食品中检测志贺氏菌的实时荧光RPA方法的建立与应用

论文摘要

本研究旨在建立志贺氏菌的实时荧光重组酶聚合酶扩增技术real-time RPA)检测方法。根据志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）的保守序列设计引物及exo探针,利用荧光检测设备实时监控反应进程,在39℃恒温下20 min即可完成检测。该方法特异性扩增志贺氏菌,对非志贺氏菌无扩增;以志贺氏菌基因组DNA为模板,该方法的检测灵敏度为3.5×10-3ng/μL,同已发表的real-time PCR方法一致。人工污染试验表明,当鸡肉、西兰花样品污染量为9 CFU/25g,增菌时间为8 h时,即可通过real-time RPA方法检出志贺氏菌。在人工污染试验中,real-time RPA和real-time PCR检测结果一致,而前者仅需7～12 min,后者则至少需要35 min（Ct值为27～34之间）。本研究建立的志贺氏菌real-time RPA方法特异性强,灵敏性高,反应时间短,操作方便,为食源性致病菌检测提供了一个新的技术平台。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要试剂与设备
•   1.2 菌株
•   1.3 细菌基因组DNA的提取
•   1.4 引物探针的设计与合成
•   1.5 实时荧光RPA方法的建立
•   1.6 实时荧光PCR方法
•   1.7 特异性和灵敏性试验
•   1.8 人工污染样品检测
• 2 结果与分析
•   2.1 特异性试验
•   2.2 灵敏性试验
•   2.3 人工污染样品的检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘立兵,孙晓霞,姜彦芬,王金凤,陈志敏,王建昌

关键词: 志贺氏菌,重组酶聚合酶扩增,检测

来源: 中国食品学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 石家庄海关技术中心

基金: 国家质量监督检验检疫总局科研项目(2016IK107)

分类号: TS207.5

DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.10.032

页码: 259-264

总页数: 6

文件大小: 263K

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