导读:本文包含了单细胞巢式论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:单细胞,地中海,基因,链式反应,引物,釉质,合子。
单细胞巢式论文文献综述
刘建强,吴大洲,张印则,周华友,徐华[1]（2015）在《单细胞巢式PCR检测RHD的初步研究》一文中研究指出目的建立单细胞巢式PCR检测技术,用以检测单个细胞的RHD。方法采用稀释法获得单个细胞,直接提取DNA,根据RHD特点设计两对特异性引物进行巢式PCR,凝胶电泳观察结果,将扩增产物测序以检测扩增的目的基因。结果通过巢式PCR,阳性对照可以获得明显的目的产物,阴性和空白对照无扩增产物,10份Rh阳性单细胞检测标本均能检出RHD。结论建立的检测RHD单细胞巢式PCR检测技术具有很好的特异性和敏感性,可应用于生殖医学等领域,为预防Rh新生儿溶血病提供新的技术途径。(本文来源于《中国输血杂志》期刊2015年07期）
杨超[2]（2014）在《基于多重置换扩增的多位点PCR分析与多重巢式PCR方法在单细胞水平诊断DMD的比较研究》一文中研究指出杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy, DMD; OMIM310200)是一种神经肌肉系统常见的X-连锁隐性遗传病,主要累及男婴,在存活男婴中发病率约1/3500～1/6000,其主要临床特征为缓慢进行性加重的对称性肌肉无力和萎缩,患者多起病于3-5岁,出现走路姿势异常、易跌倒、肌无力等症状,12岁前丧失站立和行走能力,20岁左右死于呼吸困难、心力衰竭。本病是由位于Xp21.2的dystrophin基因突变导致,该基因全长约2.4Mb,约占X染色体全长的1.5%,是目前人类已发现的最大基因,其cDNA全长13974bp,共有79个外显子,其编码一种相对分子质量为32万道尔顿的肌养蛋白。近65%患者由一个或多个dystrophin基因外显子的缺失所致,5%由重复突变导致,30%由点突变导致。胚胎植入前遗传学诊断(Preimplantation genetic diagnosis, PGD)可通过筛选正常的胚胎移植,以防止遗传学异常妊娠的发生,避免了反复流产、引产对孕妇及其家庭造成的伤害。目前已有DMD-PGD相关报道,多重巢式PCR、连锁分析、限制性酶切等方法都在其PGD考虑之中,但这些方法仅限于对单细胞几个位点进行直接扩增,有位点少、扩增效率低、不能重复、条件要求高等缺点。对于临床PGD十分不利,因此全基因组扩增将模板量大幅提高,避免上述问题的产生。目前全基因组扩增已发展出引物延伸预扩增(Primer extension preamplification, PEP)技术和简并寡核苷酸引物PCR (Degenerate oligonucleotide primed-polymerase chainreaction, DOP-PCR)技术及多重置换扩增技术(multiple displacement amplification, MDA)。MDA技术已成为目前最有发展前景的WGA技术。目的：本研究通过使用多重巢式PCR和MDA的全基因组扩增技术对4个DMD家系完成PGD预实验,在实验中优化DMD-PGD预实验流程,并对多重巢式PCR和MDA-WGA方法对单细胞的扩增效率及诊断准确率和ADO发生率进行评估,对DMD-PGD中现有的10个STR位点进行有效率评价,最后对其中存在的问题进行讨论分析。材料：本研究材料来自4个家系中患者或(和)其直系亲属,患者及相关成员外周血标本于我院遗传中心抽取,并进行抽提gDNA和分离单淋巴细胞。家系Ⅰ：分子编号M13742,家系中女性携带者年龄34岁,生育一患儿,基因诊断提示女性携带者的dystrophin基因第12-16号外显子杂合缺失；家系Ⅱ：分子编号M5841,家系中女性携带者年龄41岁,生育一患儿,基因诊断提示女性携带者的dystrophin基因存在C.7705C>T杂合无义突变,并曾经行连锁分析；家系Ⅲ：分子编号M13501,家系中女性携带者年龄41岁,生育一患儿,14岁夭折,但未保留样本,基因诊断提示女性携带者的dystrophin基因存在c.6318G>A杂合无义突变,取女性携带者及其父母血样；家系Ⅳ：分子编号M13691,家系中仅有患儿,为新发生突变,基因诊断提示患儿的dystrophin基因存在第48-52号外显子缺失,其母亲则未见异常,年龄40岁。