导读:本文包含了重组葡激酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:激酶,蛋白,水蛭,尿激酶,心肌梗死,溶栓,蛋白质。
重组葡激酶论文文献综述
董耘,徐昕,李斌,柯丽娜,陈武[1]（2015）在《重组葡激酶-水蛭素融合蛋白在体外的抗凝溶栓作用分析》一文中研究指出目的通过构建STH融合蛋白发酵及分离纯化工艺,用以获取蛋白,并探讨其在体外的抗凝溶栓作用。方法采用琼脂糖-纤维蛋白溶圈法对样品STH的溶栓活性进行测定;SDS-PAGE、Western Blot、发色底物法以及纤维蛋白凝块溶解法分别分析STH和裂解产物的抗凝活性,并根据血栓弹力图来分析STH在体外所具有的溶栓、抗凝作用。结果在STH中,HV2的C-末端对凝血酶仍具有显着的亲和力,使STH对血栓具有较高的靶向性;STH在凝血酶裂解的情况下能将抗凝活性释放开来,是指具有溶栓、抗凝双重作用。结论 STH生产工艺操作起来简便,便于大规模生产;通过分析STH在体外所具有的功能,结果表明:STH在具有溶栓、抗凝作用的基础上,其对血栓也有显着的靶向性,但其出血副作用不大。(本文来源于《血栓与止血学》期刊2015年06期）
徐华,董耘,杨进,刘少帮,刘少华[2]（2015）在《重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建表达》一文中研究指出背景:重组融合蛋白是根据凝血酶识别顺序将葡激酶与水蛭素串联而成的蛋白,具有双重功能,分子质量为23 ku,可在工程菌高密度发酵状态下获得高效表达。目的:通过对工程菌进行高密度发酵,构建重组葡激酶-水蛭素融合蛋白纯化工艺,并探讨其构建可行性及表达价值。方法:对工程菌进行高密度培养,并诱导表达重组葡激酶-水蛭素融合蛋白,对菌体进行离心收取,多次冻融后通过超滤、两部阴离子交换层析方法收集上清液,对重组葡激酶-水蛭素融合蛋白进行分离纯化,观察其纤溶比活性及在菌体中的高效表达价值。结果与结论:发酵培养工程菌,并在第17小时时予以诱导。结果发现,诱导0.5 h时,便能观察到重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达,且发酵时间越长重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达量相应越大;至发酵20 h时,表达达到顶峰。菌体干质量为32.20 g/L,目的蛋白表达量约为1.48 g/L。经过纯化处理后,重组葡激酶-水蛭素融合蛋白纯度高达98%,纤溶比活性约为2.6×104 IU/mg,回收活性的概率为56%。实验通过构建重组葡激酶-水蛭素融合蛋白纯化工艺,并分析其表达价值,提示该纯化工艺较为便捷,耗时较短,且能重复使用,可用于大规模生产。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年20期）
徐华,徐昕,杨进国,杨剑,曾文强[3]（2015）在《抗凝溶栓重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建与表达》一文中研究指出目的:探讨抗凝溶栓重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建效果与抗凝溶栓活性表达情况。方法:在间接实验中,选择p BV-重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质质粒进行酵母大量表达,再进行两级纯化分析;去纯化的单位进行抗凝溶栓的检测。结果:工程菌酵母发酵培养诱导1 h后就可以检测到重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达,表达量随发酵时间的增加而递增。两级纯化的重复性非常好,纯度经RP-HPLC测定在98%以上。重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的溶栓活性明显高于水蛭素与葡激酶的单纯溶栓活性(P<0.05)。重组葡激酶-水蛭素融合蛋白具有更强的纤溶酶原激活活性,明显高于水蛭素与葡激酶的单纯纤溶酶原激活活性(P<0.05)。结论:重组葡激酶-水蛭素融合蛋白生产工艺具有很好的诱导与纯化效果,重组葡激酶-水蛭素融合蛋白能发挥较好的抗凝与溶栓作用。(本文来源于《内科急危重症杂志》期刊2015年02期）
