导读:本文包含了肥大分化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,肾小管,软骨,晚期,内分泌,产物,蛋白。
肥大分化论文文献综述
廖焕金,李莉[1]（2019）在《肥大细胞分化与成熟》一文中研究指出肥大细胞(mast cell, MC)来源于骨髓造血干细胞,在骨髓中多次分化后成为肥大细胞祖细胞(mast cell progenitor, MCp),然后释放入外周血液循环系统。MCp在自身表达的趋化因子及其受体、整合素和相关因素的作用下,快速迁移至外周组织定居、分化和成熟,进而维持机体的稳态或参与疾病的发生、发展。文章就MC在骨髓内外分化、迁移和成熟的过程作一综述,以期为MC相关研究提供理论参考。(本文来源于《现代免疫学》期刊2019年02期）
余畋余[2]（2019）在《大鼠骨髓来源肥大细胞的体外分化及肠源性肥大细胞介导巨噬细胞极化调控炎症性肠病的机制研究》一文中研究指出肥大细胞(MC)作为一类固有免疫细胞,不仅能够参与免疫监视,同时亦在宿主对入侵病原体的早期先天免疫反应的启动中发挥关键作用;MC起源于骨髓中的造血干细胞,随后在其所驻扎的靶器官中发育成熟,最终响应于特定组织微环境而产生特异的表型和功能。在组织中,MC仅占所有免疫细胞总数的10%,因此从组织中收获到的MC数量是十分有限的。近几十年,为了获取充足的MC进行相关的科学研究,科学家一直在探索体外培养大量MC的方法。随着技术的进步,小鼠MC的培养方法已经十分成熟;然而,由于大鼠MC体外培养存在诸多困惑和难点,至今为止,报道大鼠骨髓来源MC(Bone Marrow-Derived MC,BMMC)培养方案的文献依然较少。相比小鼠MC,大鼠MC更适合研究其对抵抗蠕虫旋毛虫,华支睾吸虫等寄生虫感染的潜在机制,这得益于大鼠对于这几种寄生虫的易感性。通过一系列摸索,我发现了一种快速,有效,简单的大鼠BMMC培养方法。其中,大鼠重组干细胞生长因子(Rat Recombinated Stem Cell Factor,rr SCF)在该培养过程中发挥了关键性的作用。与先前的老方案相对比,通过我的方法获取的大鼠BMMC在分化,增殖,寿命和功能方面均表现出显着的优势;同时,其具有粘膜型MC表型,这有助于阐明粘膜型MC参与各种疾病(如哮喘、炎症性肠病等)的作用机制。另外,胃肠道MC是重要的免疫细胞之一,其大部分位于胃肠道固有层,约占总免疫细胞的2%-3%,属于粘膜型MC。在肠道中,MC可调节诸多生理功能,例如改变血流量,调节平滑肌收缩和肠蠕动,影响肠粘膜分泌功能以及促进先天和适应性免疫应答。MC重点参与协调炎症性肠病(IBD)的炎症粘膜中的上皮反应,当肠道受到炎症侵袭时,粘膜会大量释放SCF、MMP-9等物质,这些物质具有趋化MC富集的作用。而我的研究发现,在无病变的情况下,肠道内MC数量较少,甚至在IBD发病炎症期,其水平仍未见明显上升;然而,在炎症恢复期,MC数量得以显着的上调。另外,若炎症恢复期肠道内缺乏MC富集,将严重影响肠组织的稳态,影响肠道内免疫平衡,进而破坏肠组织的自我修复功能,最终维持炎症水平;因此,MC富集对于IBD疾病的组织的恢复过程至关重要。随着研究的进展,我发现MC更倾向于发挥间接调节的作用,而非直接调节作用。其中,巨噬细胞是其调节的靶点之一。巨噬细胞有两种极化的形式,分别为M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,前者具有促炎作用,后者则具有抑炎作用;我发现肠道内富集的MC显着影响巨噬细胞的极化过程;在IBD修复期,其通过促使更多的M2型巨噬细胞富集,同时减少M1型巨噬细胞的数量,最终发挥炎症抑制的作用。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2019-03-01）
欧艺虹,姜耀东,李琦,庄永江,党强[3]（2018）在《肥大细胞通过上调p21促进前列腺癌神经内分泌分化及增加对多西他赛化疗的抵抗性》一文中研究指出目的探索肥大细胞浸润对前列腺癌细胞神经内分泌分化(NED)及多西他赛化疗敏感性的影响。方法利用Transwell小室将人前列腺癌细胞系(LNCa P和C4-2)与人肥大细胞系(HMC-1)进行共培养,通过sh-AR慢病毒沉默C4-2细胞AR的表达,通过sh-p21质粒(p LKO.1-sh-p21)和p21过表达质粒(p CMV-p21)转染分别沉默和过表达前列腺癌细胞p21,倒置显微镜观察LNCa P和C4-2细胞的形态变化,MTT实验及克隆形成实验检测LNCa P和C4-2的细胞增殖能力,CCK8实验检测C4-2在多西他赛化疗下的细胞活性,RT-q PCR实验及Western blot实验分别检测前列腺癌细胞细胞神经内分泌标志物、AR、p21的m RNA及蛋白表达量。结果 HMC-1细胞共培养可以增加LNCa P和C4-2细胞的NE表型表达,抑制LNCa P和C4-2细胞的增殖能力,并上调p21的表达(P<0.05)。P21通过不依赖AR的信号通路正向调控前列腺癌细胞NED,敲除p21表达可部分逆转HMC-1共培养促进NED的作用。同时,肥大细胞共培养后的前列腺癌细胞对多西他赛化疗的抵抗性增加(P<0.05),敲除p21部分逆转了肥大细胞提高多西他赛化疗抵抗性的作用。结论肥大细胞可以部分通过上调p21表达促进前列腺癌细胞NED以及增加对多西他赛化疗的抵抗性。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2018年06期）
