导读:本文包含了蜘蛛拖丝论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:逆转录,蛋白,蜘蛛,基因,载体,病毒,小鼠。
蜘蛛拖丝论文文献综述
杜文敬,梁洋,朴善花,王春生,安铁洙[1]（2018）在《逆转录病毒载体介导的蜘蛛拖丝蛋白转基因小鼠的制备》一文中研究指出为了建立通过转基因动物获得蜘蛛拖丝蛋白的方法,试验利用前期构建的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)逆转录病毒载体侵染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),通过嵌合体法制备转基因小鼠,并用PCR技术进行鉴定。结果表明:成功获得嵌合体小鼠;目的基因2S-IRES-EGFP已整合入F0代及F1代嵌合体小鼠的鼠尾基因组中。说明利用逆转录病毒可成功获得表达蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)的转基因小鼠。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2018年17期）
安铁洙,李昊,王春生,王子竹,宋红卫[2]（2016）在《转B2C/拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选》一文中研究指出为了建立绵羊被毛特异表达蜘蛛拖丝蛋白基因的方法,研究利用前期工作获得的绵羊高硫角蛋白结合蛋白基因B2C启动子和人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体(2S),构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,进行线性化后,采用脂质体法转染进绵羊成纤维细胞并经G418筛选获得转基因阳性细胞,再进行PCR检测和冷冻复苏后进行生物学特性检测。结果表明:成功构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,将其整合入转基因阳性细胞的基因组中;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,其细胞形态仍保持成纤维细胞的梭形形态,且在续培养中呈现正常细胞相近的"S"型生长曲线。说明试验成功获得转pc DNA3.1-B2C-2S绵羊成纤维细胞株。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2016年07期）
王子竹[3]（2013）在《转蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体绵羊成纤维细胞株的筛选》一文中研究指出蜘蛛丝是目前已知的一种集多种优良性能于一身的纤维,无论与其它天然材料还是人工合成的材料相比,蜘蛛丝都显示出了绝对的优势。但是由于蜘蛛的生活习性以及织网特点,无法通过人工进行大规模饲养繁殖,这些都给蜘蛛丝的大量获取造成了巨大困难。本研究通过绵羊可以产生由角蛋白构成的羊毛为启迪,利用本实验室前期合成的蜘蛛丝蛋白基因二聚体和绵羊毛发角蛋白启动子B2C,将B2C与报告基因相连,验证其是否具有表达活性,并将绵羊毛发角蛋白启动子与pcDNA3.1相连构建真核表达载体,再与蜘蛛丝蛋白基因二聚体相连后转染绵羊皮肤成纤维细胞,经抗性筛选后扩大培养,建立转拟蜘蛛丝蛋白基因二聚体绵羊皮肤成纤维细胞系。为后续产生被毛中表达蜘蛛拖丝蛋白的转基因绵羊奠定了基础。实验的结果与结论如下：(1)绵羊毛发角蛋白启动子B2C的活性检测：将绵羊毛发角蛋白启动子pEasy-T3-B2C与报告基因GFP相连,构建重组质粒B2C-GFP,将其转染绵羊皮肤成纤维细胞。结果在蓝光激发下观察到了绿色荧光,证明了该启动子在绵羊皮肤成纤维细胞中具有表达活性；(2)真核表达载体的构建：将去除自身CMV巨噬细胞病毒启动子的pcDNA3.1与经过相同酶切的启动子B2C相连接,再与蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体2S相连接,成功构建了真和表达载体pcDNA3.1-B2C-2S;(3)转基因阳性细胞的筛选：通过脂质体转染法将线性化的pcDNA3.1-B2C-2S转染绵羊皮肤成纤维细胞,用最适终浓度的G418对转染后的细胞进行筛选,得到了生长状态良好的转基因细胞；(4)转基因细胞的检测：提取转基因细胞的基因组DNA,通过PCR检测显示pcDNA3.1-B2C-2S整合到了绵羊皮肤成纤维细胞的基因组中,将转基因细胞进行冻存与复苏,复苏后的细胞生长状态依然良好。通过以上叙述可知,本研究获得了转蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体绵羊皮肤成纤维细胞系。(本文来源于《东北林业大学》期刊2013-04-01）
安铁洙,宁方勇,王春生,朴善花,梁洋[4]（2013）在《蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测》一文中研究指出利用pIRES2-EGF和pMX载体以及前期获得的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)构建逆转录病毒载体pMX-2S-IRES-EGFP。采用磷酸钙法将pMX-2S-IRES-EGFP质粒转染到PlatE细胞并获得重组逆转录病毒。通过小鼠成纤维细胞系NIH3T3检测病毒侵染能力,并采用PCR法检测蜘蛛拖丝蛋白基因在NIH-3T3细胞的整合状况。结果显示,成功构建了逆转录病毒载体pMX-2S-IRES-EGFP;通过感染NIH-3T3细胞测定重组逆转录病毒滴度约为2×105 cfu/mL;PCR鉴定结果显示,目的基因2S-IRES-EGFP已整合入NIH-3T3细胞基因组中。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2013年01期）
