基于CRISPR/Cas9的月季TCP9基因融合表达载体构建

论文摘要

CRISPR/Cas9基因编辑系统是植物基因功能研究的重要工具,月季TCP9基因可以调控花器官的发育,应用CRISPR/Cas9技术构建敲除月季TCP9基因的表达载体,可以为月季TCP9基因的调控机制提供更多信息。根据TCP9基因的保守序列,设计了一对互补引物,用T4连接酶连接到质粒载体pKSE402 (该载体含有eGFP)中;通过测序确定所构建载体的正确性,通过冻融法将含有TCP9基因的重组质粒转入农杆菌(EHA105)中。以农杆菌为模板PCR扩增以及eGFP瞬时表达证明月季TCP9基因敲除表达载体已构建成功。本研究表明了含有TCP9基因的表达载体能在植物中高效表达,为进一步研究提供了一定的科学依据。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 成功制备含pKSE402-TCP9质粒载体的农杆菌
•   1.2 月季叶片eGFP瞬时表达检测
•   1.3 拟南芥中的表达与检测
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 试验材料
•   3.2 引物退火与酶切连接
•   3.3 大肠杆菌的转化
•   3.4 农杆菌的转化
•   3.5 月季瞬时表达的转化与检测
•   3.6 拟南芥的转化与检测
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李聪,杨莹莹,王美军,陈己任

关键词: 农杆菌,表达载体,月季,拟南芥

来源: 分子植物育种 2019年24期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 园艺

单位: 湖南农业大学园艺园林学院

基金: 国家自然基金项目(31772352),国家科技基础资源调查专项(2017FY100100),国家重点硏发计划(SQ-2018YFD100015),湖南省中亚热带花木繁育与利用工程技术中心建设项目(201809)共同资助

分类号: S685.12

DOI: 10.13271/j.mpb.017.008120

页码: 8120-8124

总页数: 5

文件大小: 1463K

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