牛源性非O157大肠杆菌的分离与鉴定

论文摘要

目的:对牛粪及牛肉中的非O157大肠杆菌进行分离、鉴定和毒力基因携带情况进行检测,以了解非O157大肠杆菌的污染状况。方法:参考USDA检测方法,对样品进行选择性增菌,用多重聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法进行初步筛选,检测O抗原（O157、O121、O111、O103、O26）,阳性样本用选择性显色培养基rainbow agar分离纯化,可疑菌株用多重PCR方法鉴定O抗原,PCR-限制性片段长度多态性鉴定H抗原,并采用血清凝集实验进行验证,确认的阳性菌株采用多重PCR方法进行毒力基因（stx1、stx2、eae、hly）检测。结果:在153份牛粪和49份牛肉样本中,共40份样品检出1个或多个O血清型阳性,牛粪检出率高于牛肉,非O157阳性率为19.3%,O157的阳性率为0.50%;经分离纯化后,共鉴定出阳性菌株30株,其中O26最多占73.3%,O121、O103、O157分别占16.7%、6.7%、3.3%。毒力基因检测结果显示,分离自牛肉的2株O26:H11,一株stx1、hly阳性,另一株hly阳性,分离自牛粪的1株O26:H11携带hly基因,因此30株菌株中带毒菌株阳性率为10.0%,非O157产志贺毒素大肠杆菌阳性率为3.4%。结论:牛粪和牛肉中非O157大肠杆菌的污染率明显高于O157,尤其是O26:H11血清型最高,且检出含志贺毒素基因的大肠杆菌,这提示零售牛肉市场存在非O157大肠杆菌污染的安全风险,我国应该加强对非O157大肠杆菌的检测和监控。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 增菌培养
•     1.3.2 增菌液DNA提取及多重PCR检测O血清型
•     1.3.3 菌株分离纯化
•     1.3.4 细菌基因组DNA提取及血清型鉴定
•     1.3.5 多重PCR进行毒力基因检测
• 2 结果与分析
•   2.1 样品O血清型检测结果
•   2.2 菌株O血清型检测结果
•   2.3 菌株鞭毛抗原分型
•   2.4 毒力基因检测结果
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 禹金龙,董晨,王娴静,姬赛赛,付文静,胡洁,江芸

关键词: 非大肠杆菌,牛粪,牛肉,污染状况,毒力基因

来源: 食品科学 2019年04期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 南京师范大学金陵女子学院,江苏省疾病预防控制中心

基金: 国家自然科学基金面上项目(31671915),江苏省“六大人才高峰”项目(NY-080)

分类号: TS201.3

页码: 299-304

总页数: 6

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