导读:本文包含了中性鞘糖脂论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:糖苷,神经,抗药性,肿瘤,细胞,卵巢,卵巢癌。
中性鞘糖脂论文文献综述
陈嘉峰,孙宏侠,秦震[1]（2005）在《应激性高血压局灶性脑缺血大鼠脑组织中性鞘糖脂含量的变化及外源性神经节苷脂GM_1的影响》一文中研究指出目的研究局灶性脑缺血后脑组织内中性鞘糖脂含量的变化及外源性神经节苷脂GM1对其影响。方法采用雄性SD大鼠,通过足底电刺激方法制备应激性高血压动物模型,在此基础上阻断一侧大脑中动脉,制成局灶性脑缺血。实验组于缺血前30min腹腔内注射GM1(10mg／kg体重)。分别测定缺血后3、12、24h后脑组织内中性鞘糖脂的含量。结果在缺血的早期中性鞘糖脂的含量明显降低,随着缺血时间的延长其含量逐渐升高。GM1保护组中性鞘糖脂含量的变化明显轻于实验组。结论脑缺血可以导致神经质膜结构成分发生变化而神经节苷脂GM1对脑缺血具有脑保护作用。(本文来源于《中风与神经疾病杂志》期刊2005年05期）
郑颖娟[2]（2004）在《免疫活性细胞和肿瘤耐药细胞的中性鞘糖脂表达与肿瘤免疫的相关关系研究》一文中研究指出目的：鞘糖脂广泛分布于真核细胞质膜，它们不仅是细胞的基本结构单位，而且随着细胞的生命状态和功能状态不断地发生着变化，在细胞的粘附、生长、分化、增殖、信号转导、抗原递呈等基本活动中发挥重要作用。按其所含单糖性质，鞘糖脂分为中性鞘糖脂和酸性鞘糖脂。中性鞘糖脂仅含中性糖类，按所含糖基数目的多少，又分别称为单己糖神经酰胺(CMH)、二己糖神经酰胺(CDH)、叁己糖神经酰胺(CTH)及四己糖神经酰胺等。四己糖神经酰胺因是人类红细胞膜上的主要鞘糖脂，故又被称为红细胞糖苷脂(Glob)。既往由于受限于中性鞘糖脂检测手段的灵敏度，对鞘糖脂生物学功能的研究多集中在神经节苷脂和大块组织的中性鞘糖脂上，对淋巴细胞这样鞘糖脂含量极微组织中性鞘糖脂的研究甚是缺乏。所以，本课题旨在建立一种灵敏度高、稳定性好的中性鞘糖脂的检测方法，并应用该方法检测免疫活性细胞和肿瘤细胞中性鞘糖脂在不同状态下的表达规律，初步探讨效靶双方中性鞘糖脂的表达与肿瘤细胞免疫的相关关系，为深入研究肿瘤免疫的分子机制及提高过继性细胞免疫治疗(AIT)的疗效提供新思路。 方法：1．中性鞘糖脂放射自显影检测方法的建立：(1)应用~(14)C标记的鞘糖脂合成前体—棕榈酸为示踪剂，应用液闪仪测定不同活度梯度示踪剂所标记的KB细胞含量，建立示踪放射比活度与细胞标记量的曲线，确定所需的最佳放射比活度；(2)对提取的中性鞘糖脂按不同的放射活度进行高效薄层层析后，行放射自显影，摸索最佳的曝光时间。(3)比较放射自显影与碘显色法的检测灵敏度。2．不同时期LAK细胞中性鞘糖脂的表达与其形态及功能的相关性研究：(1)在培养过程中观察PHA-LAK细胞的形态学变化；(2)在LAK-I期和LAK-M期，应用~(14)C棕榈酸为示踪剂，标记PHA-LAK细胞。收集两期细胞的中性鞘糖脂，进行放射自显影。3．与敏感、耐药及耐药逆转株共育后LAK细胞中性鞘糖脂的表达与肿瘤免疫的关系研究：(1)在LAK-M期，应用~(14)C棕搁酸标记LAK细胞，之后与肿瘤亲本株KB细胞、耐药株KBVZoo细胞以及耐药逆转株KBVV细胞共育24小时，期间连续观察LAK细胞的形态学变化;(2)采用MTT比色法，研究LAK细胞及NK细胞对叁株肿瘤细胞的杀伤活性;(3)收集共育前后标记LAK细胞的中性鞘糖脂，进行放射自显影。3.敏感、耐药及耐药逆转株中性鞘糖脂的表达与肿瘤免疫的关系研究:(l)应用’4c棕搁酸标记KB、KBv20。以及KBvV细胞，之后与LAK细胞共育24小时，检测共育前后叁株肿瘤细胞中性鞘糖脂的表达;(2)观察共育24小时后叁株肿瘤细胞的形态学变化;(3)叁株肿瘤细胞对LAK细胞溶瘤的敏感性观察。 