摘要：目的建立喘嗽宁片的质量标准。方法显微鉴别法定性茯苓；TLC 法定性鉴别地龙、甘草；HPLC 法测定黄芩苷、苦参碱含有量。结果 显微特征明显；TLC 斑点清晰，分离度好，阴性无干扰；黄芩苷、苦参碱分别在0.01567-0.6268μg、0.09623-1.9247μg 范围内线性关系良好(r ≥0.9999)、(r ≥0.9999)，平均加样回收率分别为98.8%(RSD=0.7%)、98.0%(RSD=1.1%)。结论该方法简便、可靠、准确，可用于喘嗽宁片的质量控制。
关键词：喘嗽宁片；黄芩苷；苦参碱；TLC；HPLC
0 引言
喘嗽宁片是由白果、苦杏仁、地龙、桑白皮、陈皮、黄芩、白前、苦参、甘草、茯苓10 味药材组成的复方制剂。收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十九册，具有清热平喘，止咳化痰的功效。用于支气管哮喘、喘息型支气管炎、肺气肿、肺心病早期治疗[1]。但其原质量标准仅为苦参、黄芩、陈皮的TLC 定性鉴别，较为片面。因此，基于2015 版《中国药典》要求[2]，本实验通过显微鉴别法鉴别茯苓，TLC 法鉴别地龙、甘草，HPLC 法测定黄芩苷、苦参碱含有量，为该制剂质量的全面控制提供依据[3，4]。
在船舶减速过程进行理论分析与数学计算基础上，建立船舶减速概率模型，实现对航道内船舶减速过程的定量描述,通过仿真试验对船舶减速概率模型进行验证。试验结果表明，概率模型能反映航道内船舶的减速概率。比较模型计算的结果与仿真结果，找出航道船舶减速产生连锁过程的临界点，而船舶减速连锁过程严重影响航道的通航能力。根据结果图中的临界点，可控制船舶到达率及船舶速度分布标准差，在临界范围内来降低船舶减速连锁效应的影响。
1 材料
Waters 2695 型高效液相色谱仪（配置Waters 2998 PDA检测器，美国Waters 公司）；薄层扫描仪（Visualizer-192142拍 照 系 统、Scanner-3 扫 描 系 统，瑞 士CAMAG 公 司）；Sartorius LE244S 型(0.1mg，德 国 赛 多 利 斯 公 司)、SartoriusBP211D ②型(0.01mg，德国 赛多利斯公司)电子分析天平。白果、苦杏仁、地龙、桑白皮、陈皮、黄芩、白前、苦参、甘草、茯苓均购自亳州市中正中药材饮片有限公司，经大连市药品检验所胡景莲主任中药师鉴定，均为2015 版《中国药典》项下规定的药材品种。地龙、甘草对照药材( 批号分别120987-201508、120904-201620)，黄芩苷（批号110715-201821，95.4%）、苦参碱（批号110805-201709，98.7%）对照品均购自中国食品药品检定研究院。作为对照品溶液甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为Milli-Q 超纯水。喘嗽宁片吉林某药业集团股份有限公司3 批（批号：180201、180901、180902）；吉林某制药集团股份有限公司3 批（批号：180501、180601、180602）；吉林某药业有限公司3 批（批号：20180301、20180302、20180303）；陕西某制药有限公司3 批（171201、180101、180801）；山西某制药有限公司1 批（批号：180501）；山西某药业有限公司1 批（批号：180401）；吉林某药业有限责任公司1 批（批号：180301）。
2 方法与结果
2.1 显微鉴别
图1 为处方中茯苓的显微鉴别。处方中茯苓半量为原粉入药，参考《中国药典》2015 年版一部“茯苓”药材的显微鉴别方法进行试验，显微特征明显。
691 Treatment of ureterovesical junction stricture with stones
图1 茯苓显微鉴定图
2.2 TLC 定性鉴别[5]
以处方为根本，将各味药去除，采取一定的工艺手段将其制成所需要的阴性对照，同时根据不同的制备方法将供试品溶液制备出来。
2.2.1 阴性对照溶液制备
2.2.2 地龙
2.3.3 供试品溶液制备
图2 地龙TLC 色谱图
1-15 样品 16 对照药材 17 阴性对照
图3 甘草TLC 色谱图