方法：1、制备单个淋巴细胞和抽提外周血gDNA2、家系gDNA水平PCR扩增和荧光-PCR扩增,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光电泳对DMD-STR位点2CA、5CA、7CA、4CA、45CA、49CA、50CA、59CA、63CA、79CA进行连锁分析,确定能提供连锁信息的位点。3、单个淋巴细胞通过多重巢式PCR或MDA-WGA进行初级扩增4、多重巢式PCR初级扩增产物和MDA纯化产物各位点的荧光PCR的扩增5、通过测序仪荧光电泳对荧光PCR产物进行分析及通过琼脂糖凝胶电泳对缺失位点普通PCR产物进行分析6、对需要测序的PCR产物进行回收、纯化及测序分析结果：1、单体型分析结果家系Ⅰ单体型分析结果,能提供连锁信息位点共4个,分别为5CA、44CA、45CA、50CA;家系Ⅱ单体型分析结果,能提供连锁信息位点共3个,分别为44CA、49CA、50CA;家系Ⅲ单体型分析结果,能提供连锁信息位点共4个,分别为7CA、44CA、50CA、63CA;家系Ⅳ单体型分析结果,能提供连锁信息位点共6个,分别为2CA、5CA、44CA、45CA、59CA、63CA。2、各家系单淋巴细胞扩增效率及ADO率家系Ⅰ共完成184个位点的扩增,扩增成功及诊断准确率99.5%(183/184)、ADO率为0,家系Ⅱ共完成153个位点的扩增,扩增成功及诊断准确率为99.3%(152/153)、ADO率为0,家系Ⅲ共完成180个位点的扩增,扩增成功及诊断准确率为100%(180/180)、ADO率为1.1%(178/180),家系Ⅳ共完成480个位点的扩增,扩增成功及诊断准确率为99.8%(479/480)、ADO率为0。3、多重巢式PCR方案和MDA-WGA方案的扩增效率及ADO率比较运用多重巢式PCR扩增方案总共扩增产物337个,扩增成功及诊断准确率为99.4%(335/337),ADO率为0(0/335)；运用MDA-WGA方案总共扩增产物660个,扩增成功率为99.8%(659/660),ADO率为0.3%(2/659)。经χ2检验,两者扩增成功率P>0.05差异无统计学意义,ADO率P>0.05,无统计学意义。结论：1、本实验共完成了4家DMD家系的PGD预实验,单细胞多重巢式PCR方案和MDA-WGA方案的各位点扩增成功率均>90%,ADO率均<10%,达到临床PGD要求,能够应用于临床PGD,这为DMD患者的临床PGD的开展提供了强有力的技术支撑。2、虽然多重巢式PCR方案和MDA-WGA方案的扩增成功率和ADO率无统计学差异。但MDA-WGA在多位点分析上更有优势,这样能更有效地提高单细胞诊断DMD的准确率。3、多位点连锁分析不仅能监测污染的发生,同时也能完成PGD诊断分析,拓宽了PGD的诊断范围,增加了PGD诊断的准确性,降低了误诊的发生。(本文来源于《中南大学》期刊2014-06-01）
袁艳鹏,关云谦,林庆玲,薛金花,蔡彦宁[3]（2011）在《反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达》一文中研究指出目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对。以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度。体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度。使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因。应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较。结果巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA。反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板。利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义。结论建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异。(本文来源于《首都医科大学学报》期刊2011年03期）