欧艺虹[4]（2018）在《肥大细胞通过上调p21促进前列腺癌神经内分泌分化及增加对多西他赛化疗的抵抗性》一文中研究指出研究背景:前列腺癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一。晚期前列腺癌在雄激素剥夺治疗(androgen deprivation therapy,ADT)后出现的去势抵抗型前列腺癌(castrate-resistant prostate cancer,CRPC)预后差,而应用于转移性 CRPC(mCRPC)化疗的多西他赛等药物的效果十分有限。神经内分泌分化(neuroendocrine differentiation,NED)是前列腺癌的常见特征,有研究发现ADT可导致前列腺癌细胞的NED,而NED与化疗抵抗性相关。文献报道肥大细胞可以通过促进血管生成,组织重塑等参与肿瘤的发生发展。我们之前的研究证明了 ADT可以募集肥大细胞并抑制雄激素受体(androgen receptor,AR)信号通路促进前列腺癌的NED,但CRPC常不依赖雄激素和AR发生进展和转化。因此本研究旨在进一步探索前列腺癌NED的发生机制。研究方法:本课题采用Transwell小室进行前列腺癌细胞(LNCaP和C4-2)与肥大细胞(HMC-1)的共培养,观察共培养的前列腺癌细胞的形态改变,MTT实验和克隆形成实验检测前列腺癌细胞活性和增殖能力的影响,CCK8实验检测肥大细胞对前列腺癌细胞多西他赛化疗敏感性的影响,RT-qPCR、western blot实验检测前列腺癌细胞相关mRNA及蛋白表达量。结果:1、前列腺癌细胞与HMC-1共培养后出现NE样形态改变,NE标志物(NSE,chrA,SYP)mRNA及NSE的蛋白表达水平明显上调。2、MTT实验结果发现共培养的前列腺癌细胞生长受到抑制,克隆形成实验提示共培养的前列腺癌细胞克隆形成数量减少。CCK8实验结果提示共培养后发生NED的C4-2细胞在多西他赛化疗后细胞活性受损程度减小。3、Western blot实验提示HMC-1共培养的前列腺癌细胞的AR的表达受到了抑制,同时p21蛋白水平明显上调。C4-2细胞中敲除AR后,NSE表达上调,但p21表达下调;敲除p21后,AR表达水平未受到影响,而NSE表达明显下调。C4-2细胞过表达p21后NSE表达水平上调,同时诱导NE样形态改变。4、进一步RT-qPCR和western blot实验发现在C4-2细胞中敲除p21可以部分逆转肥大细胞共培养导致的NSE上调以及NE样形态改变。CCK8实验结果提示敲除p21也可以部分逆转肥大细胞共培养后出现NED的C4-2细胞的多西他赛化疗抵抗性。结论:本研究验证了肥大细胞浸润可以促进前列腺癌细胞NED,发现了肥大细胞可抑制前列腺癌细胞的增殖能力,降低前列腺癌细胞对多西他赛治疗的敏感性。肥大细胞导致前列腺癌细胞的p21表达上调,p21可以通过AR非依赖的信号通路调控NED,敲除p21可以部分逆转肥大细胞导致的前列腺癌细胞的NED和多西他赛化疗抵抗性,证明肥大细胞部分通过上调p21促进前列腺癌细胞的NED及增加多西他赛化疗抵抗性,针对p21信号通路的靶向治疗可能为前列腺癌临床治疗方法带来新的思路。(本文来源于《南方医科大学》期刊2018-03-26）
赵丹丹,唐成林,黄思琴,罗翱,张安宁[5]（2017）在《电针干预对大鼠腓肠肌适应性肥大及肌卫星细胞增殖分化的影响》一文中研究指出目的:观察不同时长电针干预对大鼠腓肠肌适应性肥大及腓肠肌中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达及配对盒转录因子7(Pax 7)、成肌分化抗原(MyoD 1)、肌细胞生成素(MyoG)、肌球蛋白重链-Ⅰ(Myh 7)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad 3mRNA表达的影响,探讨电针诱导骨骼肌适应性肥大的相关机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、电针2周组、电针4周组和电针8周组,每组6只。除空白对照组,其余3组大鼠予以右侧"足叁里"和"环跳"电针干预10min,每日1次,每周6次,分别持续干预2、4和8周。称重后计算各组大鼠腓肠肌湿重比,HE染色后测定腓肠肌肌纤维截面积及直径,免疫荧光标记法观察腓肠肌中PCNA蛋白的表达改变,实时荧光定量PCR法检测腓肠肌中Pax 7、MyoD 1、MyoG、Myh 7、TGF-β1、Smad 3mRNA相对表达量。