论文摘要
本论文对山羊瘤胃内容物菌群中分离得到的一株纤维素酶产生菌T15进行了研究。本实验通过生理生化,形态结构和菌株分子生物学三个方面对菌株T15进行了菌种鉴定。并对菌株T15产酶特性和所产纤维素酶的酶学性质进行了研究。T15经菌种鉴定为解淀粉芽孢杆菌。采用3,5-二硝基水杨酸法（DNS法）测定纤维素酶活力。对菌株T15培养基成分优化后发现,最佳碳源和氮源为6 g/L的葡萄糖、5 g/L的牛肉膏;培养基中添加一定量的Ca2+与的Mg2+对菌株产生纤维素酶有促进作用,其中添加0.03 mol/L Ca2+时菌株T15酶活力提高效果明显,酶活力达到21.06 U/mL。以菌株T15培养条件单因素优化结果为基础,对温度、时间、初始pH和接种量设计四因素、三水平正交试验进行培养条件优化,试验最优结果为,培养基初始pH为7,培养温度35℃,接种量9%,培养40 h,酶活力达到26.96 U/mL。由方差结果可知培养时间、接种量、培养温度、和培养基初始pH对菌株发酵产纤维素酶影响依次增大。通过对菌株T15所产纤维素酶的性质研究中,得出菌株T15所产纤维素酶的酶促反应最适合pH大小为7,最适温度为45℃,反应体系中添加一定浓度的Ca2+、Mg2+对菌株T15纤维素酶促反应有促进作用。
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摘要Abstract第一章 绪论 1.1 纤维素的概述 1.1.1 纤维素的分子结构 1.1.2 纤维素资源 1.1.3 纤维素资源的利用 1.2 纤维素酶 1.2.1 纤维素酶的作用机理 1.2.2 纤维素酶的来源 1.2.3 1.2.3.1 真菌类 1.2.3.2 细菌类 1.2.3.3 放线菌类 1.2.4 纤维素酶的应用现状及前景 1.3 反刍动物及反刍动物的消化特点 1.3.1 瘤胃及瘤胃微生物 1.3.2 瘤胃内环境 1.4 酶制剂 1.4.1 酶制剂与饲料工业在畜牧养殖中的应用 1.5 本课题研究的主要内容第二章 材料与方法 2.1 试验材料 2.1.1 实验菌株 2.1.2 主要试剂与药品 2.1.3 实验仪器 2.1.4 主要试剂及其配制方法 2.1.5 培养基及其配制 2.1.5.1 培养基配制的主要流程 2.1.5.2 培养基的配制 2.1.5.3 培养基的灭菌 2.2 实验原理及其方法 2.2.1 酶活力测定 2.2.2 葡萄糖标准曲线制作 2.2.3 纤维素酶活力的测定公式 2.3 菌种鉴定 2.3.1 菌株T15 生理生化鉴定 2.3.1.1 葡萄糖类发酵实验 2.3.1.2 MR实验 2.3.1.3 大分子物质代谢实验 2.3.1.4 柠檬酸盐利用实验 2.3.1.5 革兰氏染色 2.3.2 微生物菌落形态结构观察 2.3.3 菌体形态观察 2.3.3.1 光学显微镜观察 2.3.3.2 电子显微镜观察 2.3.4 菌株分子生物学鉴定 2.4 菌株T15 生长曲线的绘制 2.4.1 菌种活化 2.4.2 流程与方法 2.5 产酶培养基成分的优化 2.5.1 粗酶液的制备 2.5.2 碳源对产酶活性的影响 2.5.3 氮源对产酶活性的影响 2.5.4 金属离子对产酶活性的影响 2.6 培养条件对产酶的影响 2.6.1 培养温度 2.6.2 培养时间 2.6.3 培养基初始pH 2.6.4 接种量 2.7 正交试验优化 2.8 菌株T15 的产酶的酶学性质研究 2.8.1 pH对菌株T15 所产纤维素酶酶促反应影响 2.8.2 温度对菌株T15 所产纤维素酶酶促反应影响 2.8.3 金属离子对菌株T15 所产纤维素酶酶促反应影响第三章 结果与讨论 3.1 生物学鉴定结果 3.1.1 菌落形态 3.1.2 菌体形态观察 3.1.2.1 光学显微镜观察 3.1.2.2 电子显微镜观察 3.1.3 菌株T15 生理生化鉴定 3.1.4 菌株T15 分子生物学鉴定 3.1.5 菌株T15 系统发育树的构建 3.2 菌株T15 生长曲线 3.3 菌株T15 发酵培养条件单因素优化 3.3.1 碳源对产酶活性的影响 3.3.2 氮源对产酶活性的影响 3.3.3 金属离子对产酶活的影响 3.3.4 培养温度对产酶活性的影响 3.3.5 培养时间对产酶活性的影响 3.3.6 发酵初始pH对产酶活性的影响 3.3.7 接种量对产酶活性的影响 3.4 培养条件优化正交试验 3.5 纤维素酶学性质研究 3.5.1 纤维素酶促反应最适pH 3.5.2 菌株纤维素酶促反应最适温度 3.5.3 几种不同的金属离子对菌株T15 产纤维素酶的酶活影响第四章 结论参考文献致谢
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 徐同
导师: 钱斯日古楞
关键词: 瘤胃源微生物,纤维素酶,培养条件优化,酶学性质
来源: 大连工业大学
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 大连工业大学
分类号: S852.6
DOI: 10.26992/d.cnki.gdlqc.2019.000019
总页数: 51
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标签：瘤胃源微生物论文; 纤维素酶论文; 培养条件优化论文; 酶学性质论文;