1 阴性对照 2 对照药材 3-17 样品
2.2.3 甘草
部分学者还关注从积极应对和协商的视角研究残障人员的休闲制约。Loucks-Atkinson A和Mannell R C［19］引入社会认知理论中的自我效能感 (Self-efficacy)概念研究纤维肌痛综合征患者参加健身运动的制约协商机制，结果显示:个人的协商效能感越高，其成功协商制约的信心就越高，因而参与动机、参与机率和协商努力也越高。
荧光斑点，特征性强，阴性无干扰。
取本品5 片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，加热回流1 小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml 使溶解，用正丁醇提取3 次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3 次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml 使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述对照药材溶液1μl，供试品溶液1-5μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:6:2）4℃放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。结果见图3，由图可如，供试品色谱在与各对照品色谱相应位置上显相同颜色的
2.3 黄芩苷 HPLC 定量测定[6]
对照品取苦参碱，对其进行精密的称定，并加入甲醇制作溶液，保证1ml 内含有60μg 的溶液，制备后待用。
Agillent TC-C18 色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5μm）；以甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）为流动相；检测波长为278nm。理论板数通过黄芩苷峰进行计算，其值应在4000 及以上；体积流量1.0ml；柱温30℃；进样量5μl。
2.3.2 对照品溶液制备
2.4.4 方法学考察
取本品8 片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，密塞，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至2ml，将其作为供试品溶液待用，另外，再使用0.5g 的地龙药品作为对照，加三氯甲烷20ml，按照以上的方法制备出对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，分别将以上制备的溶液吸取吸取10μl，并将两种溶液点于同一硅胶G 薄层板上，展开剂为甲苯-乙酸乙酯(9:1)，展开后将其取出并晾干，放在365nm 紫外光灯下进行检视，结果见图2，由图可知，与各对照品色谱相比较，供试品色谱显示的荧光斑点的颜色与其相同，呈现出较强的特征性，阴性无干扰。
取20 片本品，将外表的包衣去掉，并进行精密的称定，之后将其研细混匀，称取出0.4g 放进锥形瓶中，在里面加入50ml70%的甲醇，将重量进行称定，将溶液进行加热处理，回流1h，时间一到将其取出，并在室温下放置，再对重量进行称定，一旦有失去重量使用70%的甲醇进行补足，将溶液进行过滤处理，将续滤液进行精密量取2ml，将其放置在10ml 的量瓶中，再加入70%的甲醇，摇匀后待用。
2.3.4 方法学考察
按上述色谱条件测定峰面积，建立坐标系，其中横坐标为进样量，纵坐标为色谱峰面积，并绘制出标准曲线，得回归方程分别为：y =3455473x - 4632 r=0.9999，结果表明，黄芩苷在0.01567-0.6268μg 内呈现出良好的线性关系。精密度实验符合要求，峰面积RSD（n=6）为0.7%；方法重复性良好，含有量RSD（n=6）为0.3%；供试品溶液在24h 内稳定性良好，峰面积RSD（n=6）为0.8%；平均加样回收率为98.8%，RSD（n=6）为0.7%；分别用三种不同品牌色谱柱Agillent TC-C18（4.6×250mm 5μm）、Thermo SCIENTIFIC C18（4.6×250mm 5μm）、Diamoil C18（4.6×250mm 5μm）测定，分离效果良好，耐用性符合要求；方法专属性强，图4 显示阴性无干扰。
