导读:本文包含了毕赤酵母表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,病毒,蛋白,诱导,溶菌酶,颗粒,基因。
毕赤酵母表达论文文献综述
仝光杰,王文伟,蔡蓓蓓,王蓓,胡海涛[1]（2019）在《人乳头瘤病毒52型L1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的优化表达、纯化及其免疫原性》一文中研究指出目的利用毕赤酵母系统表达人乳头瘤病毒52型(human papillomaviruses 52,HPV52)L1蛋白,并检测其病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的免疫原性。方法采用同义密码子替换的方法对HPV52 L1蛋白的野生型基因进行密码子优化,并在体外构建多拷贝表达质粒,经转化和筛选获得在毕赤酵母系统中高表达的HPV52 L1 VLP菌种。采用15 L发酵罐大规模培养,菌液破碎上清经阳离子交换层析和分子筛排阻层析两步法纯化,获得HPV52 L1VLP。动态光散射和透射电子显微镜观察HPV52 L1 VLP的大小和形态,假病毒中和试验检测HPV52 L1 VLP在小鼠及大鼠体内的免疫原性。结果 HPV52 L1 VLP在溶液中呈较均一的单一组分,水合粒径为91. 37 nm;镜下观察呈均一的、直径约50 nm的球状空心颗粒,大小与HPV52天然病毒颗粒相近。HPV52 L1 VLP相对分子质量约56 000,纯度达95%以上,产量为3. 6 mg/L,且可与小鼠抗HPV L1多克隆单抗发生特异性结合。HPV52 L1 VLP在小鼠体内的半数有效剂量(ED_(50))为0. 010μg,在大鼠体内诱导产生的中和抗体滴度高达106。结论于毕赤酵母系统成功表达了HPV52 L1 VLP,且具有良好的免疫原性,为相关预防性疫苗的研发奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年12期）
颜倩倩,陶妍,李雯,谢晶,钱韵芳[2]（2019）在《鲤鱼c型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性》一文中研究指出c型溶菌酶是鱼类在先天性免疫机制中抵抗细菌感染的关键性免疫蛋白。鲤鱼(Cyprinus carpio)c型溶菌酶具有鱼类c型溶菌酶的基本特征:N端含有信号肽;C端成熟肽中的Glu35和Asp51构成酶的活性位点,并含有8个保守的半胱氨酸残基。本研究通过反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)获得鲤鱼c型溶菌酶成熟肽的c DNA,该序列全长381 bp,编码由127个氨基酸残基组成的成熟肽;通过PCR在其5'端添加限制性内切酶XhoⅠ位点和6×His标签、3'端添加XbaⅠ位点;获得的目的基因,即鲤鱼c型溶菌酶基因(common carp c-type lysozyme, CLYc),与表达载体pPICZαA连接后电转至毕赤酵母(Pichia pastoris) X-33,通过高浓度博来霉素筛选高拷贝酵母转化子;在29℃、250 r/min条件下,使用1.5%甲醇诱导表达120 h,表达上清液经固化金属离子亲和层析(immobilized metal affinity chromatography, IMAC)纯化,获得分子量为15.4 kD的重组蛋白,表达量约为40 mg/L;Western blot分析和MALDI-TOF/TOF质谱鉴定表明该重组蛋白为预期的目的重组蛋白CLYc。抑菌试验证明,含重组CLYc的培养上清液对革兰氏阳性的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)以及革兰氏阴性的大肠杆菌(Escherichia coli)和副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)具有明显的抑菌活性;纯化的重组CLYc对单增李斯特菌、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌和副溶血性弧菌显示了相同的最小抑菌浓度。本研究结果为鱼类来源的天然抗菌剂的开发和生产提供了技术途径。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年11期）
