（长兴县人民医院浙江湖州313100）
摘要：目的：分析PCR检验法在细菌检验中的应用效果。方法：选取我院检验科在2014.1~2015.8检测的123份阴道分泌物样本作为分析资料，123份样本来源于123例阴道病患者，同时采用革兰染色与PCR法检验样本。结果：PCR的细菌检出率高于革兰染色，其中棒状杆菌、嗜血杆菌、肠球菌、弯曲弧菌、胨链球菌及普雷沃菌的检出率比较差异显著（P<0.05）。结论：PCR在临床细菌检验中具有检出率高的特点。
关键词：细菌检验；PCR；效果
多聚酶链反应（PCR）指的是在体外快速扩增DNA片段的一种检验技术，PCR检验具有自动化程度高、重复性好、操作简便、敏感性与特异性高等特点，在临床医学检验中得到了广泛应用，尤其是在细菌检验方面[1]。本文以阴道中的细菌检验为例，观察了PCR检验法在细菌检验中的应用效果，报告如下。
1.资料与方法
1.1一般资料
选取我院检验科在2014.1~2015.8检测的123份阴道分泌物样本作为研究资料，123份样本来源于在我院就诊的123例经妇科常规检查、实验室及影像检查确诊为阴道病的患者。123例的年龄为20岁~43岁，平均（34.9±5.3）岁，临床症状包括阴道溃疡53例，白带量增多67例，瘙痒93例，外阴异味85例，外阴出现烧灼感94例。排除近2d内有性生活、处于妊娠期及月经期、近期内阴道使用抗菌药物。
1.2方法
123例患者入院后，先采集检验样本，采集的过程中要求患者保持截石位，随后将阴道镜置入阴道中，在宫颈部位充分暴露后，及时采用经过消毒处理的无菌棉签在阴道的后穹窿处蘸取适量分泌物。在阴道中采集好样本后，将样本置入装有NaCl溶液（0.5%）的试管中，随后分别采用两种不同的方法进行检验，包括革兰染色与PCR。两种检验方法的具体操作步骤如下：（1）革兰染色。检验前先对玻片进行消毒，确保玻片处于无破损的完好状态，消毒方法为利用浓度为95%的乙醇溶液浸泡玻片，浸泡时间为20min~30min，在乙醇溶液中取出玻片后及时擦拭干净，并注意晾干，在晾干后应确保玻片无菌，且处于充分干燥状态。处理好玻片后，将检验试管中的消毒棉签取出，并在玻片上均匀涂好检验样本，随后让涂片自然干燥，干燥后在高温下进行固定，固定温度为55℃，固定后静置冷却，冷去后便可以进行染色，染色步骤包括初染、媒染、脱色及复染[2]。完成上述操作后采用显微镜观察玻片中的检验样本，并在观察的过程中记录好相关数据。（2）PCR。采集好检验样本后将样本置入无菌NaCl溶液当中，确保无菌NaCl溶液中样本的含量为1000ul，随后对含有检验样本的NaCl溶液进行离心处理，离心转速为1500r/min，离心时间为15min~20min。完成离心处理后将上层清液去除，并将碱性组织裂解溶液加入到剩余的沉淀物当中，加入裂解溶液后将沉淀物连同离心管共同置入恒温水浴锅当中，对样本进行水浴处理，水浴温度为65℃，水浴时间为10min~15min。完成水浴后再次对样本进行离心处理，离心转速为1500r/min，离心时间为15min。离心处理完成后利用上层清液作为DNA模板的制作材料，在对DNA模板进行扩增的过程中需要加入引物、缓冲对、双蒸馏水及模板等，以实现阴性对照。随后对PCR扩容、产物情况进行检查，并采用30uL石蜡油覆盖好模板，覆盖后开始进行PCR循环，循环次数为30次。
1.3观察指标
对比两种检验方法对于细菌的检出率情况，包括棒状杆菌、嗜血杆菌、肠球菌、弯曲弧菌、胨链球菌、普雷沃菌及加德纳菌。
1.4统计学
比较革兰染色与PCR的检验结果是否存在明显差异时，采用的检验法为2检验，如P<0.05，则组间差异显著。
2.结果
PCR的细菌检出率高于革兰染色，其中棒状杆菌、嗜血杆菌、肠球菌、弯曲弧菌、胨链球菌及普雷沃菌的检出率比较差异显著（P<0.05），两种检验方法的加德纳菌检出率差异不明显（P<0.05），比较见表1。
表1.革兰染色与PCR法细菌检出率对比[例(%)]
革兰染色PCR2P
棒状杆菌37(30.08)52(42.28)3.9610.047
嗜血杆菌14(11.38)26(21.14)4.2990.038
肠球菌53(43.09)67(54.47)3.1890.174
弯曲弧菌22(17.89)39(31.71)6.3000.012
胨链球菌15(12.20)28(22.76)4.7630.029
普雷沃菌19(15.45)36(29.27)6.7680.009
加德纳菌75(60.98)82(66.63)0.8630.853
3.讨论
在对细菌进行检验时常用的方法包括革兰染色、细菌培养检验法等，细菌培养检验法的检验过程较为复杂，且需要较高的检验条件，在培养细菌后才能开始检验，因此具有费时费力的特点[3]。革兰染色在鉴定细菌，尤其是阴性革兰氏菌与阳性革兰氏菌方面具有非常重要的作用，同时可以为抗生素的临床应用提供依据[4]。本研究采用了革兰染色与PCR对123份细菌样本进行检验，结果证实PCR对于阴道致病细菌的检出率明显高于革兰染色，提示PCR在细菌检验方面具有明显优势。相对于革兰染色而言，PCR具有DNA杂交特异性、RCP敏感性等特点，还可以将光谱技术及定量分析等技术应用于临床检验工作中，不但能够有效提高各类致病细菌的检出率，同时能保证检验结果的准确性[5]，本研究再次证实了上述观点。综上所述，PCR在临床细菌检验中具有检出率高的特点，可推广应用。
参考文献
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