鼠伤寒沙门菌baeSR基因缺失株的构建及其对抗生素敏感性分析

论文摘要

【背景】沙门菌的多重耐药现象日渐严重,对其耐药机理的研究尤为迫切,双组分系统与细菌耐药性密切相关。【目的】构建鼠伤寒沙门菌baeSR基因缺失株及回补株,探究双组分系统BaeSR对鼠伤寒沙门菌耐药性的影响。【方法】以鼠伤寒沙门菌体外诱导耐药株CR为研究对象,通过自杀质粒p LP12介导的同源重组方法,以氯霉素抗性标记和阿拉伯糖诱导的致死基因vmt进行正、反向双重筛选,获得基因缺失株CRΔbaeSR,并将重组表达质粒pBAD-baeSR转化于CRΔbaeSR构建回补株CR CΔbaeSR。采用微量肉汤稀释法测定11种常见代表药物对野生株、缺失株及回补株的最小抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration,MIC）,并测定3株菌的生长曲线、运动性及生物膜形成能力。【结果】与野生株相比,环丙沙星（CIP）、恩诺沙星（ENR）、沙拉沙星（SAR）、头孢噻呋（CEF）、庆大霉素（GEN）、阿米卡星（AMK）、安普霉素（APR）对缺失株的MIC值有所下降;缺失株的生长速率稍显缓慢,且最终浓度也相对较低,但并无统计学上的显著差异（P>0.05）;缺失株的运动性（P<0.05）及生物膜形成能力（P<0.01）均显著下降。【结论】鼠伤寒沙门菌baeSR基因缺失后,可通过影响其运动性及生物膜形成能力而对抗生素的敏感性产生影响。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株及质粒
•     1.1.2 主要试剂和仪器及培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 引物设计
•     1.2.2 baeSR上、下游同源臂的扩增
•     1.2.3 p LP12-baeSR重组质粒的构建及鉴定
•     1.2.4 p LP12-baeSR-β2163的制备
•     1.2.5 缺失突变株的构建及鉴定
•     1.2.6 回补株的构建及鉴定
•     1.2.7 最小抑菌浓度试验
•     1.2.8 生长曲线的测定
•     1.2.9 运动性的测定
•     1.2.1 0 生物膜形成能力的测定
• 2 结果与分析
•   2.1 bae SR基因上、下游同源臂及融合片段的扩增
•   2.2 重组自杀质粒的构建及鉴定
•   2.3 缺失株的构建及鉴定
•   2.4 回补株的构建及鉴定
•   2.5 最小抑菌浓度试验结果
•   2.6 生长曲线测定结果
•   2.7 运动性测定结果
•   2.8 生物膜形成能力测定结果
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王文静,徐军,高海侠,李锐,王瑞,张瑞良,李琳

关键词: 鼠伤寒沙门菌,双组分系统,基因敲除,耐药性

来源: 微生物学通报 2019年11期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 安徽农业大学动物科技学院

基金: 国家自然科学基金(31772802),安徽高校自然科学重点研究项目(KJ2017A132)~~

分类号: S852.61

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.181072

页码: 3013-3021

总页数: 9

文件大小: 551K

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