蔡靖,吴彤华,宋成,尹彪,莫美兰[4]（2009）在《单细胞巢式聚合酶链反应诊断β地中海贫血》一文中研究指出目的探讨在单淋巴细胞水平准确诊断β地中海贫血(β地贫)的方法,为开展β地贫的植入前诊断(PGD)打下基础。方法获取正常人及β地贫基因携带者的单个淋巴细胞,采用多重巢式聚合酶链反应(PCR)反向膜杂交(RDB)技术进行β地贫基因检测。结果单个淋巴细胞的PCR扩增效率为90.4%,等位基因脱扣(ADO)发生率为8.5%。结论用单细胞多重巢式PCR+RDB诊断β地贫是稳定可靠的,可望用于β地贫的临床植入前诊断。(本文来源于《临床检验杂志》期刊2009年06期）
苏峻峰,陈万金,吴志英,王柠,林宇[5]（2008）在《脊髓性肌萎缩症单细胞巢式聚合酶链反应技术的建立及初步应用》一文中研究指出目的建立单细胞巢式聚合酶链反应技术,并探讨进行脊髓性肌萎缩症基因诊断的可行性,为植入前遗传学诊断奠定基础。方法应用显微操作技术从外周血中分离单个淋巴细胞,制备单细胞DNA模板。分别应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法扩增正常对照者外周血中单个淋巴细胞运动神经元生存(SMN)基因第7、8号外显子,计算其阳性率,建立SMN1基因的单细胞巢式聚合酶链反应技术。并应用该项技术及限制性酶切对1例脊髓性肌萎缩症患者进行基因诊断。结果正常对照者巢式聚合酶链反应共扩增60个外周血单个淋巴细胞SMN1基因第7号外显子,其中54个扩增成功,阳性率为90%;引物延伸预扩增共扩增10个外周血单个淋巴细胞,巢式聚合酶链反应分别扩增SMN1基因第7、8号外显子,在20个聚合酶链反应扩增中共有17个单个淋巴细胞扩增成功,阳性率为85%。应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法对1例脊髓性肌萎缩症患者单个淋巴细胞扩增后经限制性酶切显示SMN1基因缺失,结果与全血基因组聚合酶链反应-限制性酶切一致。结论巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增方法各有优缺点,巢式聚合酶链反应耗时短、操作简便,可作为脊髓性肌萎缩症患者单细胞基因诊断的首选方法。(本文来源于《中国现代神经疾病杂志》期刊2008年02期）
郑圣霞[6]（2008）在《运用单细胞双重巢式PCR和MDA技术方法行性连锁遗传病诊断》一文中研究指出目的1.运用单细胞双重巢式聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)技术在单细胞水平建立一种简便、快速、高准确性的胎儿性连锁遗传疾病诊断方法,为无创性产前诊断性连锁遗传病和植入前遗传学诊断(pre-implantation genetic diagnosis,PGD)提供一定的理论与方法学依据,同时为在本中心建立单细胞PCR技术平台做准备;2.建立单细胞全基因组扩增技术之一多重置换扩增(multiple displacement amplification ,MDA),扩增单细胞的全部基因组DNA,增加模板量以弥补单细胞模板量少、只能用于一次性检测的不足,为开展单基因病的植入前遗传学诊断(pre-implantation genetic diagnosis,PGD)奠定基础。方法1.提取男女单个淋巴细胞各150例,共300个细胞。随机分成3组,每组男女细胞各50个,双重巢式PCR技术在单细胞水平同时扩增X-类固醇硫酸脂酶基因(steroid sulfatase gene, STS)/Y-假基因和牙釉质基因(Amelogenin,AMEL),对照组用单重巢式PCR技术在单细胞水平分别扩增两基因,比较单、双重巢式PCR技术在单细胞水平的扩增率及性别诊断正确率。2、应用MDA扩增5个单个淋巴细胞和10个单个卵裂球全基因组DNA,1%的琼脂糖电泳检测扩增效率,通过普通PCR即上述巢式PCR的第二轮的PCR条件检测细胞性别来判断扩增产物的均一性。结果1、单重巢式PCR扩增男性细胞STS和AMEL的扩增率和细胞性别诊断的正确率分别是84%、76%和84%、84%;而双重巢式PCR技术同时扩增上述基因的扩增率和性别诊断正确率分别为98%、96%。