人转运蛋白SR2的原核表达及其与HIV-1整合酶体外相互作用的检测

论文摘要

人转运蛋白SR2（TRN-SR2）与HIV-1整合酶（IN）相互作用是抗HIV治疗的有效靶点,寻找和设计该靶点的高效抑制剂具有重要的临床意义和广阔的应用前景。因此为了开展以TRN-SR2与HIV-1 IN相互作用为靶点的抑制剂筛选研究,以p GEX-2T为载体的重组质粒p GST-TRN-SR2在大肠杆菌Rosetta（DE3）中进行原核表达,并利用亲和层析纯化得到浓度为0. 80 mg/m L的重组TRN-SR2蛋白;然后采用生物膜干涉技术（BLI）进行体外检测重组TRN-SR2蛋白与HIV-1 IN的相互作用和结合情况。结果表明,重组TRN-SR2蛋白与HIV-1 IN相互结合信号明显升高,且测得平衡解离常数KD值为45. 2 nmol/L。最后利用均相时间分辨荧光技术（HTRF）和交叉滴定实验确定了TRN-SR2与HIV-1 IN在该靶点抑制剂筛选实验体系中的最适反应浓度分别为20和40 nmol/L。以上研究结果说明原核表达的重组TRN-SR2蛋白的活性较好且与HIV-1 IN体外相互作用明显,同时在筛选实验体系中TRN-SR2与HIV-1 IN最适浓度的确定也为后续抑制剂的筛选提供了相应的研究基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株及质粒
•     1.1.2 试剂与仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 TRN-SR2的表达纯化
•     1.2.2 BLI体外检测TRN-SR2与HIV-1 IN的相互作用
•     1.2.3 基于HTRF确定TRN-SR2与HIV-1 IN相互作用最适浓度
•     1.2.4 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 TRN-SR2与IN-HIS的表达纯化结果
•   2.2 BLI体外检测TRN-SR2与HIV-1 IN的相互作用结果
•   2.3 TRN-SR2与HIV-1 IN相互作用的最适浓度
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 许晓双,张大为,孔韧

关键词: 整合酶,蛋白蛋白相互作用

来源: 生物学杂志 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,药学

单位: 江苏理工学院生物信息与医药工程研究所

基金: 国家自然科学基金(31700297,81603152),江苏省产学研前瞻项目(BY2016030-11)

分类号: R91;Q78

页码: 38-41

总页数: 4

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