结果:1.’4c棕搁酸能较好地标记细胞中性鞘糖脂，选择合适的示踪剂量和曝光时间可以获得清晰稳定的放射自显影图像，而且在碘显色法无法清晰显示的水平，依然可以获得清晰的放射自显影图像。在应用放射自显影法检测不同状态下LAK细胞中性鞘糖脂的表达时发现，该方法能清晰稳定地检测到低至10“水平的LAK细胞的中性鞘糖脂，比常规碘显色法灵敏度提高了50一100倍。2.生长过程中PHA一LAK细胞形态学与中性鞘糖脂表达的变化:(l)形态学变化:在LAK一I期，细胞变大，粘附力增强，可见贴壁生长，细胞之间则相互聚集形成集落，且随着刺激时间的延长，集落越来越大;在用无丝裂原的培养液换液，进入LAK一M期后，细胞集落逐渐消散，细胞变小;在LAK一Mp期，细胞变形能力较强，多见伪足现象;随着培养时间的延长，至LAK一Ma期，细胞变圆，伪足现象减少并逐渐消失。(2)中性鞘糖脂表达的变化:PHA一LAK细胞在LAK一I期和LAK一M期其中性鞘糖脂的表达均以CTH和Glob为主，但四种中性鞘糖脂的表达比例存在着明显的差异。LAK一I期短糖链中性鞘糖脂CMH和CDH的含量明显高于LAK一M期;在LAK一M期，随着培养时间的延长，CMH和CDH的含量逐渐降低直至无法检测到，而CTH和Gfob高级复杂糖脂的比例逐渐升高。3.与不同肿瘤细胞共育后LAK细胞形态、功能及中性鞘糖脂表达的变化:(l)形态学变化及比较:共育后不久，LAK细胞即发生变形运动，伸出伪足，并向靶细胞周围聚集。继之，LAK细胞的伪足与靶细胞紧密接触，靶细胞胞浆突起回缩，胞体变圆，两者接触处可见靶细胞呈泡沫样变形。1至2小时内，可见大量靶细胞被LAK细胞包围，LAK细胞在接触一个靶细胞的同时，仍能伸出伪足接触邻近靶细胞，将其拉近，形成较大的由多个LAK细胞和靶细胞组成的类似集落的细胞团块，而靶细胞多数变形，部分胞体破碎或呈固缩状。与KB细胞组相比，在KBv200和KBVV组，LAK细胞出现在靶细胞周围的时间早，数量多，伸出伪足的LAK细胞比率高，出现集落样细胞团块的时间亦早。(2)杀瘤活性的比较:NK和LAK细胞对耐药株KBv20。耐药性逆转前后的杀伤率均明显高于敏感株KB(p<0.05)，而对耐药株和逆转株的杀伤率无统计学差异(P>.05)。LAK对各株的杀伤活力均明显强于NK细胞(p<0.05)。(3)与不同肿瘤细胞共育后，LAK细胞中性鞘糖脂表达的变化:共性:与共育前比较，短糖链中性鞘糖脂CMH和CDH出现表达，CDH的含量增高得尤为明显;CTH和Glob高级复杂糖脂的百分含量因之减少。个?(本文来源于《第一军医大学》期刊2004-05-01）
李胜平,王丽莉,张积仁,张健[3]（2003）在《中性鞘糖脂表达在卵巢癌细胞株SKOV_3/Adr多药耐药中的作用》一文中研究指出目的 探讨中性鞘糖脂 (N GSLs)表达在卵巢癌细胞株的多药耐药 (MDR)中的作用。方法 利用叁苯氧胺(TAM)和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,运用MTT法分析了TAM、VRP的逆转效应。采用改良的Hakamori方法提取、纯化了耐药亚株SKOV3 /AdrMDR逆转前后及亲本株SKOV3 细胞的N GSLs ,高效薄层层析 (HPTLC)分析了这些N GSLs的表达。结果 SKOV3 /Adr和SKOV3 的N GSLs表达有差异 ,SKOV3 /Adr的CMH (monohexosylceramide ,单己糖神经鞘氨醇 )表达较SKOV3 强。经TAM、VRP作用后 ,SKOV3 /Adr的耐药性发生逆转 ,CMH表达降低。结论 卵巢癌的多药耐药性与中性鞘糖脂相关 ,CMH可能为卵巢癌MDR相关中性鞘糖脂抗原。(本文来源于《四川医学》期刊2003年10期）