2.4 苦参碱 HPLC 定量测定[7，8]
2.4.1 色谱分析条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液（用三乙胺调节pH 值至7.6）（19:81）为流动相；检测波长：220 nm。色谱柱： Agilent Eclipse Plus-C18（4.6×250mm 5μm）。
我觉得我不该去问她这些，我无非是想找口水喝，或者想找点吃的什么的，已经给人家添麻烦了，干吗还要问人家这些过去的不快之事呢？我真是愚蠢到了极点。
2.4.2 对照品溶液的制备
2.3.1 色谱条件
我国的金融监管体制是以“机构监管”为主导的监管体制，这是由当下我国金融市场的诸多特质和其演化进程决定的，在一定程度上具有某种历史和现实的合理性。一方面，“机构监管”体制符合我国金融业分业经营的基本原则，总体上适应了金融市场的整体性需求。另一方面，我国金融市场的自由化程度较低，存在大量的行政性管制，须适当保留监管机构在金融业务和产品审批方面的权力行使和裁量空间［3］。
2.4.3 供试品溶液的制备
取本品20 片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，加浓氨试液1ml、三氯甲烷25ml，进行加热处理，并回流1h，进行过滤，使用的容器及残渣都要使用少量的三氯甲烷进行多次的洗涤，并进行过滤，将所得的滤液进行合并，回收溶剂至干，在残渣内加入适量的甲醇进行溶解，之后放置到10ml 的量瓶中，再加入甲醇至刻度，将其摇匀，滤过，取续滤液，即得。
对照品取黄芩苷，进行精密的称定，加入甲醇将其制成溶液，其中每1ml 中含有30μg 的溶液，制备后待用。
图4 黄芩苷 HPLC 色谱图
A 黄芩苷对照品溶液 B 供试品溶液 C 黄芩阴性样品溶液
图5 苦参碱 HPLC 色谱图
A 苦参碱对照品溶液 B 供试品溶液 C 苦参阴性样品溶液
按上述色谱条件测定峰面积，建立坐标系，其中横坐标表示进样量，纵坐标表示色谱峰面积，绘制标准曲线，Y=736074x -11527 r=0.9999，结果表明，苦参碱在0.09623-1.9247μg 范围内线性关系良好。精密度实验符合要求，峰面积RSD（n=6）为0.5%；方法重复性良好，含有量RSD（n=6）为0.7%；供试品溶液在24h 内稳定性良好，峰面积RSD（n=6）为0.9%；平均加样回收率为98.0%，RSD（n=6）为1.1%；分别用三种不同品牌色谱柱Thermo SCIENTIFIC C18（4.6×250mm 5μm）、Agilent Eclipse Plus-C18 (4.6×150mm 5μm)、Agilent 5 TC-C18（4.6×250mm 5μm）测定，分离效果良好，耐用性符合要求；方法专属性强，图5 显示阴性无干扰。
目前，我国各个地区尚没有合理的土地储备管理模式，再根据土地储备行为的主体实施者是政府，所以以政府为主导的土地储备管理模式为首选。实践充分表明，这种管理模式尽显优势，土地储备管理是政府优化土地结构的重要手段。另外，土地储备管理的主要对象是土地一级市场，而土地的所有权属于政府，导致土地一级市场被完全垄断，所以结合这种实际情况，我国的土地储备管理制度不能以市场为主导，而是应该以客观实际为出发点，也要遵循合理的市场规律，这样才有可能实现预期目标。
2.5 含量测定数据
采用供试品溶液制备项下方法，对15 批样品进行含量测定，因数据保密原因未提供产品批号信息，测定结果见表1。
总之，微课非常适合学生的主动性学习，可以为学生构建起自主学习和探究的环境，帮助学生更好的理解和掌握教学内容，可以满足学生的个性化学习需求，提高学生学习的自由度，并能拓展学生的视野，提升学生的知识应用能力.高中化学教师在教学中进行微课的合理应用，可以更好的促进学生的发展，提高教学效率.微课具有共享性，教师可以针对他人提出的建议予以改进，从而不断增强自己的能力.
