裴淑艳1*宋晓晖2王锦明3靳芳玉2暴艳敏4
（1西北民族大学医学院甘肃兰州730030，2兰州大学第一医院体检中心甘肃兰州730000，3兰州大学第一医院生物诊疗中心甘肃兰州730000，4西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030）
摘要目的探讨尿维生素D结合蛋白(VDBP)在糖尿病肾病（DN）诊断中的意义。方法研究组将75例2型糖尿病患者依据尿白蛋白含量分为正常尿白蛋白尿组(NA组，25例)、微量白蛋白尿组(MI组，25例)及大量尿白蛋白尿组(MA组，25例)。另外选取25名健康人作为对照组（NC组）。测定研究组和对照组尿VDBP和临床指标水平，并进行统计分析。结果NA组、MI组及MA组尿VDBP含量均显著高于NC组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示，VDBP与病程、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、糖化血红蛋白(HbAlc)、肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖（FBG）、尿白蛋白与肌酐比率（UACR）、尿素氮(BUN)呈正相关；而与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)呈负相关(P<0.05)。多元线性回归分析结果表明，病程、SBP、FBG、UACR和BUN其为DN患者尿VDBP的独立相关因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果表明，VDBP/Cr检测阈值为476.9ng/mg时，VDBP/Cr曲线下面积为0.967，DN检测的敏感性和特异性分别为94.0%和82.0%。结论尿VDBP随尿蛋白严重程度而逐渐升高，可作为DN早期诊断和病情判定的重要参考指标。
关键词：糖尿病肾病；VDBP；早期诊断
我国糖尿病（DM）患者数量庞大，大约有40%的糖尿病患者会进展为糖尿病肾病（DN）患者。在DN早期，能够及时给予有效的治疗，可以延缓疾病的进展，因此，筛选特异性强、敏感性高的DN早期诊断分子，对DN的预防和早期治疗有积极的意义。维生素D结合蛋白（VDBP）是体内维生素D的转运蛋白，在肌动蛋白清除中也有重要的作用，也参与免疫应答和炎症反应。VDBP与多种疾病相关，如子宫内膜异位症[1]、非小细胞肺癌患者预后[2]、慢性重型乙型肝炎疗效评价[3]等。目前，国内外关于VDBP与DN的关系研究的报道认为，二者之间存在一定的关系；即肾小管功能的紊乱，可导致尿液中VDBP含量升高[4]。DM患者特别是DN患者由于肾小管功能的紊乱，可能会使尿液中VDBP大幅度上升。故本文拟通过探讨DN患者尿液中VDBP含量的变化，阐明VDBP在DN早期诊断中的意义。
1资料与方法
1.1一般资料
选取2013年7月至2015年7月在兰州大学第一医院就诊的DM患者75例，其中男性38例，女性37例，平均(58.5±6.3)岁。糖尿病患者的诊断符合《2010中国2型糖尿病防治指南》的诊断标准，均排除高血压、泌尿系统感染、心功能不全、原发性肾脏疾病等引起的尿蛋白增多的疾病以及其它急性感染性疾病。
1.2分组依据
依据尿白蛋白与肌酐比率（UACR）将研究组分为尿白蛋白含量正常组（DM组，UACR＜30mg/g，25例，男性13例，女性12例，平均年龄为56.2±5.2)、微量白蛋白尿组(MI组，UACR介于30-300mg/g，25例，男性12例，女性13例，平均年龄为57.1±3.6)和大量尿白蛋白组(MA组，UACR＞300mg/g，25例，男性12例，女性13例，平均年龄为55.9±4.9)。另选取本院健康体检者25例为对照组(NC组)，男10例，女15例，平均(54.4±6.2)岁。各组间年龄、性别差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
1.3方法
详细记录患者的基本信息，如姓名、性别、年龄、身高、体重、病史、病程、收缩压、舒张压等。
所有受试者取晨尿5ml，室温3000rpm离心10min，取上清1ml置于1.5ml离心管中-20℃保存备用。于清晨空腹采集静脉血2ml，分离血清保存于-20℃备用。尿白蛋白（mAlb）、肌酐（Cr）、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白(HbAlc)的测定利用全自动生化分析仪进行。空腹血糖(FPG)的测定利用葡萄糖氧化酶法测定。采用双抗体夹心ELISA方法测定尿VDBP含量，试剂盒购自上海信裕生物科技有限公司，操作方法按照试剂盒说明书进行。肾小球率过滤按照下列公式计算：
GFR(ml/min1.73m2)=186×(Scr)-1.154×(年龄)-0.203×(0.742女性)。
1.4统计分析
采用SPSS19.0软件对不同组间的数据统计分析，对照组和实验组采用独立样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
指标间的相关性分析采用Pearson方法和多元线性回归分析法进行，以P<0.05为差异有统计学意义。
ROC曲线分析尿VDBP用于DN诊断的最佳阈值、特异性和敏感性。
