基于iTRAQ技术的猪精子释放蛋白Transwell小室分离及差异性分析

论文摘要

【目的】探索分离猪附睾头部精子释放蛋白的新方法,确定释放蛋白的功能特点及信号通路。【方法】利用Transwell小室独特的共培养系统,充分利用0.4μm聚碳酸酯膜分离精子释放的蛋白。使用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术分析释放的蛋白,对鉴定到的差异蛋白,使用GO数据库描述蛋白功能,运用KEGG数据库Pathway分析,确定差异蛋白最主要的生化代谢途径和信号转导途径,同时用IPR数据库对差异蛋白的结构域进行非冗余分析。【结果】Transwell小室上、下室共鉴定到542种蛋白,其中,464种蛋白表达量显著上调,78种蛋白表达量显著下调。差异蛋白主要参与跨膜转运、离子运输、ATP合成等生物过程。差异蛋白主要参与的信号通路为醛固酮调节的钠盐吸收、囊泡转运、EGFR酪氨酸激酶抑制等。硫氧还蛋白、半乳糖、糖苷水解酶等构成差异蛋白的主要结构域,为蛋白发挥作用提供结构基础。【结论】Transwell小室分离蛋白的方法切实有效,iTRAQ技术在附睾头部精子释放蛋白中成功鉴定出差异蛋白,差异性分析及功能注释为探究差异蛋白参与的生命活动及功能奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 样品采集
•   1.2 试剂与仪器
•   1.3 附睾头部精子的采集
•   1.4 释放蛋白的分离
•   1.5 总蛋白提取
•   1.6 蛋白质检
•   1.7 iTRAQ标记
•   1.8 质谱数据分析
•   1.9 生物信息学分析
• 2 结果与分析
•   2.1 蛋白SDS-PAGE电泳
•   2.2 蛋白质谱定量分析和鉴定
•   2.3 精子释放蛋白差异性分析
•   2.4 差异蛋白GO功能注释分析
•   2.5 差异蛋白KEGG富集分析
•   2.6 差异蛋白结构域分析
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 葛晨玲,李珣,王晓晔,梁莹莹,陈志英,杜倩,唐胤晟,胡传活

关键词: 附睾,小室,差异蛋白

来源: 华南农业大学学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 广西大学动物科学技术学院,广西畜禽品种改良站

基金: 国家自然科学基金(31660700)

分类号: Q953

页码: 29-37

总页数: 9

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