苟冶然,龙小滨,白磊,何泉,陈检[4]（2015）在《RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白原核表达、纯化及鉴定》一文中研究指出目的构建RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化并初步鉴定其生物学活性。方法利用重迭延伸PCR获得目的融合基因片段RGD-r SAK-α1M,插入带有His-GST标签的原核高效可溶性表达载体PEGX-6P-1中。经酶切鉴定后,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,经Ni+亲和层析柱纯化后用3C蛋白酶切除重组蛋白的His-GST标签,再利用DEAE离子交换柱和分子筛纯化蛋白。最后应用纤维蛋白平板溶圈法和血小板聚集抑制试验分别测定评价重组融合蛋白的溶栓活性和抗血小板聚集作用。结果 1)成功构建了RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白。2)实现了目的融合蛋白在大肠杆菌上清液中的高效表达,并纯化了融合蛋白。3)体外实验表明纯化后的融合蛋白纤溶活性同尿激酶标准品无明显差异。4)融合蛋白抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶明显提高。结论经文献检索确认为首次获得了纯化的RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白,并验证了其纤溶活性和尿激酶标准品无明显差异,而抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶增强,为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2015年03期）
丁有学,韩春梅,李响,毕华,史新昌[5]（2014）在《重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质控方法和质量标准的建立》一文中研究指出目的建立注射用重组葡激酶(staphylokinase,SAK)-水蛭素(hirudin,HV)融合蛋白(SFH)的质控方法和质量标准。方法采用纤维蛋白平板溶圈(fibrin agarose plate assay,FAPA)法测定SFH的溶栓比活性,纤维蛋白凝块溶解法测定SFH的抗凝比活性;还原型SDS-PAGE测定SFH的相对分子质量;非还原SDS-PAGE和反相高效液相色谱(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定SFH的纯度;胰酶裂解后采用RP-HPLC法分析SFH的肽图;其他各项指标的检测按《中国药典》叁部(2010版)规定进行。结果用建立的方法对SFH原液和成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》叁部(2010版)的要求。结论建立的质控方法和质量标准能够保证产品安全、有效、质量可控,可用于注射用SFH产品的常规检定。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2014年08期）
陈检,杨可,郭珍,张阳丽,张绍成[6]（2013）在《重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及功能鉴定》一文中研究指出目的表达和纯化重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,并初步鉴定其生物学活性。方法利用重迭延伸PCR方法使基因重组获得目的基因片段,插入带有GST标签的原核高效可溶性表达载体pEGX-6P-1中,构建重组表达质粒pEGX-6P-1-SAK-HC,将重组表达质粒转化大肠杆菌B834,经IPTG诱导目的蛋白表达;对融合蛋白用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱(GST)亲和层析柱及DEAE离子交换柱纯化,用PreScission蛋白酶切除GST标签,以SDS-PAGE分析该融合蛋白的表达量和纯度,应用纤维蛋白平板溶圈法测定评价其生物学活性。结果构建的重组表达质粒经PCR、内(本文来源于《第15届中国南方国际心血管病学术会议专刊》期刊2013-04-11）
陈检,杨可,郭珍,张阳丽,张绍城[7]（2012）在《重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定》一文中研究指出目的:表达和纯化重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,并初步鉴定其生物学活性。方法:利用重迭延伸PCR方法使基因重组获得目的基因片段,插入带有GST标签的原核高效可溶性表达载体pEGX-6P-1中,构建重组表达质粒pEGX-6P-1-SAK-HC,将重组表达质粒转化大肠杆菌B834,经IPTG诱导目的蛋白表达;对融合蛋白用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱(GST)亲和层析柱及DEAE离子交换柱纯化,用PreScission蛋白酶切除GST标签,SDS-PAGE分析该融合蛋白的表达量和纯度,应用纤维蛋白平板溶圈法测定评价其生物学活性。结果:构建的重组表达质粒经PCR、内切酶鉴定及基因序列测定证实,目的蛋白在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)为36 000;对表达产物进行了亲和层析纯化,从上清中获得了纯度较高的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,体外实验显示其纤溶活性为9.4×104IU/mg。结论:获得了可溶性的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,且其纤溶活性与尿激酶标准品相当。为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2012年11期）
