猪肺炎支原体纤毛黏附因子P97和F7-CTB对O型口蹄疫灭活疫苗的免疫增强作用

论文摘要

旨在研究猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,简称Mhp）纤毛黏附因子P97以及F7鞭毛蛋白（flagellin,简称F）-霍乱毒素B亚基（cholera toxin B subunit,简称CTB）2种重组蛋白对口蹄疫（foot-and-mouth disease,简称FMD）灭活疫苗的免疫增强作用。通过体外表达获得pCold-F7-CTB、pET32a-P97-R1 2种重组蛋白,用间接酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA）方法检测pCold-F7-CTB蛋白的生物学活性,将重组蛋白分别与口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,简称FMDV）灭活抗原、口蹄疫灭活疫苗混合制备,皮下或腹腔接种Balb/c小鼠,共免疫2次,间隔3周。分别于免疫前、免疫后21、35、49 d采血,49 d后无菌摘取脾脏。采用阻断ELISA的方法检测小鼠血清口蹄疫O型病毒免疫球蛋白（IgG）抗体滴度,用流式细胞术检测脾淋巴细胞亚型比例,以评估免疫效力。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western Blot）分析结果表明,2种重组蛋白成功表达。用GMl（神经节苷脂）-ELISA方法验证pCold-F7-CTB的生物学活性,发现融合蛋白F7-CTB保留了与GMl的结合能力。小鼠免疫试验结果表明,经皮下注射接种后,单独口蹄疫病毒灭活抗原组没有产生明显的抗体水平,而F7-CTB免疫增强剂组比单独口蹄疫病毒灭活抗原组的IgG滴度更高。在试验中发现,当重组蛋白与口蹄疫灭活疫苗联合使用时,血清中的IgG滴度明显增高,CD3+CD8+T淋巴细胞比值上升;P97和F7-CTB混合使用对口蹄疫灭活疫苗的免疫增强效果最佳。可以初步得出,免疫增强剂P97和F7-CTB具有协同作用,皮下注射可显著提高FMD的特异性IgG水平,CD3+CD8+T淋巴细胞比值升高,显示其具有良好的应用前景。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 主要试剂
•   1.3 试验动物
•   1.4 pCold I-F7-CTB重组质粒的构建
•   1.5 重组菌的构建
•   1.6 重组蛋白的表达
•     1.6.1 重组菌的诱导表达
•     1.6.2 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 （sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, 简称SDS-PAGE） 鉴定重组蛋白质的表达
•   1.7 重组蛋白的纯化和蛋白质印迹法 （Western Blot） 分析
•   1.8 GM1-酶联免疫吸附
•   1.9 小鼠免疫接种
•     1.9.1 免疫试验1
•     1.9.2 免疫试验2
•   1.10 血清中口蹄疫O型病毒抗体IgG的检测
•   1.11 流式细胞术检测脾淋巴细胞CD3+、CD4+和CD8+亚型比例
• 2 结果与分析
•   2.1 重组菌的构建、蛋白表达和纯化
•   2.2 Western Blot分析
•   2.3 GM1-ELISA检测
•   2.4 Balb/C小鼠的免疫效果
•     2.4.1 免疫小鼠血清中特异性IgG的测定
•       2.4.1.1 免疫试验1
•       2.4.1.2 免疫试验2
•     2.4.2 免疫小鼠CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞的变化
•       2.4.2.1 免疫试验1
•       2.4.2.2免疫试验2
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭芸芸,张雪寒,刘茂军,王警,牛家强,何孔旺

关键词: 口蹄疫,免疫增强剂

来源: 江苏农业科学 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西藏农牧学院动物科学学院,江苏省农业科学院兽医研究所

基金: “十二五”国家科技支撑计划(编号:2015BAD12B04),国家自然科学基金(编号:31572503)

分类号: S852.4

DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.11.046

页码: 204-210

总页数: 7

文件大小: 1300K

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