LncRNA HOTAIR调控miR-130a-3p对骨关节炎软骨细胞增殖和分化的影响

论文摘要

目的探讨长链非编码 RNA（lncRNA）HOX 转录物反义 RNA（HOTAIR）对骨关节炎（osteo-arthritis,OA）软骨细胞增殖和分化的影响及机制。方法采用 RT-PCR 检测 OA 患者和半月板损伤患者膝关节软骨组织中 HOTAIR 的表达水平;在 OA 软骨细胞中转染 siRNA-HOTAIR（si-HOTAIR）或过表达 HOTAIR 的慢病毒载体（LV- HOTAIR）,采用 CCK8 法检测细胞增殖情况,RT-PCR 和 western blot 检测 BMP2、BMP4、BMP6 和 RUNX2 mRNA 和蛋白表达水平。结果 HOTAIR 在 OA 患者膝关节软骨组织中的表达水平明显高于半月板损伤患者[（3.217±0.650）vs.（1.161±0.316）,P=0.000];同时在 OA 软骨细胞的表达水平明显高于正常软骨细胞[（1.467±0.121）vs.（1.030±0.119）,P=0.012]。在 OA 软骨细胞转染 si-HOTAIR 后,OA 软骨细胞增殖能力增加[（1.190±0.099）vs.（0.83±0.057）,P=0.005],分化相关分子 BMP2、BMP4、BMP6、RUNX2 mRNA 和蛋白表达水平明显升高[（1.805±0.078）vs.（1.050±0.132）,（1.635±0.092）vs.（1.023±0.068）,（1.715±0.064）vs.（1.053±0.119）,（1.702±0.068）vs.（1.003±0.075）,P=0.001,0.000,0.001,0.000]。在 OA 软骨细胞转染 LV-HOTAIR 后,OA 软骨细胞增殖[（0.645±0.064）vs.（0.890±0.028）,P=0.004] 和分化[（0.704±0.071）vs.（1.009±0.088）,（0.636±0.074）vs.（1.003±0.031）,（0.645±0.068）vs.（1.014±0.068）,（0.693±0.071）vs.（0.994±0.044）,P=0.009,0.001,0.003,0.003] 明显抑制。miR-130a-3p 在 OA 软骨细胞的表达水平明显低于正常软骨细胞[（0.463±0.104）vs.（0.990±0.092）,P=0.003],同时 HOTAIR 和 miR-130a-3p 在 OA 患者膝关节软骨组织中的表达呈负相关（R=-0.977,P=0.000）,双荧光素酶结果显示 HOTAIR 能够靶向结合 miR-130a-3p[（0.970±0.065）vs.（0.560±0.038）,P=0.001]。在共转染 si-HOTAIR 和 miR-130a-3p inhibitors 后能够逆转低表达 HOTAIR 对 OA 软骨细胞增殖和分化的影响（P 均>0.05）,然而在共转染 si-HOTAIR 和 miR-130a-3p mimics 后能够进一步加强低表达 HOTAIR 对 OA 软骨细胞增殖[（1.505±0.078）vs.（1.190±0.099）,P=0.000] 和分化[（2.510±0.085）vs.（1.820±0.085）,（2.175±0.134）vs.（1.660±0.113）,（2.050±0.212）vs.（1.690±0.057）,（2.400±0.141）vs.（1.691±0.028）,P=0.000,0.000,0.000,0.000] 的促进作用。讨论 HOTAIR 在 OA 患者和软骨细胞中均明显高表达,并能够通过靶向调控 miR-130a-3p 抑制 OA 软骨细胞增殖和分化。HOTAIR 可能成为 OA 患者治疗的一个潜在靶点。

论文目录

• 材料与方法
•   一、纳入标准与排除标准
•     1. 纳入标准:
•     2. 排除标准:
•   二、组织标本
•   三、主要试剂
•   四、方法
•     1. 细胞培养与转染:
•     2. qRT-PCR:
•     3. CCK-8 方法检测细胞增殖:
•     4. Westrn blot 法:
•     5. 双荧光素酶报告:
•   五、统计学处理
• 结 果
•   一、HOTAIR 在 OA 软骨组织和细胞中的表达水平
•   二、HOTAIR 对 OA 软骨细胞增殖和分化的影响
•   三、HOTAIR 对 OA 软骨细胞 miR-130a-3p 表达的影响
•   四、HOTAIR 能够靶向结合 miR-130a-3p
•   五、HOTAIR 通过调控 miR-130a-3p 影响 OA 软骨细胞增殖和分化
• 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孙强,赵轶男,王远瑞,张大伟

关键词: 骨关节炎,细胞增殖,细胞分化,软骨细胞

来源: 中国骨与关节杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 外科学

单位: 空军军医大学第一附属西京医院骨科

分类号: R684.3

页码: 931-937

总页数: 7

文件大小: 1084K

下载量: 145