BMP4促进诱导多能干细胞向感觉神经元分化

论文摘要

目的探讨骨形成蛋白-4 （BMP4）在诱导多能干细胞（iPSCs）向感觉神经元分化中的作用。方法采用碱性磷酸酶染色（AP）和拟胚体（EB）形成实验对iPSCs进行鉴定。采用神经营养因子诱导法将iPSCs向感觉神经元样细胞分化两周,对照组诱导方案为DMEM/12中加入2%B27、20 ng/mL碱性成纤维因子（bFGF）、200 ng/mL音猬因子（SHH）及10μmol/L全反式维甲酸（ATRA）,BMP4组为对照组基础上添加10 ng/mL BMP4。通过细胞免疫荧光染色,检测诱导后细胞神经元活性,通过Realtime-PCR比较两组间细胞内感觉元相关基因mRNA相对表达量。结果 iPSCs呈现出典型的类似胚胎干细胞样克隆细胞团块,AP为阳性,EB随机分化实验中能表达三个胚层相关基因,符合iPSCs生物学特性。BMP4组两周的神经元定向诱导后,iPSCs展现出双极或多极形态,神经元相关标志蛋白β-Tublin-Ⅲ表达阳性,表明诱导分化后的细胞具有神经元功能活性。Realtime-PCR结果显示在对照组vs BMP4组中,BRN3A相对表达量为（0.11±0.03） vs （0.25±0.04）、Neurog1为（1.02±0.32） vs （1.93±0.52）、GFAP为（0.21±0.04） vs （0.65±0.07）,差异均具有显著统计学意义（P<0.01）,NeuroD为（0.45±0.05） vs （0.52±0.04）,差异无统计学意义（P>0.05）,表明BMP4能显著提升诱导后细胞BRN3A、Neurog1、GFAP相对表达量。结论 BMP4能显著提升iPSCs向感觉神经元样细胞诱导分化的效率,为后续实验研究提供了有力的保障。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 iPSCs复苏
•   1.2 碱性磷酸酶染色
•   1.3 拟胚体形成实验
•   1.4 iPSCs向神经元样细胞诱导
•   1.5 细胞免疫荧光
•   1.6 Realtime-PCR
•   1.7 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 iPSCs形态与鉴定
•   2.2 i PSCs向感觉神经元诱导
•   2.3 两组感觉神经元诱导方案比较
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 彭韬,苗刚勇,谭志强,刘斌

关键词: 诱导多能干细胞,感觉神经元,骨形成蛋白,定向分化,细胞免疫荧光

来源: 海南医学 2019年18期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 湖南省人民医院/湖南师范大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科

基金: 国家自然科学基金青年项目(编号:81800921),吴阶平医学基金项目(编号:320.6750.17269)

分类号: R329.2

页码: 2313-2317

总页数: 5

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