酵母细胞中碱性应答蛋白Rim101与ESCRT复合物的相互调控作用

论文摘要

本研究采用同源重组、倍比稀释及荧光定位等方法研究了ESCRT基因对Rim101蛋白定位的影响及Rim101其对钙稳态相关基因VNX1和SPF1的调控作用。结果显示,7个ESCRT基因（SNF7, SNF8, VPS20,STP22, VPS25, VPS28和VPS36）的缺失导致GFP-Rim101不能进入细胞核,VNX1基因的缺失不影响7个ESCRT缺失株对钙离子的敏感性,而SPF1基因的缺失导致7个ESCRT缺失株对钙离子更加敏感。研究表明ESCRT基因不仅调控Rim101的功能也影响其定位,VNX1和SPF1基因是Rim101组成型活性蛋白Rim101-531抑制ESCRT缺失株对钙离子敏感性所必需的,这些研究结果为进一步研究ESCRT的功能提供了基础。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 ESCRT基因的缺失对Rim101定位的影响
•   1.2 ESCRT缺失株中Rim101对VNX1的调控作用
•     1.2.1 ESCRT与VNX1双基因缺失株的构建
•     1.2.2 VNX1基因的缺失对ESCRT缺失株钙离子敏感性的影响
•     1.2.3 ESCRT和VNX1双基因缺失株对Rim101功能的影响
•   1.3 ESCRT缺失株中Rim101对SPF1的调控作用
•     1.3.1 ESCRT与SPF1双基因缺失株的构建
•     1.3.2 SPF1基因的缺失对ESCRT缺失株钙离子敏感性的影响
•     1.3.3 ESCRT和SPF1双基因缺失株对Rim101功能的影响
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 材料
•     3.1.1 菌株、质粒和引物
•     3.1.2 培养基
•     3.1.3 试剂
•     3.1.4 实验仪器
•   3.2 酿酒酵母细胞的质粒转化
•   3.3 酿酒酵母片段DNA的转化
•   3.4 酸洗玻璃珠提取酿酒酵母基因组
•   3.5 倍比稀释表型分析
•   3.6 酿酒酵母双基因缺失株的构建
•   3.7 细胞预处理和荧光显微镜观察

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵运英,王頔,曹春蕾

关键词: 酿酒酵母

来源: 基因组学与应用生物学 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31301021)资助

分类号: Q75

DOI: 10.13417/j.gab.038.002574

页码: 2574-2584

总页数: 11

文件大小: 3526K

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