论文摘要
DNA损伤应答是机体应对损伤作出的一系列反应。DNA损伤应答有效的协调,在机体适应环境、细胞的分裂、分化过程中发挥了重要作用。研究DNA损伤应答相关的分子机制,将会加深对人类许多疾病发生发展机制的理解,为疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。本课题以裂殖酵母(Fission yeast,S.pombe)为模式生物,研究真核生物中DNA损伤应答相关机制,通过遗传筛选方法寻找参与DNA损伤应答新的蛋白。ATR/Rad3蛋白是目前已知DNA损伤应答中至关重要的一个上游蛋白激酶,它参与了DNA损伤应答多方面的调控。在Rad3基因缺失的背景下,筛选出对DNA损伤药物敏感表型产生回补的突变株,再通过对突变株深度测序确定相关突变基因,其中一个可能参与DNA损伤应答反应的新基因为Clr1。Clr1蛋白是一个转录负调控蛋白,已报导的主要功能是参与异染色质的组装。本研究通过遗传实验,初步证明了Clr1蛋白与DNA损伤应答具有相关性,且Clr1缺失可以回补Rad3基因缺失对DNA损伤药物的敏感性。通过生化实验,证明在损伤应答反应时,Clr1蛋白会受到Rad3蛋白的调控,再通过泛素化途径降解。但Clr1作为Rad3的下游蛋白,在损伤应答中并不直接受到Rad3蛋白磷酸化调控。通过质谱鉴定,发现在进行DNA损伤药物处理后Clr1蛋白存在多个位点的磷酸化修饰,这些位点的具体功能,以及Rad3蛋白调控Clr1蛋白的具体分子机制,还需要后期实验继续探究。本研究还发现细胞内Clr1蛋白在S期会增多,这可能暗示Clr1蛋白也参与到S期复制过程中。如果以裂殖酵母为模式生物,在研究过程中会面临着细胞壁难以去除的难题,而藤黄节杆菌(A.lutues)是一种可以释放溶菌酶的放线菌,该溶菌酶恰好可以裂解裂殖酵母的细胞壁。本论文还利用高通量测序和生物信息结合,首次解析了藤黄节杆菌的全基因组序列,为后续的研究奠定了基础。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 谷璐婷
导师: 易发平
关键词: 损伤应答,蛋白,藤黄节杆菌,全基因组测序分析
来源: 重庆医科大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 重庆医科大学
分类号: Q523
总页数: 56
文件大小: 3696K
下载量: 9
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标签：损伤应答论文; 蛋白论文; 藤黄节杆菌论文; 全基因组测序分析论文;