秦棠妮[4]（2002）在《凋亡相关蛋白、中性鞘糖脂与人卵巢癌细胞株COC1/DDP多药耐药相关性及逆转的研究》一文中研究指出目的：卵巢癌对化疗的多药耐药性(multidrug reistance，MDR)是化疗失败的主要原因，也是提高卵巢癌五年生存率面临的难题之一。多药耐药是指，肿瘤细胞先天存在的或经化疗药物治疗后产生的对所用药物以及结构和作用机制完全不同的其他药物产生交叉耐药的现象。目前研究发现，多药耐药并非单一机制所致，而是基因、蛋白质、脂类等各种细胞组成成分和药物的摄取、转运、解毒、细胞凋亡、信号传导等多种细胞功能改变所致的结果。近年来，部分国内外学者开始关注中性鞘糖脂在耐药中的作用。本课题选择P-gp表达阴性、对DDP(顺铂)耐药的卵巢上皮癌细胞株COC1／DDP及其亲本敏感细胞株COC1为研究对象，研究中性鞘糖脂CMH(单己糖神经酰胺)、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与耐药的关系，以及经逆转剂mifepristone逆转耐药后，细胞中CMH、Bc1-2、Bax的表达以及凋亡的变化，初步揭示了CMH、Bcl-2、Bax在卵巢上皮癌细胞COC1／DDP耐药中的作用，为卵巢癌治疗和耐药逆转方面提供新思路和体外实验依据。方法：实验采用流式细胞仪检测敏感细胞株COC1和耐药细胞株COC1／DDP凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax的阳性率；不同浓度的mifepristone对耐药细胞株COC1／DDP Bc1-2和Bax表达的影响。改良的Hakamori方法分别提取、纯化耐药细胞株COC1／DDP和敏感细胞株COC1的中性鞘糖脂，高效薄层层析(HPTLC)、凝胶光密度成像系统分析两者CMH的差异；耐药细胞株COC1／DDP经mifepristone处理后，CMH的变化。MTT法检测耐药细胞株COCI／DDP的耐药性，mifepristone对 COCUDDP的增敏作用。透射电镜观察 COC／DDP细胞株经mifepristone处理前后细胞形态学的变化。DNA凝胶电泳观察COCI＊DP耐药细胞株经mifepristoen作用后，DNA梯状凋亡带的产生。统计软件 SPSS 8．0对数据进行 t检验或方差分析或析因分析。 结果：耐药细胞株COCI／DDP B。12阳性率为 23．sl％士0人4％，明显高于 COCI细胞的 0．88oto．07o（P＜0．001）。而 Bax的表达相反，COCI／DDP的阳性率12．75o土0．60o低于COCI的阳性率15．42o土0．25％（Pro刀5）。经浓度为 二．25＊mol／L、sumollL mlfeprlstone分别处理后的耐药细胞株COCI／DDP 的Bcl．2 的阳性率分别下降到19．40％土0石9％和14．23％土0．44％（尸＜0刀of），Bax分别上升到25石0％士0．88％和 33．89％士0．28％（P＜0刀of人 CMH的百分含量，耐药细胞株 COCI0DP 37．14％土3．34％，明显高于敏感细胞株 COCI 14．05％士 l．440（P＜0．001）。经浓度为 l．25 n mol／L、5．0 n mollL mifepristone分别处理后的耐药细胞株COCI／DDP的CMH分别为26．62O士2．63o （P＜ 0．05）、17．50％士0．67％（Prto．001）。mifepristone的细胞毒性实验显示它的浓度在 1．25～5 n mol／L时，对 COCI／DDP耐药细胞株无明显抑制作用，浓度在 10 u mol几 以上时，将抑制细胞生长。COCI／DDP耐药细胞株对 DDP的生存率曲线显示 mifepristone．25 nmol／L的低浓度即能使曲线下降（P＜0．05），浓度为 5 u mol／L时下降程度更大（P＜0．