泛素特异性蛋白酶4对脂肪干细胞成骨分化的影响

论文摘要

目的:本研究通过使用泛素特异性蛋白酶4（USP4）抑制剂Vialinin A干预大鼠脂肪干细胞（ASCs）的生长分化,探究USP4对ASCs的成骨分化的影响。方法:将分离培养至第3代的ASCs细胞分为6组分别用含0、0.1、0.5、1、5、10μmol/L Vialinin A的培养基培养10 d,CCK-8检测各组细胞增殖情况。将第3代细胞分为实验组、阳性以及阴性对照组,分别用含0.5μmol/L Vialinin A的成骨诱导液、不含Vialinin A的成骨诱导液及普通的α-MEM培养。检测各组第7天细胞内USP4、β-catenin、碱性磷酸酶（ALP）及骨桥蛋白（OPN）基因的表达。将3组细胞培养至第4、7、10、14天进行ALP染色,检测ALP的活性;培养至21 d时进行茜素红染色,检测细胞矿化结节的形成。采用t检验比较组间数据差异,P<0.05时差异具有统计学意义。结果:0.5μmol/L Vialinin A处理的实验组细胞增殖趋势与对照组的差异无统计学意义,表明该浓度的Vialinin A对细胞增殖无影响,作为后续实验组浓度。ALP与茜素红染色结果显示实验组染色效果均较其他组显著。RT-qPCR结果显示与阴性对照组相比,阳性对照组与实验组细胞内USP4与β-catenin表达量较低,差异具有统计学意义。实验组与阳性对照组相比无显著性差异。与阳性对照组相比,实验组的ALP与OPN表达量显著升高,差异具有统计学意义。结论 :0.5μmol/L的USP4抑制剂Vialinin A可以促进大鼠ASCs内ALP与OPN基因的表达。但USP4可能并非通过β-catenin途径调节其成骨分化。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 实验动物、仪器及试剂
•     1.1.1 实验动物
•     1.1.2 实验试剂
•     1.1.3 主要仪器及设备
•   1.2 方法
•     1.2.1 大鼠ASCs分离、培养以及传代
•     1.2.2 CCK-8检测抑制剂Vialinin A对大鼠ASCs体外增殖的影响
•     1.2.3 检测抑制剂Vialinin A对大鼠ASCs成骨分化的影响
•     1.2.4 RT-qPCR检测
•     1.2.5 数据分析
• 2 结果
•   2.1 大鼠ASCs的细胞形态学观察
•   2.2 CCK-8检测抑制剂Vialinin A对大鼠ASCs增殖的影响
•   2.3 抑制剂Vialinin A处理后大鼠ASCs的ALP染色检测
•   2.4 抑制剂Vialinin A处理后大鼠ASCs的茜素红染色检测
•   2.5 抑制剂Vialinin A处理后相关基因表达的RT-q PCR检测
•     2.5.1 USP4与β-catenin在大鼠成骨分化过程中的表达
•     2.5.2 抑制剂Vialinin A处理后的大鼠ASCs成骨相关基因的表达
• 3 讨论
•   3.1 Vialinin A的浓度对大鼠ASCs增殖的影响
•   3.2 大鼠ASCs成骨分化能力的鉴定
•   3.3 USP4与Wnt/β-catenin信号通路对大鼠ASCs成骨分化的影响
•   3.4 Vialinin A对USP4的抑制效果及其对ASCs成骨分化的影响

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 卢跃峰,孙睿男,王丽娜,范震

关键词: 脂肪干细胞,泛素特异性蛋白酶,成骨分化

来源: 口腔颌面外科杂志 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,外科学,生物医学工程

单位: 上海牙组织修复与再生工程技术中心同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院口腔种植科

基金: 国家自然科学基金青年基金项目(81400485)

分类号: R68;R318

页码: 69-76

总页数: 8

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