基于双荧光素酶报告基因系统的人源SREBP1基因启动子的活性研究

论文摘要

目的构建固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）启动子双荧光素酶报告基因表达载体,为研究针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础。方法利用生物信息学软件,对SREBP1基因5′端上游5 000 bp序列进行启动子预测与分析。应用Gibson Assembly方法构建启动子双荧光素酶载体,并将构建成功的pGL3-SREBP1-pro重组质粒和内参质粒p RL-SV40共转染肝癌HepG2细胞并给予天然抑制剂大黄素,检测SREBP1转录活性的抑制效果。结果 SREBP1基因5′端上游2 000 bp区域内有启动子特征序列,存在转录因子结合位点;重组质粒经酶切及测序鉴定证实为阳性克隆,瞬时转染肝癌HepG2细胞后经双荧光素酶报告基因系统检测,所克隆的片段序列具有启动子活性,该活性可被大黄素所抑制。结论成功构建了pGL3-SREBP1-pro双荧光素酶报告基因表达载体,并证实其活性,可为进一步用于针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1材料
•   1.2方法
•     1.2.1分析软件
•     1.2.2HepG2细胞培养
•     1.2.3pGL3-SREBP1-pro启动子载体构建
•     1.2.4双荧光素酶报告基因的检测
• 2 结果
•   2.1 SREBP1生物信息分析
•     2.1.1 SREBP1启动子区特征序列及其转录因子结合位点预测结果
•     2.1.2SREBP1基因CpG岛分析
•     2.1.3 SREBP1可能的功能性顺式元件
•   2.2 SREBP1启动子双荧光素酶报告基因载体的构建结果
•   2.3 大黄素对SREBP1启动子双荧光素酶报告基因转录活性的影响
• 3 讨论
•   3.1 SREBP1是潜在的癌症治疗新靶点
•   3.2 生物信息学方法是预测SREBP1启动子的重要手段
•   3.3 双荧光素酶报告基因可有效检测SREBP1活性

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨念,李琛,李洪亮,郑燕,房树华,汪选斌,赵雅玮

关键词: 固醇调节元件结合蛋白,转录启动子,基因,报告,萤光素酶类,大黄素,蒽醌类,生物信息学

来源: 天津医药 2019年09期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 江苏大学附属句容医院药剂科,湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心中药药理实验室生物医药研究院武当特色中药研究湖北省重点实验室,镇江市第一人民医院

基金: 国家自然科学基金面上项目（81874356）,湖北省卫健委重点项目（WJ2017Z023）,湖北省卫健委中医药科研青年人才项目（ZY2019Q004）,湖北医药学院自由探索基金资助（2018YHKT01）

分类号: Q78

页码: 897-902

总页数: 6

文件大小: 1450K

下载量: 517