结果:与空白对照组相比,腓肠肌中PCNA蛋白表达在电针2周组和电针4周组明显增多;大鼠腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径及腓肠肌Pax 7、MyoD 1、MyoG、Myh 7、TGF-β1mRNA相对表达量随电针干预时间延长呈现先升高后降低的趋势,与空白对照组比较,Pax 7和TGF-β1mRNA相对表达量在干预2周时到达峰值(P<0.01),肌湿重比、肌纤维截面积和直径及MyoD 1、MyoG、Myh 7mRNA相对表达量在干预4周时到达峰值(P<0.01);腓肠肌中Smad 3mRNA相对表达量随电针干预时间延长呈现先下降后上升的趋势,在电针4周组到达低峰(P<0.01)。结论:电针干预"足叁里"和"环跳"诱导大鼠腓肠肌产生时序性适应性肥大的改变可能是通过上调腓肠肌中Pax 7、PCNA、TGF-β1、MyoD 1、MyoG、Myh 7的表达,并下调Smad 3的表达,促进肌卫星细胞的增殖、成肌分化和肌管的终末分化,增加电针侧腓肠肌质量、肌纤维面积和直径而实现的。(本文来源于《针刺研究》期刊2017年06期）
段娜[6]（2016）在《晚期氧化蛋白产物诱导人近端肾小管上皮细胞肥大及间质转分化的机制研究》一文中研究指出肾小管间质纤维化是各种慢性肾脏疾病发生发展的共同必经途径及必然归宿,以细胞外基质过度沉积、肾小管萎缩及成纤维细胞增生为特征,其病理过程分为以下多个环节：氧化应激反应、炎症刺激、调节间质纤维化细胞因子失衡等。各种原发或继发肾脏疾病如：原发性肾小球肾炎、良性肾小动脉硬化症、糖尿病肾病、梗阻性肾病等若未得到及时有效诊治,最终均可引起肾功能不同程度下降,逐步发展至尿毒症期。肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)是肾脏纤维化发生发展的必经环节,越来越多的研究证据表明肾小管上皮细胞EMT在肾脏纤维化中起至关重要的作用。既往研究将EMT分为叁种类型,其中第二类的EMT为上皮细胞向组织成纤维细胞转分化,与组织再生、损伤修复及纤维化有关。在创伤愈合及组织再生时,此种类型由炎症刺激诱导,当炎症因素解除后,该型EMT即及时停止。但是当炎症反应持续存在时EMT亦不能自行停止,并最终引起器官纤维化过程。上皮细胞在多种因素影响下发生EMT时,分化成熟的上皮细胞间的粘附性丧失、同周围细胞基质的连接减少,细胞获得更强的迁移及运动功能、失去上皮细胞标记蛋白,如上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、角蛋白及p-连环蛋白等,而间充质细胞标记蛋白表达升高,如波形纤维蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白、及成纤维特异性蛋白-1等,最终细胞表型转变成肌成纤维细胞。而以下几种因素均可促进EMT的发生发展,转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)为公认最重要的诱导细胞因子,结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)、补体成分C3、血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)等均对EMT的发展起促进作用,而亦有研究证实肝细胞生长因子、骨形态形成蛋白-7、血管内皮生长因子等对EMT有阻断作用,而我们既往实验已证实某些中药成分如红景天、牛蒡子苷可以部分逆转足细胞的EMT进程,延缓肾脏纤维化而从而起到保护肾脏的作用。晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products, AOPPs)是由体内血浆白蛋白与次氯酸发生氧化反应后生成的含双酪氨酸及羧基官能团的蛋白交联产物。1996年首次在慢性肾功能不全的患者血浆内发现AOPPs水平显着增高。其作为一种新型的尿毒症毒素近年已被广泛研究,不仅发现在慢性肾功能不全患者体内增高、促进相关长期并发症的发生发展,且与其它如动脉粥样硬化、糖尿病、IgA肾病、老年性白内障等疾病的发病密切相关。同时,AOPPs也参与炎症反应循环,它可以激发单核-巨噬细胞呼吸爆发,介导以肿瘤坏死因子为主的促炎性细胞因子大量合成并释放,使炎症反应级联放大,引起全身的微炎症状态,是上述多种疾病的重要致病环节。CTGF(connective tissue growth factor, CTGF)是一种含有半胱氨酸的多肽,由Bradham等人首次在人脐静脉内皮发现。广泛研究已经证实,CTGF存在于人类多种的组织器官中,它具有诱导粘附、促进分化、促进细胞增生等作用,参与人体的创伤修复。CTGF在生理状态下呈基础量分泌,而病理状态下则表达升高,促进纤维化疾病的发生发展。已证实CTGF是慢性肾脏疾病进展的重要生长因子,TGF-β1可以通过各种途径使肌成纤维细胞数量显着增加,是公认的致纤维化因子。当肾脏损伤时,各种炎症因子刺激TGF-β1产生增多,TGF-β1作用于成纤维细胞使之合成分泌CTGF,而CTGF又能介导TGF-β1的成纤维化效应,促进细胞增生及细胞外基质形成,从而促进肾间质的纤维化。