宁方勇,梁洋,王春生,朴善花,安铁洙[5]（2012）在《转蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测》一文中研究指出为了建立通过动物被毛获取蜘蛛拖丝蛋白的方法,本研究利用pIRES2-EGF和PMX载体以及前期获得的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S),构建逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP。采用磷酸钙法将PMX-2S-IRES-EGFP质粒转染到PlatE细胞并获得重组逆转录病毒。通过小鼠成纤维细胞系NIH3T3检测病毒侵染能力,并采用PCR法检测蜘蛛拖丝蛋白基因在NIH-3T3细胞的整合状况。其结果,成功构建了逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP;通过感染NIH-3T3细胞测定重组逆转录病毒滴度约为2×105cfu·mL-1;PCR鉴定结果显示,目的基因2S-IRES-EGFP已整合入NIH-3T3细胞基因组中。上述结果为进一步开展通过逆转录病毒转基因法获得表达蜘蛛拖丝蛋白的转基因动物奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）》期刊2012-07-10）
梁洋,王春生,朴善花,薛超,安铁洙[6]（2012）在《蜘蛛拖丝蛋白基因嵌合体小鼠的研究》一文中研究指出蜘蛛拖丝由于具有独特的抗拉性和弹性的力学特性而备受关注。为了建立通过动物获取蜘蛛拖丝蛋白的方法,本研究以小鼠为实验动物模型,利用前期工作获得的含有蜘蛛拖丝蛋白基因的假病毒感染小鼠ES细胞,通过囊胚注射制备整合有目的基因的嵌合体小鼠,PCR鉴定结果显示,目的基因2S-IRES-EGFP已整合入嵌合体小鼠及其F1代基因组中。上述结果为进一步开展通过逆转录病毒转基因法获得表达蜘蛛拖丝蛋白的转基因动物奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）》期刊2012-07-10）
宁方勇,梁洋,王春生,朴善花,安铁洙[7]（2012）在《转蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测》一文中研究指出(目的)为了建立通过动物被毛获取蜘蛛拖丝蛋白的方法,本研究利用plRES2-EGF和PMX载体以及前期获得的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S),构建逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP。(方法)采用磷酸钙法将PMX-2S-IRES-EGFP质粒转染到PlatE细胞并获得重组逆转录病毒。通过小鼠成纤维细胞系NIH3T3检测病毒侵染能力,并采用PCR法检测蜘蛛拖丝蛋白基因在NIH-3T3细胞的整合状况。(结果)其结果,成功构建了逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP;通过感染NIH-3T3细胞测定重组逆转录病毒滴度约为2×10~5cfu·mL-1;PCR鉴定结果显示,目的基因2S-IRES-EGFP已整合入NIH-3T3细胞基因组中。(结论)上述结果为进一步开展通过逆转录病毒转基因法获得表达蜘蛛拖丝蛋白的转基因动物奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（上）》期刊2012-07-10）
王春生,李晶,宁方勇,张秋婷,梁洋[8]（2011）在《UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定》一文中研究指出为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;将UHS-2S-pIRES2-EGFP线性化后,采用脂质体法转染小鼠皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得neo基因抗性阳性细胞。结果表明:(1)成功构建UHS-2S-pIRES2-EGFP;(2)转基因细胞的最佳G418筛选浓度为400μg/mL;(3)筛选获得呈梭形的转基因细胞,对其进行传代培养时,细胞增殖缓慢,细胞未呈现正常细胞的"S"型的生长曲线;(4)PCR检测结果显示,UHS-2S-pIRES2-EGFP载体已经整合到G418抗性细胞的基因组中。(本文来源于《江西农业大学学报》期刊2011年06期）
王春生,罗芳,张志人,赵健灵,朴善花[9]（2011）在《拟蜘蛛拖丝蛋白基因重组蛋白的纯化及其抗血清制备》一文中研究指出为了制备可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清,利用前期工作中获得的蜘蛛拖丝蛋白基因重组原核表达载体2S-pET-52b(+),采用原核表达方法获得大量重组蜘蛛拖丝蛋白2S-His,对此重组蛋白进行His标签特异性的亲和纯化,再依次经SDS-PAGE、切胶和与佐剂混合后作为抗原;皮下多点注射法将抗原注入新西兰大白兔皮下进行免疫;采集已免疫的兔血清,采用ELISA检测方法对其效价进行检测。结果显示,重组质粒2S-pET-52b(+)转化BL21-pLysS后获得最佳的表达菌株;在筛选得到的最佳IPTG、温度和时间(分别为1.0 mmol/L、30℃和2 h)条件下诱导获得2S-His重组蛋白;经免疫的4只兔血清中,2只兔的血清效价达1∶25 600和1∶12 800。表明利用2S-pET-52b(+)重组质粒成功获得可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清。本研究为加快建立在被毛中特异表达大量蜘蛛拖丝蛋白的新方法提供依据。(本文来源于《四川动物》期刊2011年04期）
