MiR-194过表达和抑制表达对肝癌细胞株Hep-3b中侧群细胞增殖的影响

论文摘要

目的研究MicroRNA-194（miR-194）过表达和抑制表达对细胞株Hep-3b中侧群细胞增殖功能影响。方法构建miR-194过表达和抑制表达慢病毒并感染Hep-3b细胞。流式细胞仪鉴定各感染组SP侧群比例,QPCR检测各组细胞miR-194-5p表达,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果流式细胞仪鉴定发现miR-194过表达Hep-3b组SP细胞含量与miR-194抑制表达Hep-3b组差异具有统计学意义（LSD-t=3.550,P=0.012）。QPCR检测显示miR-194过表达Hep-3b组miR-194-5p水平高于miR-194抑制表达Hep-3b组（LSD-t=4.680,P=0.007）。CCK-8实验表明miR-194过表达Hep-3b组和miR-194抑制表达Hep-3b组细胞增殖能力差异有统计学意义（LSD-t=5.621,P=0.002）。软琼脂克隆形成实验显示miR-194过表达Hep-3b组比miR-194抑制表达Hep-3b组形成细胞克隆少（LSD-t=5.849,P=0.001）。结论成功构建了miR-194过表达和抑制细胞株,miR-194抑制组显示明显的干细胞特征,其含有更多SP细胞,具有更强的细胞增殖能力和自我更新能力。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞株、主要试剂与仪器:
•   1.2 miR-194-5p过表达和抑制表达慢病毒载体构建及肝癌细胞株Hep-3b感染:
•     1.2.1 细胞培养方法:
•     1.2.2 引物序列及合成:
•     1.2.3 制备重组克隆、慢病毒包装和感染Hep-3b细胞:
•   1.3 QPCR检测miR-194-5p表达:
•   1.4 流式细胞术SP细胞的标记、检测和分选:
•   1.5 CCK- 8法检测人肝癌细胞系Hep-3b细胞增殖能力:
•   1.6 软琼脂克隆形成实验检测人肝癌细胞系Hep-3b细胞克隆形成能力:
•   1.7 统计学方法:
• 2 结果
•   2.1 慢病毒感染细胞Hep-3b形成稳定感染细胞株:
•   2.2 QPCR检测各组细胞miR-194-5p表达:
•   2.3 流式细胞术检测各组SP细胞:
•   2.4 miR-194过表达和抑制表达Hep-3b细胞增殖能力变化:
•   2.5 miR-194过表达和抑制表达Hep-3b组细胞组软琼脂形成能力变化:
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 许扬梅,龚福生,刘沁颖,刘施佳,黄丽洁,郑秋红

关键词: 微小,慢病毒载体,肝癌,干细胞

来源: 福建医药杂志 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 肿瘤学

单位: 福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤医院福建省肿瘤生物治疗重点实验室

基金: 福建省自然科学基金资助项目(2016J01436)

分类号: R735.7

页码: 141-145+182

总页数: 6

文件大小: 4412K

下载量: 75