多种信号通路参与介导肾脏纤维化,如ILK (intergrin-linked kinase, ILK)信号通路可引起足细胞表型改变、引起足细胞向间充质细胞转分化；TGF-β/Smad则与ILK信号通路相互作用,促进ILK的表达加强间充质转分化；RhoA/ROCK、受体酪氨酸激酶-Ras／丝裂原活化的蛋白激酶(mitogenactivated protein kinases, MAPK)、Wnt等信号通路均参与肾小管上皮细胞转分化的过程。除此之外,JNK信号通路也被证实参与肾脏纤维化、心脏肥大等疾病的病程进展。在此次实验中,利用次氯酸溶液氧化BSA制备AOPPs,以人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞株)为靶细胞,给予AOPPs刺激,通过氧化应激诱导肾小管上皮细胞转分化,观察细胞因子CTGF蛋白及mRNA表达；并观察CTGF siRNA转染入HK-2细胞后细胞表型蛋白E-cadherin及vimentin及其对应mRNA表达情况、HK-2细胞肥大指数变化；并观察使用JNK抑制剂(SP600125)处理后,AOPPs诱导HK-2细胞发生氧化应激、EMT的变化情况,从而探讨AOPPs对肾小管上皮细胞EMT的影响及作用机制,为进一步抑制肾小管上皮细胞EMT、防治肾间质纤维化提供新的理论依据。一、研究目的在这项研究中,我们观察AOPPs刺激是否引起HK-2细胞(人近端肾小管上皮细胞株)的CTGF表达增加,及进一步探讨CTGF是否参与AOPPs诱导的HK-2细胞肥大和转分化。此外,我们JNK信号通路在此过程中的作用。二、研究方法1、AOPPs-BSA的制备及含量测定将牛血清白蛋白(BSA,100 mg/mL)与次氯酸溶液(HOC1,200 mmol/L)等体积混合,室温下反应30min,用PBS透析24小时以去除残余的次氯酸。制备的AOPPs样品通过Detoxi-Gel凝胶柱消除污染类毒素。所得AOPPs样品内毒素的水平经动态内毒素检测试剂盒(Sigma公司)评估低于0.025EU/m1。2、HK-2细胞的培养HK-2细胞购自美国ATCC细胞库,使用DMEM/F12培养液(含10%热灭活的胎牛血清、100 μg/mL浓度的链霉素、100 U/mL浓度的青霉素)进行培养,放置于含5%二氧化碳、37℃、饱和湿度的细胞培养箱中继续培养。3、siRNA干扰非特异性siRNA及CTGF的特异性siRNA是购自上海GenePharma公司。siRNA干扰细胞使用Lipofectamine 2000细胞转染试剂(购自美国Invitrogen公司)。CTGF的特异性siRNA为CCGACTGGAAGACACGTT.在此实验中我们使用了非特异性siRNA作为阴性对照。CTGF siRNA的干扰效果通过western-blot测定进行评估。4、RT-PCR按照试剂说明书利用TRIzo试剂(购自Invitrogen公司)提取细胞总RNA。用MMLV逆转录酶(Invitrogen, USA)逆转录合成cDNA。RT-PCR进行使用PCR扩增仪和SYBR Green荧光染料(TaKaRa, Japan)。RT-PCR的定量遵循以下反应条件：95℃预变性2min,95℃变性30s,60℃退火35s,共设置40个循环。所有数据都使用内参β-actin规范化,使用2-DDCt方法分析基因的表达水平。5、Western-blot检测(CTGF, E-cadherin, vimentin, JNK, and Phospho-JNK)细胞在RIPA缓冲液里进行溶解,溶解产物使用SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白质。然后电转移SDS-PAGE凝胶上的蛋白质。随后,加入封闭液封闭PVDF膜,放置于摇床上室温下缓慢摇动2h,加入一抗4℃下缓慢摇动孵育过夜。一抗作用结束后,PVDF膜用TBST反复漂洗,然后加入稀释好的辣根过氧化物酶(HRP)标记好的二抗室温下孵育1h。使用X光片将PVDF膜进行显影成像并扫描分析。叁、结果1、AOPPs诱导HK-2细胞CTGF的表达升高AOPPs处理组CTGF的蛋白及mRNA表达水平均高于对照组,在12小时达到最高峰,持续至24小时仍显着高于对照组。2、CTGF参与AOPP引起的HK-2细胞肥大和EMT将CTGF siRNA转染入AOPPs处理的HK-2细胞,可使CTGF蛋白表达水平显着下降。Western-blot检测及RT-PCR均显示：与non-specific siRNA干扰对照组相比,特异性CTGF siRNA转染显着逆转AOPPs引起的HK-2细胞钙粘蛋白的表达抑制和波形蛋白超表达。阻断CTGF明显下调AOPPs诱导的HK-2细胞的肥大指数。3、CTGF通过JNK信号通路调节AOPPs触发的HK-2细胞肥大和EMTAOPPs刺激诱导HK-2细胞JNK磷酸化水平升高,这表明AOPPs参与激活HK-2细胞中的JNK信号通路。JNK抑制剂(SP600125)显着阻碍了AOPPs诱导的JNK磷酸化。同时,JNK抑制剂显着地抑制AOPPs引起的HK-2细胞钙粘蛋白表达减少和CTGF、波形纤维蛋白在mRNA及蛋白水平的表达升高。此外,AOPPs诱导的HK-2细胞的肥大指数也被SP600125显着抑制。四、研究结论1、本实验再次证实AOPPs可诱导人近端肾小管上皮细胞肥大和EMT；2、本实验首次证实AOPPs引起CTGF在人近端肾小管上皮细胞表达升高,CTGF参与调节AOPPs诱导的人近端肾小管细胞肥大和EMT；3、JNK信号通路可能参与了上述过程的发生。总之,此次实验数据证明CTGF是一种新发现的晚期氧化蛋白产物诱导的人近端肾小管上皮细胞肥大细胞及转分化的调节剂,同时也表明阻断CTGF及JNK通路可能为一种新的治疗研究方向。(本文来源于《南方医科大学》期刊2016-03-18）