001人经mifepristone和DDP共同处理的COCI／DDP细胞，绝大部分细胞出现了典型的凋亡形态：细胞变圆，微绒毛脱落，胞浆浓缩，内质网扩张成泡状，染色质浓缩呈新月状、凝聚在细胞膜周边，形成多个凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳出现了梯状的DNA条带。而单用相同浓度的 DDP处理或 mifepristone处理的 COC／DDP细胞，则观察不到上述细胞的凋亡形态，琼脂糖凝胶电泳也不出现梯状的DNA条带。 结论：l、卵巢癌耐药细胞株COCI／DDP和其亲本敏感株COCI在凋亡相关蛋白BclZ、Bax的表达上存在明显差异。2、与亲本敏感细胞比较，COCI／DDP的中性鞘糖脂CMH显着升高。3、mifepristone — —2——可增强COCI／DDP对DDP的敏感性，促进细胞凋亡。4、COCI／DDP耐药性经mifepristone逆转后，凋亡相关蛋白Bax表达增强，BcIZ表达减弱，中性鞘糖脂CMH受抑制。(本文来源于《第一军医大学》期刊2002-05-25）
袁匀[5]（2001）在《中性鞘糖脂表达与卵巢癌细胞株SKOV_3/AdrR多药耐药性关系的研究》一文中研究指出目的：本实验主要讨论中性鞘糖脂（neutral glycosphingolipid，N-GSL）表达与卵巢癌细胞株SKOV_3/AdrR多药耐药性（multidrug resistance，MDR）的关系，探讨葡糖酰基鞘氨醇合酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇（1-pheny1-2-palmitoylamino-3-morpholino-1-propanol，PPMP）在MDR逆转中的作用，了解PPMP抑制糖脂合成前后耐药细胞有关耐药性指标的改变。在中性鞘糖脂方面研究卵巢癌多药耐药的逆转，寻找新的耐药逆转剂。方法：用改良的Hakamori方法提取、纯化卵巢癌耐药系SKOV_3/AdrR和亲本敏感细胞SKOV_3的中性鞘糖脂，高效薄层层析（HPTLC）分析比较其单已糖酰基鞘氨醇（ceramide monohexoside CMH）差异，用PPMP作用于细胞后，再分析其变化，测定PPMP抑制中性鞘糖脂合成的作用。用MTT法（药敏检测）分析PPMP对细胞耐药性的影响。逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）方法分析PPMP对细胞mdr1基因mRNA的影响。流式细胞术测定mdr1编码产物P糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）的表达和细胞内罗丹明药物浓度（以研究P-gp的功能）。结果：耐药细胞SKOV_3/AdrR和亲本敏感细胞SKOV_3相比较，CMH含量有差异，耐药细胞高于敏感细胞，PPMP可抑制耐药细胞的CMH合成，抑制程度与剂量有关，5μmol/L、15μmol/L PPMP作用48h，细胞CMH受抑制率分别为40％、44％，25μmol/L PPMP作用细胞48h，CMH受抑制率为100％。PPMP可增加耐药细胞SKOV_3/AdrR对阿霉素的敏感性。SKOV_3/AdrR细胞mdr1表达阳性，而SKOV_3细胞mdr1表达阴性。5μmol/L PPMP、15μmol/L PPMP分别作用细胞48h，均可部分抑制SKOV_3/AdrR细胞mdr1表达，25μmol/L PPMP作用细胞48h可完全抑制SKOV_3/AdrR细胞mdr1表达。PE标记P-gp单克隆UIC2抗体的免疫荧光测定显示，SKOV_3/AdrR细胞的P-gp表达高于SKOV_3细胞，流式细胞术直方图可见SKOV_3/AdrR细胞的曲线明显右移，受PPMP作用后，SKOV_3/AdrR细胞P-gp表达降低。亲本敏感细胞SKOV_3内Rh123浓度（用平均荧光强度表示）高于相应的耐药SKOV_3/AdrR细胞，SKOV_3/AdrR细胞受15μmol/L、25μmol/L PPMP作用后，测其细胞内Rh123荧光强度平均值分别为389.98和426.08，与未用PPMP的SKOV。八drR相比有显着性差异u幻．05人即PP皿可使P唱p介导的药物外流减少，这种调节作用与PPNfl，剂量有关。结论：葡糖酚基鞘氨醇合酶抑制剂PPMP抑制中性鞘糖脂表达，可逆转卵巢癌的多药耐药性，影响 mdrl转录水平、翻译水平和 P唱p外排泵功能。(本文来源于《第一军医大学》期刊2001-05-01）
