HEK 293细胞中重组型抗体表达和分泌的监测系统的构建

论文摘要

免疫球蛋白G（Immunoglobulin G,IgG）作为一种十分重要的生物药物,已被广泛应用于多种医学诊断和治疗。为构建高效表达重组抗体的哺乳动物生产菌株,运用可以灵活检测抗体分泌运输的表达细胞株,从而充分理解抗体的折叠、转运及分泌尤为重要。作者在哺乳动物细胞株（HEK 293）中构建了一个稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）融合型抗体E-F-HyHEL10的表达系统,可通过流式细胞术检测抗体的分泌运输。此哺乳动物细胞表达系统具有良好的抗体表达和分泌水平,且稳定维持了抗体的功能活性。使用布雷菲德菌素A（brefeldin A）和放线菌酮处理细胞后,来自胞内E-F-HyHEL10的GFP荧光信号与抗体分泌水平呈正相关。结果表明,本研究中构建的抗体表达系统可实现抗体表达、累积和分泌水平的灵活准确监测,未来可应用于哺乳动物细胞中抗体分泌相关因子的筛选。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞培养
•   1.2 重组型抗体表达载体的构建
•   1.3 HEK 293细胞株稳定转染
•   1.4 流式细胞分析
•   1.5 蛋白质印记法
•   1.6 重组型抗体的纯化
•   1.7 银染
•   1.8 酶联免疫吸附测定（ELISA）
•   1.9 蛋白质合成抑制剂与分泌抑制剂的处理
• 2 结果与分析
•   2.1 重组型抗体表达载体的验证
•   2.2 HEK 293 E-F-HyHEL10稳定表达细胞株的构建
•   2.3 EGFP融合型抗体功能的检测
•   2.4 蛋白质分泌运输抑制剂对重组抗体表达和分泌的影响
•   2.5 蛋白质合成抑制剂对重组抗体表达和分泌的影响
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 何曾安,柳艺石,张慧杰,高晓冬,藤田盛久

关键词: 抗体,流式细胞术,蛋白质分泌

来源: 食品与生物技术学报 2019年07期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学生物工程学院

基金: 国家自然科学基金项目（31400693）,江苏省自然科学基金项目（BK20140141）,中央高校基本科研业务费项目（JUSRP51508）

分类号: Q78

页码: 1-8

总页数: 8

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