陈惠芳,何颖,张兰珍,刘兆宇,邹泽红[7]（2015）在《细胞因子体外诱导脐带血单个核细胞向成熟肥大细胞分化》一文中研究指出目的分离脐带血单个核细胞并进行体外定向诱导培养,获得人源化、纯度高的成熟肥大细胞。方法用重组人干细胞生长因子(rh SCF)、重组人白细胞介素6(rh IL-6)定向诱导从脐带血中分离的单个核细胞,使其分化成为成熟的肥大细胞。收集不同时间段的细胞,进行甲苯胺蓝染色并用流式细胞术检测其膜上FcεRⅠ受体,以鉴定其成熟程度。成熟的肥大细胞经过敏原激发后,检测细胞上清中的组织胺及类胰蛋白酶。结果在加入rh SCF和rh IL-6诱导2周以后,肥大细胞即开始表达FcεRⅠ受体,诱导3周后达到高峰,同时细胞质内嗜碱性颗粒增多。诱导成熟后的细胞经过敏原激发后,能有效释放类胰蛋白酶和组织胺。结论脐带血单个核细胞可定向诱导成为成熟的肥大细胞,可用于过敏原性的体外评价试验。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2015年09期）
卜阳[8]（2015）在《晚期氧化蛋白产物通过内质网应激诱导肾小管上皮细胞肥大及转分化》一文中研究指出慢性肾脏病(chronic kidney diseases, CKD)可导致终末期肾病(end-stage of renal disease, ESRD),是一个非常严重的全球性公共卫生问题。现已知肾脏纤维化主要由肾小球硬化和肾间质纤维化构成,而肾间质纤维化是各种CKD发展至终末期肾衰竭的主要病理基础和共同最后途径。近年来大量研究表明,肾功能的损害程度与肾小管间质病变的严重程度直接相关。由于肾小管间质体积大约占肾脏总体积的90%,故肾小管上皮细胞肥大为肾脏肥大的主要原因之一。已知健存肾单位代偿性肥大是慢性肾功能衰竭进行性发展机制的重要机制之一,代偿性肥大的肾小管上皮细胞出现高代谢,氧耗增加、氧自由基生成增多,进一步加重肾小管间质损伤；同时,肥大的肾小管上皮细胞通过分泌细胞因子、化学趋化因子、血管活性物质,表达粘附分子对肾细胞及单核／巨噬细胞的增生、分化、趋化起调节作用,并可转分化为成纤维细胞,直接促进肾脏纤维化的发生和慢性肾衰竭的进行性恶化。而且既往研究显示初期肾小管的适应性肥大将逐渐发展至适应不良,并导致肾小管萎缩及肾间质纤维化。综上可知,肾小管上皮细胞肥大与CKD发病机制密切相关。越来越多的研究表明,肾脏固有细胞如系膜细胞、肾小管上皮细胞等在炎症、损伤、缺氧等条件下可发生间质转分化,即失去其本身固有的细胞表型,转化成为肌成纤维细胞,进而导致肾间质的纤维化。尽管目前对肾小管上皮细胞转分化如何影响肾间质纤维化和促肾小管间质纤维化的细胞机制均存在争议,但许多研究表明肾小管上皮细胞间质转分化(epithelial-to-mesenchymal trasition, EMT)可导致肾间质纤维化,且EMT在CKD发病机理中始终起着重要的作用。因此,研究肾小管上皮细胞发生EMT的机制,阻断EMT的发生,对于干预CKD的进展具有十分重要的意义。晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products, AOPPs)是由血清蛋白与含氯氧化物在氧化应激过程中生成的一类含双酪氨酸的蛋白交联物,由Witko-Sarsat等于1996年首次报导。CKD患者体内早期即可检测到AOPPs明显增高,并且AOPPs的升高水平与肾功能损伤程度成正相关。此外,越来越多的证据也表明AOPPs可促进CKD的进展。已有研究报道AOPPs可诱导肾脏足细胞凋亡,肾小管上皮损伤,肾脏系膜细胞增生及分化。然而,尽管研究表明众多因素可诱导肾小管上皮细胞肥大及转分化,但AOPPs是否可引起肾小管上皮细胞肥大及转分化目前尚不清楚。内质网(Endoplasmic Reticulum, ER)负责新生蛋白、分泌蛋白、膜相关蛋白的正确折迭和组装,是人体细胞主要的加工厂。各种因素(比如低氧环境)可引起ER功能紊乱,导致未折迭蛋白或错误折迭蛋白在内质网膜腔内蓄积和Ca2+平衡紊乱,此类状态称之为内质网应激(ER stress, ERS)。ERS是细胞的一种自我保护机制,ERS发生未折迭蛋白反应时不仅能激活适应性通路又能激发凋亡通路。初期适度的ERS有助于增强细胞耐受应激刺激的能力,持续而严重的ERS则可能造成细胞的肥大、增生、分化甚至凋亡。如今ERS越来越受到广泛关注,ERS与多种肾脏疾病的发生发展密切相关,比如糖尿病肾病、毒物或药物引起的肾小管上皮细胞损伤、肾脏缺血再灌注损伤以及CKD等。