后者与前两者相比扩增率和性别诊断正确率均明显提高,差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。2、MDA扩增5个淋巴细胞(3个为男性细胞,2个为女性细胞)全部扩增成功,扩增率100%;MDA扩增10个卵裂球有4个扩出产物,扩增率为40%。以MDA产物为模板,用STS的第二轮引物检测单个淋巴细胞性别,正确性为100%;检测所有扩出产物的卵裂球也均能检测出性别,发现2个为男性,2个为女性,可惜的是这4个卵裂球均来自不同的胚胎,所以不能相互验证。从淋巴细胞MDA产物检测的结果可以判断MDA产物也是均一的。结论1、在单细胞水平性连锁遗传疾病诊断中,双重巢式PCR技术较单重巢式PCR技术具有较高的扩增率及诊断正确率,并有助于发现等位基因脱扣(allele dropout, ADO)。该法在无创性单基因伴性遗传病的产前诊断和植入前遗传学诊断中具有较高的实际应用价值,且经济、便捷,值得临床进一步推广。2、初步预实验可知MDA可以克服单细胞的模板量少和不可重复实验的缺点。但由于此次预实验的样本量太小,其稳定性、可靠性还需进一步摸索,才可以用于单基因病的着床前遗传学诊断和产前诊断。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2008-04-15）
钟昌高,张瞻,李麓芸,陆长富,林戈[7]（2006）在《单细胞二重巢式PCR诊断β地中海贫血》一文中研究指出【目的】探讨单细胞水平诊断β地中海贫血(β-thalassemia)的可靠性,为开展β地中海贫血的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantationgeneticdiagnosis,PGD)打下基础。【方法】采用二重巢式PCR并结合扩增特异的突变系统检测技术(amplificationrefractorymutationsystem,ARMS)扩增含有CD41-42突变位点的β地中海贫血患者的单淋巴细胞及正常人单淋巴细胞和单卵裂球的β-珠蛋白基因的5个常见突变位点(CD41-42、IVS-Ⅱ-654、CD17、CD71-72和nt.-28位点),扩增产物经过2%的琼脂糖凝胶电泳检测。【结果】患者的88个单淋巴细胞的扩增成功率为95.5%,等位基因脱扣的发生率为4.8%,诊断准确率为95.2%;正常人的41个单淋巴细胞的扩增成功率均为95.1%,假阳性率为0;正常人的34个单卵裂球细胞的PCR扩增成功率为88.2%;35管细胞洗脱液空白对照组假阳性扩增率为0。【结论】单细胞二重巢式PCR并结合ARMS技术诊断β地中海贫血是稳定的、可靠的,适用于β地中海贫血的PGD。(本文来源于《医学临床研究》期刊2006年10期）
方怡,陆小溦,王学锋,冯云,王鸿利[8]（2006）在《单细胞四重巢式荧光聚合酶链反应进行血友病A基因诊断和性别鉴定的研究》一文中研究指出目的建立快速有效检测血友病 A 基因诊断和性别鉴定的单细胞聚合酶链反应(PCR)方法。方法联合6个与凝血因子Ⅷ(FⅧ)紧密连锁的 STR 位点(DXS15、DXS9901、G6PD、DXS1073、DXS1108和 F8Civs13)通过多重荧光 PCR 进行正常人群多态性分析和血友病 A 家系基因诊断,从中选取杂合度和诊断率较高的 STR 位点联合性别位点牙釉蛋白基因(Amelogenin gene)建立单淋巴细胞多重巢式荧光 PCR 的检测方法。结果选择了3个杂合度和诊断率较高的 STR 位点(FSCivs13、DXS1073和 DXS15)联合性别位点建立了单细胞四重巢式荧光 PCR 的检测方法。Amelogenin、DXS15、F8Civs13和 DXS1073在男性的单细胞扩增成功率分别为94.3%、91.4%、100%和100%,在女性为100%、97.1%、97.1%和97.1%。该女性的 DXS1073和 DXS15位点呈杂合子,均未发现等位基因脱失现象。扩增皆未发现假阳性和假阴性的情况。结论建立的单细胞四重巢式荧光PCR 方法快速有效,有望应用于临床血友病 A 非创伤性产前基因诊断。(本文来源于《中华检验医学杂志》期刊2006年09期）
