刘春鹤1林名瑞2
（1古田县医院352200;2福建医科大学第一附属医院350005）
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）7-0218-03
【摘要】目的探讨辛伐他汀对脓毒症大鼠血清内毒素增敏系统的影响。方法30只雄性SD大鼠随机等分成三组：对照组（A组）、脓毒症组（B组），辛伐他汀组（C组）。采用盲肠结扎穿孔（CLP）构建脓毒症模型；对照组行相同手术除CLP外。辛伐他汀组制模前1h尾静脉注射辛伐他汀2mg/kg，对照组和脓毒症则分别静脉注射平衡液5ml/kg，术后每隔8小时同样给药一次。术后12、24小时尾静脉采集血标本ELISA检测血清中LBP及CD14表达水平。结果辛伐他汀组大鼠血清中LBP及CD14表达水平显著低于脓毒症组。结论辛伐他汀可能通过调节血清内毒素增敏系统的LBP及CD14表达从而对脓毒症脏器起到保护作用。
EffectofSimvastatinonLBPandCD14intheserumofthesepsisratmodel
【Abstract】Objective:ToinvestigatetheeffectofsimvastatinontheLBPandCD14intheserumofthesepsisratmodels.Methods:ThirtymaleSDratswererandomlyequallypidedintocontrolgroup（Agroup）,sepsisgroup（Bgroup）andSimvastatingroup（Cgroup）.Sepsisratmodelswereinducedbycecalligationandpuncture(CLP)．RatsofCgroupwereintravenousinfusionofsimvastatin2mg/kg.RatsofbothAandBgroupswereintravenouslyinjectedbalancedsolution(5ml/kg).Ratsofeachgroupweregiventhesametreatmentevery8hours.Bloodsamplesweretakenfromvenacaudalis24hoursaftersurgery.ThenthelevelsoftheLBPandCD14intheserumweredetectedbyELISAmethod.Results:thelevelsofLBPandCD14intheserumofratsofSimvastatingroupweresignificantlylowerthanthesepsisgroup.Conclusion:theprotectiveeffectsofSimvastatinonsepsismaybeduetoitregulatestheexpressionoftheLBPandCD14.
脓毒症源于严重细菌感染，常表现为全身炎性反应综合征。研究表明脓毒症早期过度的炎症反应是脓毒症形成的重要原因[1]。尽管全世界投入大量的人力及物力来研究脓毒症可能的机制及治疗方法，仍未取得显著效果。脓毒症患者发病率及死亡率仍高。据美国一学者研究认为脓毒症的发病率在逐年上升，死亡率最高可达45.6%，目前仍为感染性疾病的主要死亡原因[2]。近年来研究发现辛伐他汀治疗能显著提高脓毒症大鼠生存率，但其仍主要应用于高脂血症及冠心病等疾病。已有研究认为脓毒症大鼠脂多糖结合蛋白(LBP)及其受体可溶性CD14亚型蛋白水平在预测脓毒症严重性方面有重要作用[3]。脂多糖结合蛋白(LBP)和脂多糖受体CD14能增加组织对内毒素的敏感性,可显著提高内毒素的活性，因而称其为内毒素增敏系统[4]。本研究拟观察脓毒症大鼠血清LBP/CD14增敏系统的改变来研究辛伐他汀对脓毒症大鼠的保护作用。
1材料与方法
