猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

为了鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）N蛋白抗原表位,本研究将PRRSV N蛋白进行了原核表达和纯化,并用纯化后的N蛋白免疫BALB/c小鼠。利用淋巴瘤细胞融合技术和间接ELISA抗体筛选方法,制备获得4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D10、3G12、6E2和6F4,Western-blot和IFA鉴定其均能与PRRSV特异性反应。4株单抗均属于Ig G1亚类,轻链均为κ链。ELISA结果显示,3D10、3G12、6E2和6F4之间的叠加系数均在50%以上。选择N蛋白3个主要抗原表位合成肽进行ELISA检测,证明4株单抗识别的抗原表位均为30～52 aa,提示4株单克隆抗体亲和力可能存在一定差异,为该病毒研究提供了重要材料。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 PRRSV N蛋白的纯化与鉴定
•   1.3 小鼠免疫
•   1.4 细胞融合与筛选
•   1.5 间接ELISA抗体方法
•   1.6 杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定
•   1.7 单克隆抗体的Western-blot鉴定
•   1.8 单克隆抗体的间接免疫荧光试验 （IFA）
•   1.9 单抗亚类与型的鉴定
•   1.1 0 叠加ELISA分析单克隆抗体表位
•   1.1 1 间接ELISA分析抗原表位
• 2 结果
•   2.1 重组N蛋白的制备
•   2.2 免疫小鼠血清PRRSV抗体效价的测定
•   2.3 阳性杂交瘤细胞株的建立
•   2.4 杂交瘤细胞株分泌单抗的稳定性
•   2.5 单克隆抗体ELISA抗体效价
•   2.6 Western-blot鉴定单抗特异性
•   2.7 间接免疫荧光试验 （IFA）
•   2.8 单抗亚类与型的鉴定
•   2.9 叠加ELISA分析单克隆抗体表位
•   2.1 0 间接ELISA分析抗原表位
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 于洁,刘雪威,白娟,宋中宝,姜平

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒,单克隆抗体,蛋白

来源: 中国兽医科学 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

基金: 江苏省重点研发计划重点项目(BE2018386),国家生猪产业技术体系专项(CARS-36),国家自然科学基金项目(31672565)

分类号: S852.651

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0101

页码: 821-827

总页数: 7

文件大小: 1373K

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