王春生,原璐,宁方勇,吴治昊,朴善花[10]（2011）在《转KAP6.1-GFP-蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S绵羊成纤维细胞株的筛选》一文中研究指出【目的】通过体细胞核移植为获得皮肤特异表达蜘蛛拖丝蛋白的绵羊奠定基础。【方法】将pcDNA3.1和带有角蛋白结合蛋白启动子质粒pGM-T-KAP6.1分别用BglⅡ和Hin dⅢ双酶切后连接,再与蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S连接,最后通过酶切与pIRES2-EGFP质粒连接后构建真核表达载体pIRES2-EGFP-4S;将此载体线性化后,采用脂质体法转染绵羊皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因阳性细胞。【结果】筛选得到转pIRES2-EGFP-4S的阳性细胞。对阳性细胞经体外培养后的检测显示:(1)细胞形态(长梭形)、细胞生长曲线(呈S形)、群体倍增时间(随培养时间增加逐渐缩短)和细胞接种率(细胞贴壁率及存活率在24 h内逐渐升高,并达到最高值125%)等均具有正常绵羊成纤维细胞的生物学特征;(2)阳性细胞经冷冻复苏后具有与新鲜阳性细胞相似的生物学特征;(3)PCR检测结果显示,pIRES2-EGFP-4S在阳性细胞的基因组中整合。【结论】获得具有在绵羊皮肤特异表达,且便于检测的转蜘蛛拖丝蛋白4S的绵羊成纤维细胞株。(本文来源于《中国农业科学》期刊2011年12期）
蜘蛛拖丝论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了建立绵羊被毛特异表达蜘蛛拖丝蛋白基因的方法,研究利用前期工作获得的绵羊高硫角蛋白结合蛋白基因B2C启动子和人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体(2S),构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,进行线性化后,采用脂质体法转染进绵羊成纤维细胞并经G418筛选获得转基因阳性细胞,再进行PCR检测和冷冻复苏后进行生物学特性检测。结果表明:成功构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,将其整合入转基因阳性细胞的基因组中;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,其细胞形态仍保持成纤维细胞的梭形形态,且在续培养中呈现正常细胞相近的"S"型生长曲线。说明试验成功获得转pc DNA3.1-B2C-2S绵羊成纤维细胞株。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蜘蛛拖丝论文参考文献
[1].杜文敬,梁洋,朴善花,王春生,安铁洙.逆转录病毒载体介导的蜘蛛拖丝蛋白转基因小鼠的制备[J].黑龙江畜牧兽医.2018
[2].安铁洙,李昊,王春生,王子竹,宋红卫.转B2C/拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选[J].黑龙江畜牧兽医.2016
[3].王子竹.转蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体绵羊成纤维细胞株的筛选[D].东北林业大学.2013
[4].安铁洙,宁方勇,王春生,朴善花,梁洋.蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测[J].中国兽医学报.2013
[5].宁方勇,梁洋,王春生,朴善花,安铁洙.转蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测[C].中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）.2012
[6].梁洋,王春生,朴善花,薛超,安铁洙.蜘蛛拖丝蛋白基因嵌合体小鼠的研究[C].中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）.2012
[7].宁方勇,梁洋,王春生,朴善花,安铁洙.转蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测[C].中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（上）.2012
[8].王春生,李晶,宁方勇,张秋婷,梁洋.UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定[J].江西农业大学学报.2011
[9].王春生,罗芳,张志人,赵健灵,朴善花.拟蜘蛛拖丝蛋白基因重组蛋白的纯化及其抗血清制备[J].四川动物.2011
[10].王春生,原璐,宁方勇,吴治昊,朴善花.转KAP6.1-GFP-蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S绵羊成纤维细胞株的筛选[J].中国农业科学.2011
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