张健,张积仁,袁亚维,赵燕,林学颜[6]（2001）在《中性鞘糖脂在KBv_(200)细胞的表达及其与多药耐药性的关系》一文中研究指出目的 研究肿瘤细胞mdr1与其细胞表面中性鞘糖脂 (N GSLs)表达的关系。方法 利用特异性切割mdr1的核酶 (ribozyme)为工具 ,以表达mdr1的耐药细胞株KBv2 0 0 为靶细胞 ,采用脂质体转染技术 ,将含核酶的质粒pHβApr 1neo/ 5mR3及空载体pHβApr 1neo导入KBv2 0 0 及其亲本KB细胞内 ,运用Northern blotting、免疫组化方法观察核酶对mdr1mRNA及P gp的影响 ,用改良的Hakamori方法提取、纯化耐药逆转前后及KB细胞的N GSLs ,以高效薄层层析 (HPTLC)分析不同细胞亚株N GSLs的表达。采用MTT法分析糖脂合成抑制剂DL PPMP对肿瘤细胞多药耐药性 (MDR)的逆转作用。结果pHβApr 1neo/ 5mR3及pHβApr 1neo可以在KB、KBv2 0 0 细胞中稳定表达 ,mdr1 核酶可以特异性地切割mdr1,导致KBv2 0 0 / 5mR3的mdr1mRNA含量下降 ,P gp表达减低。KB和KBv2 0 0 的N GSLs表达有差异 ,KBv2 0 0 的单乙糖神经鞘氨醇 (monohexosylceramide ,CMH)、二乙糖神经鞘氨醇 (dihexosylceramide ,CDH)表达较KB强 ,核酶逆转MDR后 ,KBv2 0 0 / 5mR3的CMH、CDH表达降低 ,以CMH为着。DL PPMP可通过抑制CMH的合成 ,逆转KBv2 0 0 对长春新碱 (VCR)的耐药。结论 肿瘤细胞mdr1与其细胞表面N GSLs表达相关 ,CMH为耐药相关N GSLs,抑制耐药细胞CMH的合成可能?(本文来源于《中华肿瘤杂志》期刊2001年02期）
张积仁[7]（2001）在《肿瘤相关中性鞘糖脂的实验研究》一文中研究指出为了探讨中性鞘糖脂与肿瘤发生、抗原调控、免疫逃避的关系 ,实验系统研究了中性鞘糖脂在胚胎及肿瘤组织中的表达规律及临床意义 ,分析了正常及异常表达的鞘糖脂对肿瘤细胞生长调控、免疫逃避和多药耐药的影响。发现了肿瘤胚胎相关抗原CDH、肿瘤耐药相关中性鞘糖脂CMH和肿瘤抑制因子Globoside ;揭示了抑制糖脂合成及去N 糖基化在逆转肿瘤耐药和肿瘤治疗中的重要意义。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2001年03期）
李胜平,王丽莉,张积仁,张健[8]（2001）在《卵巢癌细胞株COC1/DDP多药耐药逆转对中性鞘糖脂表达的调控作用》一文中研究指出为探讨逆转卵巢癌细胞株的多药耐药性 (MDR)对细胞表面中性鞘糖脂 (N GSLs)表达的调控作用 ,以叁苯氧胺 (TAM )和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,用MTT法分析了TAM、VRP的逆转效应 ,采用改良的Hakamori方法提取、纯化了耐药亚株COC1/DDPMDR逆转前后及亲本株COC1细胞的N GSLs,高效薄层层析(HPTLC)分析了N GSLs的表达。结果显示 ,COC1/DDP和COC1的N GSLs表达有显着差异 ,COC1/DDP的CMH表达较COC1强 ;经TAM、VRP作用后 ,COC1/DDP的耐药性发生逆转 ,CMH表达降低。说明卵巢癌的多药耐药性与中性鞘糖脂CMH相关 ,CMH可能为卵巢癌MDR相关鞘糖脂抗原。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2001年03期）
