单核细胞增生李斯特菌新型内化素lmo0549的分子特征及其表达

论文摘要

应用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）新型内化素lmo0549基因进行克隆和测序,并对其进行生物信息学分析;通过扩增获得Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区序列,并将其亚克隆至pET-32a（+）表达载体,转入大肠杆菌中用异丙基硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-thiogalactoside,简称IPTG）诱导表达,应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（western blot）鉴定重组蛋白的表达形式及其抗原特异性。序列分析结果表明,扩增得到的lmo0549基因全长为2 034 bp,编码677个氨基酸,其信号肽序列是前23个氨基酸,在Lmo0549蛋白氨基酸序列中,从N端到C端分别包括5个富含亮氨酸的重复基序（LRR）、1段PKD重复序列和1个WxL结构域;同时还存在N-联糖基化位点10个、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点14个、蛋白激酶C磷酸化位点15个。同源性分析显示,LM-SB5 lmo0549基因编码的蛋白氨基酸序列与标准株李斯特菌EGD-e,（NC003210.1）蛋白氨基酸序列的同源性为88.04%,且在单核细胞增生李斯特菌中具有较高的保守性。SDS-PAGE分析显示,表达的Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区具有与理论值33.8 ku相符的分子质量;蛋白质印迹法分析表明,重组蛋白Lmo0549与LM阳性血清可发生特异性免疫反应,为进一步探讨Lmo0549在LM侵入宿主细胞的分子作用机制奠定了前期基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要菌株与试剂
•   1.2 引物设计与合成
•   1.3 lmo0549基因的扩增、克隆及其编码蛋白分子特征分析
•   1.4 lmo0549基因编码蛋白氨基端抗原集中区的扩增
•   1.5 重组蛋白Lmo0549C的诱导表达与鉴定
• 2 结果与分析
•   2.1 lmo0549基因的扩增与克隆
•   2.2 lmo0549基因测序结果及分子特征分析
•   2.3 Lmo0549蛋白氨基酸序列同源性及遗传进化分析
•   2.4 lmo0549基因氨基端抗原集中区的扩增结果
•   2.5 pET-32a（+）-lmo0549C重组表达载体鉴定及诱导表达
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王立霞,孟庆玲,乔军,郭晶,伍晔晖,才学鹏,蔡扩军,王登峰

关键词: 单核细胞增生李斯特菌,内化素,克隆,分子特征,原核表达

来源: 江苏农业科学 2019年18期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 石河子大学动物科技学院,中国农业科学院兰州兽医研究所,乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心,新疆畜牧科学院兽医研究所

基金: 国家自然科学基金(编号:31360596,30960274),国家重点研发计划(编号:2016YFD0500900),乌鲁木齐市科技局渝乌科技合作项目(编号:Y161220001),新疆生产建设兵团中青年科技创新领军人才计划(编号:2016BC001)

分类号: S852.61

DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.18.043

页码: 199-203

总页数: 5

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