现已有体外实验证明,AOPP可通过ERS诱导脂肪细胞炎症反应。但AOPPs是否可引起ERS及其如何通过内质网应激影响肾小管上皮细胞肥大和发生EMT仍需进一步研究。目前已有文献表明在CKD的发生发展过程中活性氧起着非常重要的作用,在CKD病人中,氧化应激状态的增高被认为是主要的致病因素之一。活性氧簇(Reactive oxygen species, ROS)能够诱导细胞出现增殖、肥大与凋亡等病理性改变。在正常生理环境下,肾脏自身会生成一些活性氧,包括超氧阴离子、过氧化氢、羟自由基等。正常情况下,体内的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶以及维生素E等可以有效的清除这些活性氧。然而当体内活性氧的产生超过抗氧化系统负荷时,氧化应激就会造成组织的损害,所以活性氧的平衡对于肾脏组织的结构及其功能有着重要作用。已知氧化应激可激活内质网应激,但其是否参与AOPPs诱导的肾小管上皮细胞肥大及转分化尚需进一步研究。基于上述研究背景,本研究拟通过在体外条件下以AOPP培养人近端肾小管上皮细胞,检测细胞周期分布的相关变化,CHOP、GRP78、α-SMA、E-cadherin、p27的蛋白表达及mRNA的表达水平变化。经NADPH氧化酶抑制剂、活性氧抑制剂(SOD)、ERS抑制剂干预细胞后检测上述各项指标的变化。从而进一步探讨AOPP是否可通过内质网应激诱导肾小管上皮细胞肥大和转分化,以及氧化应激是否参与了该过程及与ERS的关系。本实验结果将为CKD的早期防治提供新的实验依据。一.研究目的本研究的主要目的是探讨AOPPs是否可导致肾小管上皮细胞肥大和发生EMT,并研究ERS是否是AOPPs诱导肾小管上皮细胞肥大和发生EMT的主要细胞内机制之一。此外,本研究还探讨了氧化应激是否参与了此过程及与ERS的关系。本研究的结果将为早期干预治疗CKD提供新的治疗靶点。二.研究方法1. AOPP的制备AOPPs牛血清白蛋白按文献报导配制。次氯酸溶液与血清白蛋白(BSA)以140/1的摩尔比例混合,于室温下(25～30℃)反应30分钟,以PBS透析24小时去除残留次氯酸。对照组未经修饰的牛血清蛋白直接融入PBS即可。所得样品用Detoxi-Gel凝胶柱去除内毒素。所有制备的AOPP经鲎试验法检测内毒素含量均低于0.25 EU/ml。AOPP含量的测定方法：在酸性条件下340nm处测定溶液的吸光度值,以氯胺T为标准取得。2.实验细胞：人近端肾小管上皮细胞株HK-2的培养HK-2细胞于美国ATCC库购买,在37℃、5%CO2条件下的含10%热灭活胎牛血清的DMEM培养液中孵育。观察细胞长至80%以上融合时,以0.25%胰酶消化后接种至6孔培养板继续传代培养,待细胞长至70%-80%左右时用于后续实验。3. AOPP以浓度依赖的方式诱导肾小管上皮细胞肥大和发生EMT肾小管上皮细胞分别与50 μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml AOPPs共同孵育24小时,50μg/ml BSA作为阴性对照组,另设一组HK-2细胞作为空白对照。收集细胞样本,分别采用Western blot检测CHOP、GRP78、p27、α-SMA、 E-cadherin蛋白表达量及总蛋白含量,Real Time Quantitative PCR(RT-PCR)检测CHOP、GRP78、p27、α-SMA、E-cadherin的mRNA表达水平。使用流式细胞仪来分析细胞周期分布情况。4. AOPP以时间依赖的方式诱导肾小管上皮细胞肥大和发生EMT肾小管上皮细胞分别与200μg/ml AOPP、50μg/ml BSA孵育不同时间(30min、1h、3h、6h、12h、24h),收集细胞样本,采用Western blot检测CHOP、 GRP78、p27、α-SMA、E-cadherin蛋白表达量及总蛋白含量,以RT-PCR检测CHOP、GRP78、p27、α-SMA、E-cadherin 的 mRNA表达水平。使用流式细胞仪来分析细胞周期分布情况。5.ERS在AOPP诱导的肾小管上皮细胞肥大和转分化中的作用分别以200μg/ml AOPPs、50μg/ml BSA、50μmol/L salubrinal (ERS抑制剂)、0.25μmol/L thapsigargin(ERS诱导剂)预处理肾小管上皮细胞1h后再加入200μg/ml AOPP刺激细胞,共同孵育24小时。收集各组细胞样本,采用Western blot和RT-PCR检测CHOP、GRP78、p27、α-SMA、E-cadherin蛋白及mRNA表达量,以流式细胞仪检测细胞周期。6.氧化应激在AOPP诱导的肾小管上皮细胞肥大和转分化中的作用分别以200μg/ml AOPPs、50lg/ml BSA、10μmol/L DPI (NADHP氧化酶抑制剂)或200U/ml SOD(氧自由基清除剂)预处理肾小管上皮细胞1h后再加入200μg/ml AOPP刺激细胞,共同孵育24小时。