苟万晓,范延超,吕昂,胡元森[3]（2019）在《黑曲霉ZF-34脂肪酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出为了使黑曲霉脂肪酶基因在毕赤酵母中表达并实现高密度发酵生产,采用PCR方法从黑曲霉基因组DNA中扩增出脂肪酶基因Lip A,测序结果表明Lip A基因编码区全长894 bp,编码297个氨基酸,与其他黑曲霉脂肪酶基因列序相似性高达99%。将Lip A基因连接到质粒p PIC9K上,构建了p PIC9K-LipA重组载体。将该重组载体转化到毕赤酵母GS115中,经甲醇诱导,该酶基因在酵母细胞中获得活性表达,并能将酶蛋白分泌到胞外。重组菌株GS115/p PIC9K-LipA经100 L发酵罐发酵144 h,菌体湿重高达100. 5 g/L,发酵液中酶活性达1 950 U/m L。(本文来源于《河南工业大学学报(自然科学版)》期刊2019年05期）
姚昌阳,谢兴欢,蒋思婧,马立新,康立新[4]（2019）在《裂解多糖单加氧酶在毕赤酵母中的异源表达》一文中研究指出裂解多糖单加氧酶(lysate polysaccharide monooxygenase,LPMO)是一类含铜氧化酶,在还原型辅因子存在下可氧化裂解纤维素,对纤维素的降解起重要作用.优化并合成黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)lpmo基因,构建pPICZ_αA-Pclpmo表达载体,电转毕赤酵母GS115实现了分泌表达,重组蛋白表达量为450 mg/L.重组PcPLMO对微晶纤维素催化活性为14 U/mL,对碱预处理的秸秆纤维活性较高,为24 U/mL.PcPLMO具有较好的热稳定性,分别在80、90、100℃保温60 min,残留活性为80%、62%与48%.经Endo H脱糖基化分析,PcLPMO发生了高度糖基化修饰,从而促进了酶的高温热稳定.相关结果可为LPMO协同纤维素酶降解纤维素的应用提供参考.(本文来源于《湖北大学学报(自然科学版)》期刊2019年06期）
曹丁,李学优,昝继清,兰玲峰,甘祥武[5]（2019）在《鸡α干扰素真核表达载体的改造及在毕赤酵母中的分泌表达》一文中研究指出旨在利用毕赤酵母密码子的偏好性和遗传简并性,将鸡α干扰素优化基因片段cIFN-α2连入毕赤酵母表达载体pPIC9k,再经重迭延伸PCR方法去除重组质粒的5′端非翻译区多余的8个核苷酸GGATCCAA,使其与毕赤酵母AOX1(醇氧化酶)的5′端非翻译区的序列完全一致,构建并筛选重组毕赤酵母,并进行摇瓶诱导表达试验。将表达产物用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行检测,并用微量病变抑制法检测其抗病毒效价。抗病毒活性检测结果显示,天然基因、优化基因、质粒5′端非翻译区改造后的优化基因重组质粒表达产物的抗病毒效价分别为10~5、10~6、1.5×10~6 U/mL。鸡α干扰素基因优化后的抗病毒效价提高了10倍,对质粒5′端非翻译区进行进一步改造后,表达蛋白的抗病毒活性提高了50%,从而为鸡α干扰素的工业化生产奠定了基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年19期）
水燕,管政兵,叶俊贤,史永红,刘国锋[6]（2019）在《克氏原螯虾i-型溶菌酶在巴斯德毕赤酵母中的高效胞外表达及其抑菌活性（英文）》一文中研究指出为开发虾类来源的溶菌酶,本研究建立了利用巴斯德毕赤酵母表达系统高效分泌表达重组克氏原螯虾无脊椎动物型溶菌酶1(简称"pc-iLys1")的方法。经密码子偏好性优化后的pc-iLys1 cDNA在毕赤酵母菌株SMD1168中成功地实现胞外分泌表达,重组蛋白分子质量约为17.1 kDa。在摇瓶中对诱导表达条件进行优化,获得的相对最佳表达条件为:培养基pH 7.0,培养温度28℃,甲醇体积分数1.5%,诱导表达时间96 h。采用该优化条件,进一步利用分批补料策略在5 L发酵罐中进行高密度培养诱导,120 h后获得重组pc-iLys1,其酶活性达到2 052.6 U/mL,最终,酵母干细胞质量浓度达98.1 g/L。抑菌实验表明,重组pc-iLys1对多种革兰氏阳性和阴性细菌均具有明显的抑制活性。总之,本研究实现了克氏原螯虾i-型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达,为其大规模制备打下了基础。(本文来源于《浙江大学学报(农业与生命科学版)》期刊2019年05期）
