B的影响
• 2 结果与分析
•   2.1 蛋白酪氨酸磷酸酶活性测定
•   2.2 PTP1B的酶活特性
•     2.2.1 酶量对酶促反应的影响
•     2.2.2 底物浓度对酶促反应的影响
•     2.2.3温度对酶促反应的影响
•     2.2.4 pH对酶促反应的影响
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 闵玉涛,宋彦显,马庆一,刘鑫

关键词: 蛋白酪氨酸磷酸酶,提取,纯化

来源: 食品工业 2019年09期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 郑州工程技术学院,郑州轻工业学院,湖北中烟工业有限责任公司

基金: 河南省2015年科技攻关计划项目(152102310010),河南省2017年高等学校青年骨干教师培养计划(2017GGJS184),河南省2017年高等学校重点科研项目计划(18A150050),郑州市2014年科技攻关计划项目(141PPTGG456)

分类号: TS251.93

页码: 80-84

总页数: 5

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