张健,汪森明,赵燕,张积仁[9]（2001）在《CMH为KBv_(200)耐药相关中性鞘糖脂》一文中研究指出为了研究耐药细胞株KBv2 0 0 中性鞘糖脂表达的规律 ,采用改良的Hakomori法提取、纯化了KB及其耐药细胞株KBv2 0 0 的中性鞘糖脂 ,行高效薄层层析 ,分析其含量的异同 ;并以糖脂合成抑制剂PPMP抑制KBv2 0 0 中性鞘糖脂的合成 ,观察了其对KBv2 0 0 耐药性的逆转作用。结果发现 ,KBv2 0 0 的CMH和CDH表达较KB强 ,尤以CMH为着 ,PPMP能抑制KBv2 0 0 细胞CMH的合成 ,并能逆转KBv2 0 0 对长春新碱 (VCR)的耐药性。说明CMH为KBv2 0 0 耐药相关中性鞘糖脂 ,抑制耐药细胞CMH的合成可能是逆转肿瘤多药耐药的一种新方法。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2001年03期）
张宗城,张积仁,张健,林永成,汪森明[10]（2001）在《一种新的中性鞘糖脂显色方法》一文中研究指出为了寻找一种新的简单的中性鞘糖脂显色法 ,作者按改良的Hakomori法纯化组织中性鞘糖脂 ,分别应用传统的二苯胺喷雾法和碘显色法进行显色并比较了两种方法的敏感性。结果显示 ,传统的二苯胺喷雾法显色中性鞘糖脂呈蓝色 ,碘显色法显色呈棕黄色 ,两种方法各组分位置相同 ,但后者较前者敏感、快速、简便。说明碘显色法作为一种新的中性鞘糖脂显色法 ,具有简单、经济、快速、敏感、无毒的优点 ,且可重复显色。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2001年03期）
中性鞘糖脂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的：鞘糖脂广泛分布于真核细胞质膜，它们不仅是细胞的基本结构单位，而且随着细胞的生命状态和功能状态不断地发生着变化，在细胞的粘附、生长、分化、增殖、信号转导、抗原递呈等基本活动中发挥重要作用。按其所含单糖性质，鞘糖脂分为中性鞘糖脂和酸性鞘糖脂。中性鞘糖脂仅含中性糖类，按所含糖基数目的多少，又分别称为单己糖神经酰胺(CMH)、二己糖神经酰胺(CDH)、叁己糖神经酰胺(CTH)及四己糖神经酰胺等。四己糖神经酰胺因是人类红细胞膜上的主要鞘糖脂，故又被称为红细胞糖苷脂(Glob)。既往由于受限于中性鞘糖脂检测手段的灵敏度，对鞘糖脂生物学功能的研究多集中在神经节苷脂和大块组织的中性鞘糖脂上，对淋巴细胞这样鞘糖脂含量极微组织中性鞘糖脂的研究甚是缺乏。所以，本课题旨在建立一种灵敏度高、稳定性好的中性鞘糖脂的检测方法，并应用该方法检测免疫活性细胞和肿瘤细胞中性鞘糖脂在不同状态下的表达规律，初步探讨效靶双方中性鞘糖脂的表达与肿瘤细胞免疫的相关关系，为深入研究肿瘤免疫的分子机制及提高过继性细胞免疫治疗(AIT)的疗效提供新思路。 方法：1．中性鞘糖脂放射自显影检测方法的建立：(1)应用~(14)C标记的鞘糖脂合成前体—棕榈酸为示踪剂，应用液闪仪测定不同活度梯度示踪剂所标记的KB细胞含量，建立示踪放射比活度与细胞标记量的曲线，确定所需的最佳放射比活度；(2)对提取的中性鞘糖脂按不同的放射活度进行高效薄层层析后，行放射自显影，摸索最佳的曝光时间。(3)比较放射自显影与碘显色法的检测灵敏度。2．不同时期LAK细胞中性鞘糖脂的表达与其形态及功能的相关性研究：(1)在培养过程中观察PHA-LAK细胞的形态学变化；(2)在LAK-I期和LAK-M期，应用~(14)C棕榈酸为示踪剂，标记PHA-LAK细胞。