1.1动物模型制备与分组：健康雄性SD大鼠30只，体重200±20g（购自上海斯莱克实验动物有限公司）。随机等分为对照组、脓毒症组，辛伐他汀组。C组制模前1h尾静脉注射辛伐他汀（购自Merck公司，美国，辛伐他汀溶于含2%DMSO的PBS）2mg/kg，对照组和脓毒症则分别肌注平衡液5ml/kg，术后每隔8小时同样给药一次；辛伐他汀组及脓毒症组均按Hubbard,W.J等人介绍的[5]（CLP）方法建立大鼠肠源性脓毒症模型。正常对照组则行开腹、关腹，但不予盲肠结扎穿孔。三组术毕均皮下注射平衡液50ml/kg以补充术中丢失的体液并抗休克治疗，术后正常饮食、自由饮水。
1.2各组大鼠于术后12、24h取尾静脉血2ml，2000r/min离心20min,取上层血清，置-20℃冰箱保存待测。
1.3血清LBP和sCD14均采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定（试剂盒购自上海达为科生物科技有限公司）。
1.4采用SPSS11.5(SPSS,Inc,Chicago,IL,USA).统计学软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2实验结果
除A组外，B组及C组大鼠血清中LBP及CD14水平在24h显著的高于12小时。相对于A组，B组血清中LBP及CD14水平提高有显著意义。相对于B组，C治疗组大鼠则显著下降，但相对于A组仍高。（见表1，2）。
表1不同处理组大鼠血清LBP水平的比较
注:与A组相比▽p<0.05,与B组相比☆p<0.05。
表2不同处理组大鼠血清LBP水平的比较
注:与A组相比▽p<0.05,与B组相比☆p<0.05。
3讨论
脓毒症为严重感染时炎症因子分暴引起的一种致命性的全身炎症反应综合症。尽管随着基础研究和临床治疗方法的改进，脓毒症患者的生存率近二三十年来有所下降，但仍为ICU患者死亡的主要原因[6]。
辛伐他汀能够竞争性抑制羟甲基戊二酸辅酶A(HMG-CoA)还原酶，临床中主要用于高血脂患者及心血管系统疾病治疗。但近年来研究发现它不仅能够干预机体胆固醇的生成，而且能干预甲羟戊酸盐、焦磷酸法尼酯及焦磷酸牛龙牛儿基牛龙牛儿酯的合成。这些物质在细胞内信号传导通路中起着重要的作用[7]。正因为他汀类药物的这一多效应作用，决定了其能够调节固有免疫和适应性免疫以及具有抗炎作用[8]。研究还发现它能够缓解脓毒症的病情，可能主要通过抑制组织因子表达减少促凝物质水平以及降低血栓调节蛋白的表达来起作用的。2009年ImadM等人荟萃分析了他汀类在临床感染性疾病的应用也发现它对临床各型感染的病人有裨益[9]。然而其作用机制仍未完全明确。本实验拟通过观察辛伐他汀药物对脓毒症大鼠血清增敏系统的影响来初步研究辛伐他汀的抗感染机制。
研究认为LBP作为一种固有免疫的关键性物质在宿主抵抗革兰氏阳性菌中发挥着重要[10]。然而当机体遇大量LPS侵袭时，LBP就可扩大LPS的效应从而对宿主造成损害[11]。相反在致命性内毒素血症中，研究发现利用LBP多克隆抗体来阻滞LBP活性对其是有益的[11]。同样，CD14作为内毒素增敏系统的成员之一在脓毒症的发生发展中起到重要作用。CD14是一种内毒素相关的信号分子，在提高巨噬细胞对内毒素反应的敏感性方面起重要作用[12]。内毒素CD14复合体能够结合TLR4受体从而使内毒素诱导的IL-1相关激酶募集，从而调节NF-κB的活化及促发瀑布样细胞因子的释放，进而促进多功能器官衰竭的形成[12]。基础研究也发现使用抗CD14单克隆抗体能够抑制脓毒症时的全身炎症反应，从而起保护作用[13]。而本实验中，我们观察发现辛伐他汀能够显著降低脓毒症大鼠血清中LBP及CD14水平。因此，我们认为辛伐他汀可能通过调节内毒素增敏系统而起到对脓毒症大鼠的保护作用。
综上所述，在危重病领域，脓毒症及脓毒症相关性MODS是患者死亡的主因。LBP及CD14的增敏效应能加重脓毒症患者的病情。辛伐他汀对脓毒症的保护作用可能是通过降低LBP及CD14的水平来起作用的，并有望成为治疗脓毒症的新型药物。
参考文献
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