2结果
2.1临床指标的分析
NC组和研究组（包括DM组、MI组、MA组）患者之间年龄、性别比例，没有差异(P＞0．05)，具有可比性（表1）。随着UACR的增高，病程也在延长，组间比较具有统计学意义(P<0.05)。Cr、HbAlc、BUN、VDBP和UACR在DM组、MI组和MA组间逐渐升高，不同组间比较有统计学意义(P<0.05)。因此，除了HbAlc和BUN外，VDBP可能也是糖尿病肾病诊断的候选靶标。与NC组相比，NA组、MI组、MA组的HDL-C和GFR水平逐渐下降(P<0.05)。SBP、DBP、TG、TC、FBG水平随着疾病的进程也在逐渐升高(P<0.05)。
表1临床指标的比较
注：*为与NC组相比有统计学意义，#为与DM组先相比有统计学意义，&为与MI组相比有统计学意义、VDBP含量以尿液中VBDP含量与肌酐比率表示
2.2VDBP与临床指标的相关性分析
Pearson相关性分析结果显示，VDBP与病程、SBP、DBP、HbAlC、Cr、TG、HDL-C、FBG、UACR、BUN呈正相关(P<0.05)，而与HDL-C和GFR呈负相关(P<0.05)，见表2。
表2VDBP与临床指标相关性分析
2.3VDBP与临床指标的多元线性回归分析
以VDBP为因变量，以病程、SBP、DBP、HbAlC、TG、HDL-C、FBG、BUN、HDL-C为自变量，进行多元回归分析。病程、SBP、FBG、UACR和BUN进人回归方程。表明病程、SBP、FBG、UACR、BUN和GFR其为DN患者尿VDBP的独立相关因素(P<0.05)（表3）。
2.4ROC曲线分析VDBP/Cr作为DN早期诊断分子的价值
通过对100例尿液样品的VDBP定量检测，ROC曲线分析结果表明，VDBP/Cr可以作为DN患者早期诊断的靶分子。尿VDBP/Cr曲线下面积为0.967，95%CI值为0.904-0.988。VDBP/Cr检测阈值为476.9ng/mg时，敏感性和特异性分别为94.0%和82.0%。
图1ROC曲线
3讨论
尿微量白蛋白是目前DN诊断的金标准，在临床上得到了广泛的应用。然而，尿微量白蛋白容易受到运动、尿道感染、高血压、心衰、发热等因素的影响；此外，大约有44.3%的肾功能障碍患者尿微量白蛋白水平没有发生明显的变化，单纯的尿微量白蛋白不能够准确地进行DN的诊断。因此，筛选出更敏感、更特异性的分子以满足早期DN的筛查，具有重要的意义。
VDBP是一种分子量为58kDa的糖蛋白，在血液中浓度大约为300-600mg/l，只要功能是负责维生素D的转运，对维持组织的正常功能有重要意义。VDBP活性的改变，可能会导致多种疾病。VDBP-maf是VDBP去糖基后的衍生物，具有激活巨噬细胞的功能，具有抗血管生成和抗肿瘤的作用。此外，VDBP在肾脏性疾病中的作用，也逐渐引起学者的广泛关注。VDBP参与了近端小管1,25(OH)2D生物合成过程，VDBP结合1,25(OH)2D后，以复合物的形式在细胞內吞受体介导的途径进行重吸收[2]。
本文对多种临床指标相关性分析发现，VDBP与病程、SBP、DBP、HbAlC、Cr、TG、HDL-C、FBG、UACR、BUN呈正相关(P<0.05)，表明随着疾病的发展，肾功能损伤程度逐渐严重，肾小管对VDBP的重吸收受到影响，从而导致尿VDBP含量也逐渐升高。
利用定量ELISA方法对75例2型糖尿病合并肾病患者尿VDBP含量进行测定。结果显示，DN患者尿VDBP水平显著高于非DN患者。在DM、MI与MA组之间，尿VDBP含量均具有统计学意义（p＜0.05）。此外，尿VDBP与DN的进展有显著相关性。ROC曲线分析结果表明，VDBP检测阈值为476.9ng/mg，敏感性和特异性分别为94.0%和82.0%。王媛等[5]的研究结果显示，VDBP用于2型糖尿病肾病诊断的敏感性与本文结果相似（为96.4%），而特异性低于本研究结果（仅为68%）。TIAN等报道VDBP检测阈值为552.243ng/mg时，敏感性和特异性分别为92.86%和85.0%，与本文的结果基本一致。
通过对DN患者尿VDBP含量的研究，发现VDBP含量与DN的进展呈正相关。由于本文入选患者数量较少，患者来源受到地域的限制。今后应当开展大样本、多区域的协作研究，为VDBP在DN早期诊断中的应用价值提供可靠的临床数据。
参考文献
[1]赵水苗,路莉,王德莹.维生素D结合蛋白与子宫内膜异位症的研究进展[J].实用妇产科杂志,2015,31(5):342-344.
[2]余晓燕,陆启光,姚杨伟.维生素D和维生素D结合蛋白在非小细胞肺癌患者中的表达及其对预后的影响[J].浙江医学,2015,0(8):619-621.
[3]朱增红.维生素D结合蛋白在慢性重型乙型肝炎疗效评价中的应用[J].中国现代药物应用,2014,8(11):143-143.
[4]王媛,史慧婷,姜书宁.糖尿病肾病患者维生素D结合蛋白水平及影响因素研究[J].中国全科医学,2015,18(31):3812-3817.
[5]王媛,史慧婷,姜书宁.2型糖尿病患者血清与尿维生素D结合蛋白水平的变化.中华内分泌代谢杂志,2015,31(7):592-595.
基金项目：西北民族大学2012中央高校基本科研业务专项基金项目（31920130043），西北民族大学2011-2012年度校级中青年科研项目（12XB1