收集两期细胞的中性鞘糖脂，进行放射自显影。3．与敏感、耐药及耐药逆转株共育后LAK细胞中性鞘糖脂的表达与肿瘤免疫的关系研究：(1)在LAK-M期，应用~(14)C棕搁酸标记LAK细胞，之后与肿瘤亲本株KB细胞、耐药株KBVZoo细胞以及耐药逆转株KBVV细胞共育24小时，期间连续观察LAK细胞的形态学变化;(2)采用MTT比色法，研究LAK细胞及NK细胞对叁株肿瘤细胞的杀伤活性;(3)收集共育前后标记LAK细胞的中性鞘糖脂，进行放射自显影。3.敏感、耐药及耐药逆转株中性鞘糖脂的表达与肿瘤免疫的关系研究:(l)应用’4c棕搁酸标记KB、KBv20。以及KBvV细胞，之后与LAK细胞共育24小时，检测共育前后叁株肿瘤细胞中性鞘糖脂的表达;(2)观察共育24小时后叁株肿瘤细胞的形态学变化;(3)叁株肿瘤细胞对LAK细胞溶瘤的敏感性观察。 结果:1.’4c棕搁酸能较好地标记细胞中性鞘糖脂，选择合适的示踪剂量和曝光时间可以获得清晰稳定的放射自显影图像，而且在碘显色法无法清晰显示的水平，依然可以获得清晰的放射自显影图像。在应用放射自显影法检测不同状态下LAK细胞中性鞘糖脂的表达时发现，该方法能清晰稳定地检测到低至10“水平的LAK细胞的中性鞘糖脂，比常规碘显色法灵敏度提高了50一100倍。2.生长过程中PHA一LAK细胞形态学与中性鞘糖脂表达的变化:(l)形态学变化:在LAK一I期，细胞变大，粘附力增强，可见贴壁生长，细胞之间则相互聚集形成集落，且随着刺激时间的延长，集落越来越大;在用无丝裂原的培养液换液，进入LAK一M期后，细胞集落逐渐消散，细胞变小;在LAK一Mp期，细胞变形能力较强，多见伪足现象;随着培养时间的延长，至LAK一Ma期，细胞变圆，伪足现象减少并逐渐消失。(2)中性鞘糖脂表达的变化:PHA一LAK细胞在LAK一I期和LAK一M期其中性鞘糖脂的表达均以CTH和Glob为主，但四种中性鞘糖脂的表达比例存在着明显的差异。LAK一I期短糖链中性鞘糖脂CMH和CDH的含量明显高于LAK一M期;在LAK一M期，随着培养时间的延长，CMH和CDH的含量逐渐降低直至无法检测到，而CTH和Gfob高级复杂糖脂的比例逐渐升高。3.与不同肿瘤细胞共育后LAK细胞形态、功能及中性鞘糖脂表达的变化:(l)形态学变化及比较:共育后不久，LAK细胞即发生变形运动，伸出伪足，并向靶细胞周围聚集。继之，LAK细胞的伪足与靶细胞紧密接触，靶细胞胞浆突起回缩，胞体变圆，两者接触处可见靶细胞呈泡沫样变形。1至2小时内，可见大量靶细胞被LAK细胞包围，LAK细胞在接触一个靶细胞的同时，仍能伸出伪足接触邻近靶细胞，将其拉近，形成较大的由多个LAK细胞和靶细胞组成的类似集落的细胞团块，而靶细胞多数变形，部分胞体破碎或呈固缩状。与KB细胞组相比，在KBv200和KBVV组，LAK细胞出现在靶细胞周围的时间早，数量多，伸出伪足的LAK细胞比率高，出现集落样细胞团块的时间亦早。(2)杀瘤活性的比较:NK和LAK细胞对耐药株KBv20。耐药性逆转前后的杀伤率均明显高于敏感株KB(p<0.05)，而对耐药株和逆转株的杀伤率无统计学差异(P>.05)。LAK对各株的杀伤活力均明显强于NK细胞(p<0.05)。(3)与不同肿瘤细胞共育后，LAK细胞中性鞘糖脂表达的变化:共性:与共育前比较，短糖链中性鞘糖脂CMH和CDH出现表达，CDH的含量增高得尤为明显;CTH和Glob高级复杂糖脂的百分含量因之减少。个?
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
中性鞘糖脂论文参考文献
[1].陈嘉峰,孙宏侠,秦震.应激性高血压局灶性脑缺血大鼠脑组织中性鞘糖脂含量的变化及外源性神经节苷脂GM_1的影响[J].中风与神经疾病杂志.2005
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