牛型结核分枝杆菌分泌性蛋白MPB70、MPB83基因串联重组质粒的构建及鉴定

论文摘要

目的构建牛型结核分枝杆菌（MB）分泌性蛋白mpb 70、mpb 83基因串联重组表达质粒,为进一步利用工程菌表达、获得相应抗原蛋白奠定实验基础。方法参考NCBI上公布的MB全基因组序列（EU683972.1）,在利用DNAstar7.0生物信息软件分析分泌性蛋白mpb70、mpb83抗原性基础上,选择mpb 70、mpb 83基因编码多肽主要抗原域,利用重叠延伸PCR技术构建pGEX-6p-mpb70+mpb83串联重组表达质粒。结果生物信息学预测MPB70、MPB83基因的抗原域分别在30-171位氨基酸和20-190位氨基酸。在mpb70、mpb 83间加入16位柔性多肽序列,在线分析不影响mpb70和mpb83融合后的抗原性。pGEX-6p-1-mpb 70+mpb83经双酶切获得966bp和4966bp两条片段,与预期一致;测序表明mpb70+mpb83融合基因无碱基突变和缺失,重组质粒构建正确。结论确定了MB早期标识性分泌性蛋白mpb70、mpb83基因的抗原域,获得了mpb70、mpb83串联基因,构建的重组原核表达载体柔性多肽的引入确保mpb70和mpb83的天然抗原构象且不影响融合蛋白的抗原性,为重组抗原的表达,单克隆抗体制备以及建立MB分泌性蛋白标识物的快速检测试剂盒奠定了基础。

论文目录

• 材料与方法
•   1 材料
•     1.1 菌株DNA及载体
•     1.2 主要试剂
•   2 方法
•     2.1 mpb 70、mpb 83基因主要抗原域的确定
•     2.2 SOE-PCR融合
•     2.3 重组原核表达质粒的构建及酶切鉴定
• 结果
•   1 MPB 70、MPB 83主要抗原域确定
•   2 mpb70、mpb83基因扩增及融合PCR扩增
•   3 重组原核表达载体构建及鉴定
• 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 叶俊,布日额,陈金龙,吴金花,锡林高娃,王金良

关键词: 结核分枝杆菌,基因,串联表达

来源: 中国病原生物学杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 内蒙古民族大学动物科技学院,内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心,内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所,山东省滨州畜牧兽医研究院,山东绿都生物科技有限公司

基金: 内蒙古自治区科技创新引导项目(No.KCBJ2018026),内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心开放课题(No.MDK2018001,MDK2018004),内蒙古自治区",草原英才",人才工程项目(乳源性致病菌防控技术研究创新人才团队项目)(第7批)

分类号: S852.61

DOI: 10.13350/j.cjpb.191213

页码: 1429-1432

总页数: 4

文件大小: 1176K

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