自噬抑制肿瘤坏死因子α诱导人胎盘胎儿来源间充质干细胞发生凋亡

论文摘要

目的:探讨TNF-α诱导人胎盘胎儿来源间充质干细胞（hfPMSCs）发生凋亡和自噬的作用,以及自噬对细胞凋亡的调控作用。方法:利用流式细胞术检测无血清培养hfPMSCs中CD73、CD90、CD105、CD14、CD34、CD45的表达;用终浓度20μg/L的TNF-α处理hfPMSCs 24h,以未处理细胞作为对照组。Annexin V/PI双染色检测TNF-α对hfPMSCs凋亡程度的影响;分别提取各组总蛋白,Western blot检测自噬标志基因LC3Ⅰ/Ⅱ的表达;利用mRFP-GFP-LC3腺病毒感染细胞,观察胞内点状聚集形成的情况;利用Atg5干扰慢病毒（si-Atg5）及阴性对照慢病毒（si-NC）感染hfPMSCs,Annexin V/PI双染色检测TNF-α对慢病毒感染后hfPMSCs凋亡程度的影响。结果:所培养细胞具有典型的MSCs形态,呈CD73+CD90+CD105+/CD14-CD34-CD45-细胞; Annexin V/PI染色结果显示,TNF-α作用24 h后,hfPMSCs凋亡数和凋亡率均高于对照组（P <0. 05）;Western blot检测自噬标志蛋白表达结果表明,TNF-α可增加LC3Ⅱ的表达（P <0. 05）;荧光共聚焦显微境观察到TNF-α可显著提高细胞中的点状聚集。利用si-Atg5感染细胞,抑制hfPMSCs自噬的发生,与对照慢病毒si-NC感染细胞比较,可显著促进TNF-α诱导hfPMSCs凋亡的发生（P <0. 05）。结论:TNF-α诱导的自噬抑制人胎盘胎儿来源MSCs凋亡的发生,具有一定的保护性作用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 人胎盘胎儿来源MSCs的培养
•     1.2.2 MSCs特异性标志物的鉴定
•     1.2.3 细胞凋亡的检测
•     1.2.4 自噬标志蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ表达的鉴定
•     1.2.5 MSCs胞内自噬体的检测
•     1.2.6 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 MSCs形态观察
•   2.2 MSCs表面标志分子的检测
•   2.3 TNF-α诱导MSCs发生凋亡
•   2.4 TNF-α诱导MSCs自噬的发生
•   2.5 TNF-α诱导MSCs自噬体的形成
•   2.6 TNF-α诱导的自噬调控MSCs凋亡发生
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱永朝,陶金,任萌萌,熊燃,何亚琴,周瑜,卢震辉,杜勇,杨芝红

关键词: 人胎盘,间充质干细胞,肿瘤坏死因子,自噬,细胞凋亡

来源: 中国生物工程杂志 2019年09期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 宁夏医科大学总医院,银川市妇幼保健院

基金: 国家自然科学基金(81560016)资助项目

分类号: R329.2

DOI: 10.13523/j.cb.20190909

页码: 62-67

总页数: 6

文件大小: 345K

下载量: 103