钟昌高,李麓芸,陆长富,林戈,卢光琇[9]（2005）在《单细胞二重巢式PCR扩增影响因素初探》一文中研究指出目的 :对影响单细胞二重巢式PCR扩增的因素进行初步探讨。方法 :针对 β 珠蛋白基因CD4 1 4 2、IVS Ⅱ 6 5 4突变位点区域采用二重巢式PCR ,分别以不同的引物浓度组合、不同的TaqDNA聚合酶、不同的中和缓冲液、PCR反应前采用或不采用 98℃预变性扩增单个淋巴细胞和 /或单卵裂球 ,了解这些因素对PCR扩增效率的影响。结果 :不同的引物浓度组中 ,终浓度为 0 .2 5 μmol/LR1+F1引物对与 0 .3μmol/LR2 +F2引物对配对扩增效率最高 ;不同的TaqDNA聚合酶中TaKaRaEXTaq的扩增效率最高 ;中和缓冲液 1(2 0 0mmol/LTricine)的扩增效率显着高于中和缓冲液 2 (90 0mmol/LTris·HCl,pH 8.3/30 0mmol/LKCl/2 0 0mmol/LHCl)的扩增效率 (P <0 .0 5 ) ;单细胞PCR反应前采用 98℃预变性与不采用 98℃预变性的扩增效率间差异无统计学意义。结论 :不同引物浓度组合、不同的TaqDNA聚合酶、不同的中和缓冲液对单细胞的二重巢式PCR的扩增效率存在明显差异 ,而PCR反应前采用 98℃预变性不能提高PCR扩增效率。(本文来源于《北京大学学报(医学版)》期刊2005年01期）
王睿,周灿权,胡斌,詹前胜,徐艳文[10]（2004）在《多重PCR检测外周血Y染色体微缺失和单细胞巢式PCR检测胚胎Y染色体微缺失的研究》一文中研究指出研究背景:据调查显示:近年来不育症的发病率已高达15%～20%其中约40% 的病例是男性因素所致。20世纪80～90年代,不育症的治疗是以女性为主,常规的 IVF 技术并不能解决男性因素的不育。直至1992年比利时的 Palermo 第一次使用 ICSI 技术进行辅助受精获得成功并分娩健康婴儿,这为不育症的治疗带来了突破性的进展。(本文来源于《澳门、香港、内地生殖健康研讨会论文集》期刊2004-05-01）
单细胞巢式论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy, DMD; OMIM310200)是一种神经肌肉系统常见的X-连锁隐性遗传病,主要累及男婴,在存活男婴中发病率约1/3500～1/6000,其主要临床特征为缓慢进行性加重的对称性肌肉无力和萎缩,患者多起病于3-5岁,出现走路姿势异常、易跌倒、肌无力等症状,12岁前丧失站立和行走能力,20岁左右死于呼吸困难、心力衰竭。本病是由位于Xp21.2的dystrophin基因突变导致,该基因全长约2.4Mb,约占X染色体全长的1.5%,是目前人类已发现的最大基因,其cDNA全长13974bp,共有79个外显子,其编码一种相对分子质量为32万道尔顿的肌养蛋白。近65%患者由一个或多个dystrophin基因外显子的缺失所致,5%由重复突变导致,30%由点突变导致。胚胎植入前遗传学诊断(Preimplantation genetic diagnosis, PGD)可通过筛选正常的胚胎移植,以防止遗传学异常妊娠的发生,避免了反复流产、引产对孕妇及其家庭造成的伤害。目前已有DMD-PGD相关报道,多重巢式PCR、连锁分析、限制性酶切等方法都在其PGD考虑之中,但这些方法仅限于对单细胞几个位点进行直接扩增,有位点少、扩增效率低、不能重复、条件要求高等缺点。对于临床PGD十分不利,因此全基因组扩增将模板量大幅提高,避免上述问题的产生。目前全基因组扩增已发展出引物延伸预扩增(Primer extension preamplification, PEP)技术和简并寡核苷酸引物PCR (Degenerate oligonucleotide primed-polymerase chainreaction, DOP-PCR)技术及多重置换扩增技术(multiple displacement amplification, MDA)。MDA技术已成为目前最有发展前景的WGA技术。目的：本研究通过使用多重巢式PCR和MDA的全基因组扩增技术对4个DMD家系完成PGD预实验,在实验中优化DMD-PGD预实验流程,并对多重巢式PCR和MDA-WGA方法对单细胞的扩增效率及诊断准确率和ADO发生率进行评估,对DMD-PGD中现有的10个STR位点进行有效率评价,最后对其中存在的问题进行讨论分析。