对照组患者采用氯氮平片联合碳酸锂进行治疗:患者开始服用的剂量为每天50mg,14天内增加药物剂量至每天150mg到300mg之间,具体根据患者病情状况进行调整。整个治疗过程中,氯氮平片的平均剂量为每天(210±31.5)mg,碳酸锂的平均剂量为每天1g。
药典》2015 年版一部“黄芩”药材含量测定项下，按干燥品计算，黄芩以黄芩苷计不得少于9.0%，水分按10% 折算，喘嗽宁片中黄芩苷理论含量为不少于13mg/ 片，因吉林某药业有限责任公司对该公司喘嗽宁片品种质量标准进行提高，因此采用该标准的黄芩苷限度，每片含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于8.0mg。按《中国药典》2015 年版一部“苦参”药材含量测定项下，按干燥品计算，苦参以苦参碱和氧化苦参碱的总量计不得少于1.2%，喘嗽宁片中按本方法制备供试品后无氧化苦参碱成分，因此确定将苦参碱的含量作为本制剂定量指标之一，按样品实际测定结果平均值的70% 制定限度，每片含苦参以苦参碱（C15H24N2O）计，不得少于0.55mg。
3 讨论
中药质量标准的规范化对于中药发展是非常关键的指标之一[9-12]，在我国的现行中成药标准中并没有多少对药味进行鉴别的，且测定指标也相对来说较少。喘嗽宁片是由10味药材组成的，属于典型的复方制剂，原标准中共有苦参、黄芩、陈皮3 味药的薄层鉴别检查项目，故本实验新建了地龙、甘草的鉴别方法。
液相色谱法实验中分别应用了3 根色谱柱进行多次反复的实验，3 根色谱柱的厂家、粒径、长度均不相同，且出峰时间不恒定。在对黄芩苷、苦参碱进行含量测定时使用的以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，不同的生产企业使用的填料不同，因此在进行封端处理时也表现出了一定的差异性，使得一些待测成分残留在色谱柱上发生了一些变化。
表1 含量测定结果
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参考文献
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Study on Quality Standard of Chuansouning Tablets
LI Xian-gang, JI xue, LIU Yao ,YU Yuan-yang ,HU Jing-lian
(Dalian Inspection and Testing Certification Technology Service Center, Dalian, Liaoning)
ABSTRACT:Objective To establish the quality standard of chuansouning tablets. Methods Microidentification was used to identify poria cocos, TLC was used to identify dilong and licorice, and the contents of baicalin and matrine were determined by HPLC. Results Microscopic characteristics were obvious; TLC spots were clear, the separation degree was good, the negative was not disturbed; Baicalin and matrine had good linear relationship in the range of 0.01567-0.6268 ug, 0.09623-1.9247 ug, respectively (r ≥ 0.9999), (r ≥ 0.9999), the average recovery of sample addition was 98.8% (RSD = 0.7%) and 98.0% (RSD = 1.1%). Conclusion The method is simple, reliable and accurate, and can be used for the quality control of chuansouning tablets.
KEY WORDS: Chuansouning Tablet; Baicalin; Matrine; TLC; HPLC
中图分类号：R927.2
文献标识码：A
DOI:10.19613/j.cnki.1671-3141.2019.85.010
本文引用格式：李宪刚，季雪，刘尧，等.喘嗽宁片质量标准的研究[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(85)：20-23.
基金项目：2018 年度国家药典委员会药品标准提高课题（课题任务项目号2018Z033）
作者简介：李宪刚，男，主管药师，从事药物分析与新药研究。
标签：溶液论文; 黄芩论文; 色谱论文; 地龙论文; 甲醇论文; 医药论文; 卫生论文; 中国医学论文; 中药学论文; 中药品论文; 《世界最新医学信息文摘》2019年第85期论文; 2018年度国家药典委员会药品标准提高课题(课题任务项目号2018Z033)论文; 大连市检验检测认证技术服务中心论文;