蔡蓓蓓,王文伟,仝光杰,王蓓,楼觉人[7]（2019）在《人乳头瘤病毒31型L1病毒样颗粒在毕赤酵母中的表达及其免疫原性初步评价》一文中研究指出目的在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)31型L1病毒样颗粒(virus-like particles,VLP),并初步评价其免疫原性。方法构建HPV31 L1四拷贝重组表达质粒,电转化毕赤酵母KM71,甲醇诱导表达蛋白。将重组菌经30 L发酵罐发酵,产物分离纯化,用纯化样品免疫小鼠,采用半数有效剂量(median effective dose,ED50)初步评价表达产物的免疫原性。结果经双酶切鉴定,四拷贝重组表达质粒构建正确。表达产物可与小鼠抗HPV L1单抗发生特异性结合。纯化产物在透射电镜下为直径60 nm的VLP结构,相对分子质量约55 000,纯度达95%以上。小鼠体内效价ED50值为0. 018μg。结论成功在毕赤酵母中表达了HPV31型L1 VLP,其在小鼠体内具有良好的免疫原性。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年10期）
李浩杰,杨雪珍,蓝文康,张伟崇,王晔[8]（2019）在《重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究》一文中研究指出为了构建一种胞内表达人溶菌酶(hLZ)的毕赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通过酶切位点插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,获得pPICZαA-hLZ。线性化该表达载体,电转化并筛选阳性克隆,甲醇诱导重组蛋白表达后,进行纯化和活性分析。结果表明,通过亲和层析树脂(Ni-IDA)从培养液上清纯化目标蛋白,SDS-PAGE表明目标蛋白为14.7 kDa左右,Western-blot结果表明目标蛋白即为带有6个His标签的重组人溶菌酶,BCA法测定表明纯化后的蛋白浓度为0.121 mg/mL;溶壁微球菌抑菌试验表明该重组人溶菌酶具有部分生物活性。此研究成功地获得了胞内表达且具有部分生物活性的人溶菌酶毕赤酵母工程菌,为重组人溶菌酶作为饲料添加剂开发应用奠定了一定的基础。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年10期）
林婷,黄义德[9]（2019）在《单链抗体在毕赤酵母中表达的研究进展》一文中研究指出抗体是现代医学中一种十分重要的工具,被广泛用于生物学实验室研究、疾病诊断和临床治疗等。单链抗体是第叁代抗体的一种,具有相对分子质量小、组织渗透性好、特异性强、免疫原性低及半衰期短等特点。目前,单链抗体在医学方面主要用于抗肿瘤、抗病原生物、自身免疫疾病研究、心血管疾病研究以及抗辐射损伤等;在食品安全方面主要用于食品毒素检测、农兽药物残留检测以及食品中重金属污染检测等。因而,单链抗体的获得与制备至关重要。本文主要综述了单链抗体的发展及应用、单链抗体在毕赤酵母中的重组表达及提高单链抗体在毕赤酵母中表达量可采取的策略。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2019年05期）
阎光宇,余蕾,何建林,孙继鹏[10]（2019）在《牡蛎金属硫蛋白重组毕赤酵母菌株高效诱导表达工艺研究》一文中研究指出金属硫蛋白(MT)作为一类广泛存在并高度可诱导的多功能内源性蛋白,具有重金属解毒、抗辐射、清除自由基等功能,近年来已成为研究和开发的热点。为解决MT原料来源的瓶颈问题,本文以一株海洋源MT重组巴斯德毕赤酵母菌株(GS~(-1)15-MT)为研究对象,对其进行培育条件(温度、pH、溶氧、接种量)、诱导表达条件(溶氧、甲醇浓度、菌株生产状况、诱导时间、诱导金属及浓度)综合优化,以获得MT高效表达最佳工艺。结果显示,GS~(-1)15-MT的最佳生长条件为培育温度30℃,培养基初始pH为9,摇床转速240r·min~(-1),接种量4%;最佳MT诱导发酵条件为摇床转速为220r·min~(-1),甲醇浓度为5%,菌液OD_(600)为9.7,诱导24h,Cu~(2+)诱导浓度50μmol·L~(-1)。在以上优化条件下,MT表达量达0.328mg·mL~(-1)。本结果可为海洋源MT的规模化工业生产提供一定理论依据。(本文来源于《生物产业技术》期刊2019年05期）