收集各组细胞样本,采用Westernblot和RT-PCR检测CHOP、GRP78、p27、α-SMA、E-cadherin蛋白及mRNA表达量,以流式细胞仪检测细胞周期。叁.研究结果1. AOPP以剂量时间依赖方式诱导肾小管上皮细胞肥大本实验通过测定HK-2细胞内总蛋白含量研究AOPPs是否会引起肾小管上皮细胞肥大。实验结果表明AOPP刺激使HK-2细胞内总蛋白含量显着增加(Fig.1)。此外,本实验还检测了p27的蛋白及mRNA表达情况以及细胞周期分布情况。AOPPs刺激以剂量时间依赖性诱导p27蛋白(Fig.2, A & B)及其基因(Fig.2,C＆D)过表达,同时使得G1期细胞(Fig.2 E&F)百分比增加。尽管AOPP刺激组细胞培养24h后,细胞内p27蛋白表达量、总蛋白含量、G1期细胞数量均未达到最高值,但其表达水平均显着高于对照组(p<0.05)。并且上述改变在对照组和未经修饰的BSA组均未观察到。这些实验结果表明：p27蛋白过表达、总蛋白蓄积、G1期细胞百分比增加均与血清蛋白的晚期氧化有关。简言之,本实验通过观察AOPPs引起p27过表达及G1期细胞百分比增加,说明AOPPs可诱导肾小管上皮细胞肥大。2. AOPP以剂量时间依赖方式诱导肾小管上皮细胞转分化本实验通过检测E-cadherin和α -SMA蛋白及mRNA的表达来观察AOPPs是否可引起肾小管上皮细胞转分化。E-cadherin蛋白和mRNA的表达随着AOPP刺激浓度的增高和时间的延长而下调,a-SMA蛋白和mRNA的表达则随着AOPP刺激浓度的增高和时间的延长而上调(Fig.3)。AOPP刺激诱导α-SMA的mRNA表达水平在12h时上升达最高峰,24h时下降,但其表达水平始终显着高于对照组(P<0.05)。对照组和未经修饰的血清蛋白(BSA)组,E-cadherin和α-SMA蛋白表达水平无明显改变,这说明E-cadherin蛋白丢失和α-SMA蛋白过表达均与血清蛋白的晚期氧化相关。综上可知,AOPPs可引起肾小管上皮细胞转分化。3. AOPP诱导肾小管上皮细胞发生内质网应激反应本实验通过RT-PCR法和western-blot法检测GRP78和CHOP蛋白及mRNA表达水平,研究AOPPs刺激是否可引起内质网应激的发生。与对照组和未修饰BSA组相比,AOPPs刺激组GRP78和CHOP蛋白及其mRNA表达水平均显着增高(Fig.4)。尽管AOPP刺激组GRP78和CHOP蛋白及mRNA表达水平未在24h达最大值,但其表达水平始终明显高于对照组。以上数据说明AOPPs可诱导肾小管上皮细胞发生内质网应激。4. AOPP通过内质网应激诱导肾小管上皮细胞肥大及转分化为了研究内质网应激在AOPP诱导的肾小管上皮细胞肥大及发生转分化中的作用,本实验在各组HK-2细胞内加入试剂如下：第一组为空白对照组,第二组为白蛋白对照组,第叁组为200 μg/mLAOPPs刺激组,第四组为AOPPs+salubrinal(可激活eIF2 a,减轻细胞ERS)组,第五组为thapsigargin(细胞ERS诱导剂)组,经RT-PCR法和Western Blot法检测各组CHOP、GRP78、 p27、E-cadherin和α-SMA蛋白及mRNA表达情况。AOPP在转录和翻译水平诱导CHOP, GRP78, p27和α-SMA蛋白过表达,抑制E-cadherin蛋白表达,上述现象经ERS抑制剂处理后可部分逆转,而ERS诱导剂则可直接诱导细胞上述现象的发生(Fig.5)。此外,ERS抑制剂可部分抑制AOPP诱导的肾小管上皮细胞G1期细胞百分比和总蛋白含量的增加,而ERS诱导剂则引起肾小管上皮细胞G1期细胞百分比和总蛋白含量的增加(Fig.6)。所以,本实验结果提示AOPP通过内质网应激诱导肾小管上皮细胞肥大及转分化。5.内质网应激与氧化应激相关为研究肾小管上皮细胞内质网应激过程中氧化应激的作用,本实验在各组HK-2细胞内加入试剂如下：第一组为空白对照组,第二组为白蛋白对照组,第叁组为200 μg/mLAOPPs刺激组,第四组为AOPPs+DPI (NADPH氧化酶抑制剂)组,第五组为AOPPs+SOD(总的活性氧抑制剂)组,经RT-PCR法和Western Blot法检测各组CHOP、GRP78、p27、E-cadherin和α-SMA蛋白及mRNA表达情况。实验结果提示AOPP可下调E-cadher in的表达,NADPH氧化酶抑制剂和ROS抑制剂可部分逆转AOPP引起的HK-2细胞总蛋白含量和G1期细胞百分比的增加(Fig.6),同时也可抑制AOPP诱导的a-SMA.CHOP和GRP78的过表达(Fig.5)。综上所述,本实验结果提示氧化应激在内质网应激反应的上游或下游通路中起作用,并参与了AOPP诱导的肾小管上皮细胞肥大及转分化过程。四.研究结论本实验研究结果证实晚期氧化蛋白产物可通过内质网应激诱导肾小管上皮细胞肥大及转分化。此外,本实验结果提示了氧化应激反应也参与了AOPP诱导肾小管上皮细胞肥大和发生EMT的过程,且与ERS有关。本实验结果将为早期干预CKD的进展提供新的治疗靶点。(本文来源于《南方医科大学》期刊2015-03-25）