材料：本研究材料来自4个家系中患者或(和)其直系亲属,患者及相关成员外周血标本于我院遗传中心抽取,并进行抽提gDNA和分离单淋巴细胞。家系Ⅰ：分子编号M13742,家系中女性携带者年龄34岁,生育一患儿,基因诊断提示女性携带者的dystrophin基因第12-16号外显子杂合缺失；家系Ⅱ：分子编号M5841,家系中女性携带者年龄41岁,生育一患儿,基因诊断提示女性携带者的dystrophin基因存在C.7705C>T杂合无义突变,并曾经行连锁分析；家系Ⅲ：分子编号M13501,家系中女性携带者年龄41岁,生育一患儿,14岁夭折,但未保留样本,基因诊断提示女性携带者的dystrophin基因存在c.6318G>A杂合无义突变,取女性携带者及其父母血样；家系Ⅳ：分子编号M13691,家系中仅有患儿,为新发生突变,基因诊断提示患儿的dystrophin基因存在第48-52号外显子缺失,其母亲则未见异常,年龄40岁。方法：1、制备单个淋巴细胞和抽提外周血gDNA2、家系gDNA水平PCR扩增和荧光-PCR扩增,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光电泳对DMD-STR位点2CA、5CA、7CA、4CA、45CA、49CA、50CA、59CA、63CA、79CA进行连锁分析,确定能提供连锁信息的位点。3、单个淋巴细胞通过多重巢式PCR或MDA-WGA进行初级扩增4、多重巢式PCR初级扩增产物和MDA纯化产物各位点的荧光PCR的扩增5、通过测序仪荧光电泳对荧光PCR产物进行分析及通过琼脂糖凝胶电泳对缺失位点普通PCR产物进行分析6、对需要测序的PCR产物进行回收、纯化及测序分析结果：1、单体型分析结果家系Ⅰ单体型分析结果,能提供连锁信息位点共4个,分别为5CA、44CA、45CA、50CA;家系Ⅱ单体型分析结果,能提供连锁信息位点共3个,分别为44CA、49CA、50CA;家系Ⅲ单体型分析结果,能提供连锁信息位点共4个,分别为7CA、44CA、50CA、63CA;家系Ⅳ单体型分析结果,能提供连锁信息位点共6个,分别为2CA、5CA、44CA、45CA、59CA、63CA。2、各家系单淋巴细胞扩增效率及ADO率家系Ⅰ共完成184个位点的扩增,扩增成功及诊断准确率99.5%(183/184)、ADO率为0,家系Ⅱ共完成153个位点的扩增,扩增成功及诊断准确率为99.3%(152/153)、ADO率为0,家系Ⅲ共完成180个位点的扩增,扩增成功及诊断准确率为100%(180/180)、ADO率为1.1%(178/180),家系Ⅳ共完成480个位点的扩增,扩增成功及诊断准确率为99.8%(479/480)、ADO率为0。3、多重巢式PCR方案和MDA-WGA方案的扩增效率及ADO率比较运用多重巢式PCR扩增方案总共扩增产物337个,扩增成功及诊断准确率为99.4%(335/337),ADO率为0(0/335)；运用MDA-WGA方案总共扩增产物660个,扩增成功率为99.8%(659/660),ADO率为0.3%(2/659)。经χ2检验,两者扩增成功率P>0.05差异无统计学意义,ADO率P>0.05,无统计学意义。结论：1、本实验共完成了4家DMD家系的PGD预实验,单细胞多重巢式PCR方案和MDA-WGA方案的各位点扩增成功率均>90%,ADO率均<10%,达到临床PGD要求,能够应用于临床PGD,这为DMD患者的临床PGD的开展提供了强有力的技术支撑。2、虽然多重巢式PCR方案和MDA-WGA方案的扩增成功率和ADO率无统计学差异。但MDA-WGA在多位点分析上更有优势,这样能更有效地提高单细胞诊断DMD的准确率。3、多位点连锁分析不仅能监测污染的发生,同时也能完成PGD诊断分析,拓宽了PGD的诊断范围,增加了PGD诊断的准确性,降低了误诊的发生。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
单细胞巢式论文参考文献
[1].刘建强,吴大洲,张印则,周华友,徐华.单细胞巢式PCR检测RHD的初步研究[J].中国输血杂志.2015
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