毕赤酵母表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
c型溶菌酶是鱼类在先天性免疫机制中抵抗细菌感染的关键性免疫蛋白。鲤鱼(Cyprinus carpio)c型溶菌酶具有鱼类c型溶菌酶的基本特征:N端含有信号肽;C端成熟肽中的Glu35和Asp51构成酶的活性位点,并含有8个保守的半胱氨酸残基。本研究通过反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)获得鲤鱼c型溶菌酶成熟肽的c DNA,该序列全长381 bp,编码由127个氨基酸残基组成的成熟肽;通过PCR在其5'端添加限制性内切酶XhoⅠ位点和6×His标签、3'端添加XbaⅠ位点;获得的目的基因,即鲤鱼c型溶菌酶基因(common carp c-type lysozyme, CLYc),与表达载体pPICZαA连接后电转至毕赤酵母(Pichia pastoris) X-33,通过高浓度博来霉素筛选高拷贝酵母转化子;在29℃、250 r/min条件下,使用1.5%甲醇诱导表达120 h,表达上清液经固化金属离子亲和层析(immobilized metal affinity chromatography, IMAC)纯化,获得分子量为15.4 kD的重组蛋白,表达量约为40 mg/L;Western blot分析和MALDI-TOF/TOF质谱鉴定表明该重组蛋白为预期的目的重组蛋白CLYc。抑菌试验证明,含重组CLYc的培养上清液对革兰氏阳性的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)以及革兰氏阴性的大肠杆菌(Escherichia coli)和副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)具有明显的抑菌活性;纯化的重组CLYc对单增李斯特菌、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌和副溶血性弧菌显示了相同的最小抑菌浓度。本研究结果为鱼类来源的天然抗菌剂的开发和生产提供了技术途径。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毕赤酵母表达论文参考文献
[1].仝光杰,王文伟,蔡蓓蓓,王蓓,胡海涛.人乳头瘤病毒52型L1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的优化表达、纯化及其免疫原性[J].中国生物制品学杂志.2019
[2].颜倩倩,陶妍,李雯,谢晶,钱韵芳.鲤鱼c型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性[J].农业生物技术学报.2019
[3].苟万晓,范延超,吕昂,胡元森.黑曲霉ZF-34脂肪酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达[J].河南工业大学学报(自然科学版).2019
[4].姚昌阳,谢兴欢,蒋思婧,马立新,康立新.裂解多糖单加氧酶在毕赤酵母中的异源表达[J].湖北大学学报(自然科学版).2019
[5].曹丁,李学优,昝继清,兰玲峰,甘祥武.鸡α干扰素真核表达载体的改造及在毕赤酵母中的分泌表达[J].江苏农业科学.2019
[6].水燕,管政兵,叶俊贤,史永红,刘国锋.克氏原螯虾i-型溶菌酶在巴斯德毕赤酵母中的高效胞外表达及其抑菌活性（英文）[J].浙江大学学报(农业与生命科学版).2019
[7].蔡蓓蓓,王文伟,仝光杰,王蓓,楼觉人.人乳头瘤病毒31型L1病毒样颗粒在毕赤酵母中的表达及其免疫原性初步评价[J].中国生物制品学杂志.2019
[8].李浩杰,杨雪珍,蓝文康,张伟崇,王晔.重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究[J].家畜生态学报.2019
[9].林婷,黄义德.单链抗体在毕赤酵母中表达的研究进展[J].生物技术通讯.2019
[10].阎光宇,余蕾,何建林,孙继鹏.牡蛎金属硫蛋白重组毕赤酵母菌株高效诱导表达工艺研究[J].生物产业技术.2019
论文知识图