高博,幸嵘,孔清泉,项舟,杨婧[9]（2015）在《腺病毒介导RNA干扰抑制核心结合因子α1表达阻断软骨细胞的肥大分化》一文中研究指出背景:软骨细胞肥大分化是软骨内骨化启动的标志,也是软骨内骨化必不可少的步骤,它是一种级联反应,一旦启动就很难阻断,最终结果是形成骨骼结构。RNA干扰技术是一种转录后水平的基因沉默,相关研究显示采用RNA干扰技术阻断核心结合因子α1表达能够有效地抑制异位骨化形成。目的:利用RNA干扰技术抑制核心结合因子α1表达,从而阻断大鼠软骨细胞肥大分化。方法:构建沉默SD大鼠核心结合因子基因的腺病毒Ad-Cbfa1-si RNA。利用维甲酸及白细胞介素1α促进软骨细胞肥大分化,观察Ad-Cbfa1-si RNA对核心结合因子α1表达的抑制作用。利用核心结合因子α1免疫组化方法比较各组核心结合因子α1的表达从而分析软骨细胞的肥大分化情况。结果与结论:经维甲酸和白细胞介素1α诱导后,阴性对照病毒组软骨细胞出现肥大分化,核心结合因子α1的表达呈阳性反应;Ad-Cbfa1-si RNA组软骨细胞中未见核心结合因子α1明显表达。提示利用RNA干扰技术能够明显抑制核心结合因子α1的表达,从而阻断软骨细胞的肥大分化。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年02期）
麻献华,周光迪,卢银忠,刘安军,杨冠[10]（2014）在《锌指蛋白Zbtb20通过抑制Sox9调控肥大软骨细胞的终末分化》一文中研究指出肥大软骨细胞的终末分化是软骨内成骨过程中的关键阶段,受到多种因素的调控。Sox9能负向调控肥大软骨细胞的终末分化,并能直接抑制肥大软骨细胞表达Vegfa,从而延迟成骨过程中的血管侵入。该分子在正常的肥大软骨细胞中显着下调表达,然而其表达下调的分子机理并不清楚。本研究发现锌指蛋白Zbtb20能通过抑制Sox9的表达来调控肥大软骨细胞的终末分化。Zbtb20从小鼠胚胎发育晚期开始高表达于肥大软骨细胞。本研究利用Cre/loxP系统建立了(本文来源于《第叁届“模式生物与人类健康”发育遗传学全国学术研讨会论文集》期刊2014-07-18）
肥大分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
肥大细胞(MC)作为一类固有免疫细胞,不仅能够参与免疫监视,同时亦在宿主对入侵病原体的早期先天免疫反应的启动中发挥关键作用;MC起源于骨髓中的造血干细胞,随后在其所驻扎的靶器官中发育成熟,最终响应于特定组织微环境而产生特异的表型和功能。在组织中,MC仅占所有免疫细胞总数的10%,因此从组织中收获到的MC数量是十分有限的。近几十年,为了获取充足的MC进行相关的科学研究,科学家一直在探索体外培养大量MC的方法。随着技术的进步,小鼠MC的培养方法已经十分成熟;然而,由于大鼠MC体外培养存在诸多困惑和难点,至今为止,报道大鼠骨髓来源MC(Bone Marrow-Derived MC,BMMC)培养方案的文献依然较少。相比小鼠MC,大鼠MC更适合研究其对抵抗蠕虫旋毛虫,华支睾吸虫等寄生虫感染的潜在机制,这得益于大鼠对于这几种寄生虫的易感性。通过一系列摸索,我发现了一种快速,有效,简单的大鼠BMMC培养方法。其中,大鼠重组干细胞生长因子(Rat Recombinated Stem Cell Factor,rr SCF)在该培养过程中发挥了关键性的作用。与先前的老方案相对比,通过我的方法获取的大鼠BMMC在分化,增殖,寿命和功能方面均表现出显着的优势;同时,其具有粘膜型MC表型,这有助于阐明粘膜型MC参与各种疾病(如哮喘、炎症性肠病等)的作用机制。另外,胃肠道MC是重要的免疫细胞之一,其大部分位于胃肠道固有层,约占总免疫细胞的2%-3%,属于粘膜型MC。在肠道中,MC可调节诸多生理功能,例如改变血流量,调节平滑肌收缩和肠蠕动,影响肠粘膜分泌功能以及促进先天和适应性免疫应答。MC重点参与协调炎症性肠病(IBD)的炎症粘膜中的上皮反应,当肠道受到炎症侵袭时,粘膜会大量释放SCF、MMP-9等物质,这些物质具有趋化MC富集的作用。而我的研究发现,在无病变的情况下,肠道内MC数量较少,甚至在IBD发病炎症期,其水平仍未见明显上升;然而,在炎症恢复期,MC数量得以显着的上调。另外,若炎症恢复期肠道内缺乏MC富集,将严重影响肠组织的稳态,影响肠道内免疫平衡,进而破坏肠组织的自我修复功能,最终维持炎症水平;因此,MC富集对于IBD疾病的组织的恢复过程至关重要。随着研究的进展,我发现MC更倾向于发挥间接调节的作用,而非直接调节作用。其中,巨噬细胞是其调节的靶点之一。巨噬细胞有两种极化的形式,分别为M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,前者具有促炎作用,后者则具有抑炎作用;我发现肠道内富集的MC显着影响巨噬细胞的极化过程;在IBD修复期,其通过促使更多的M2型巨噬细胞富集,同时减少M1型巨噬细胞的数量,最终发挥炎症抑制的作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肥大分化论文参考文献
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