周柏华,童巧霞[8]（2012）在《重组葡激酶与尿激酶治疗急性心肌梗死的疗效观察》一文中研究指出目的观察重组葡激酶(r-Sak)与尿激酶(UK)治疗急性心肌梗死(AMI)的疗效。方法选择我院2010年1月～2012年1月接受治疗的200例AMI患者,将其随机分为UK组和r-Sak组,各100例。r-Sak组给予0.9%生理盐水100 mL+r-Sak 10 mg,UK组给予UK 150万U+0.9%氯化钠注射液100 mL。观察并记录两组患者临床症状缓解情况,判断两组治疗效果。结果 r-Sak组胸痛症状缓解率、再通率、总有效率均高于UK组,差异均有统计学意义(均P<0.05);r-Sak组死亡率、梗死后心绞痛发生率、心力衰竭发生率、心律失常发生率、平均住院天数、并发症发生率均低于UK组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 r-Sak治疗AMI的效果优于UK,再开通率高,复合临床事件发生率低,效果肯定,值得推广。(本文来源于《中国医药导报》期刊2012年24期）
王国涛,杨萍[9]（2012）在《重组葡激酶对急性心肌梗死患者血浆GMP-140、TAT含量的影响》一文中研究指出目的观察重组葡激酶(r-sak)和尿激酶(UK)溶栓治疗急性心肌梗死(AMI)对血小板的活化作用,评价其治疗AMI的临床疗效。方法将68例患者随机分为两组,r-sak组35例,以r-sak 10 mg静脉滴注溶栓;尿激酶组33例,以尿激酶150万U 30 min静脉滴注溶栓。测定两组溶栓治疗前、溶栓后2、24、48 h血浆中血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)含量等相关指标。结果 A、B两组治疗后2 h血浆中GMP-140均升高,尿激酶组血浆中GMP-140升高显着。r-sak组治疗后2 h血浆中TAT浓度升高不显着,尿激酶组治疗后2 h血浆中TAT浓度升高显着。结论 r-sak溶栓的疗效明显优于尿激酶,r-sak有更强的血栓选择性,对促凝活性微弱,出血并发症发生率少,促血小板活化低,减轻血栓前状态对心肌的损伤作用,可以改善心肌微灌注。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2012年10期）
杨可[10]（2012）在《重组葡激酶的表达纯化及其纤溶活性的鉴定》一文中研究指出目的：构建葡激酶（Staphylokinase, SAK）基因的原核表达质粒，在大肠杆菌原核表达系统中表达SAK蛋白，检测其蛋白质的表达情况，纯化该蛋白质并初步鉴定其生物学活性，为临床血栓性疾病的治疗提供可能的溶栓新药。方法：基于生物信息学方法，分析优化基因序列，使用基因合成技术合成葡激酶的基因序列，连接表达载体，转化感受态大肠杆菌克隆菌株DH-5α，运用PCR的方法筛选阳性克隆，提取双酶切阳性的质粒，并转化感受态大肠杆菌BL21菌株，使含有葡激酶目的基因的质粒在ＢＬ２１大量表达目的蛋白－葡激酶，利用离子交换柱(DEAE)，分子筛(Superdex75)等进行分离纯化，并用紫外核酸蛋白仪检测目的蛋白的浓度，应用纤维蛋白平板溶圈法测定并评价其溶栓生物活性。结果：葡激酶在大肠杆菌中以可溶上清的方式高效表达，利用离子交换柱和分子筛等纯化效果良好，纯度达95%，以紫外核酸蛋白仪测蛋白浓度为2.05mg/mL。体外实验显示其纤溶活性与尿激酶标准品相当。结论：（1）应用全基因合成经过优化的SAK基因可在原核表达体系（大肠杆菌系统）中高效的以可溶性上清的方式高效表达。（2）以基因合成技术合成的SAK基因所表达的葡激酶具有与尿激酶标准品相当的纤溶活性。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2012-05-01）
重组葡激酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:重组融合蛋白是根据凝血酶识别顺序将葡激酶与水蛭素串联而成的蛋白,具有双重功能,分子质量为23 ku,可在工程菌高密度发酵状态下获得高效表达。目的:通过对工程菌进行高密度发酵,构建重组葡激酶-水蛭素融合蛋白纯化工艺,并探讨其构建可行性及表达价值。方法:对工程菌进行高密度培养,并诱导表达重组葡激酶-水蛭素融合蛋白,对菌体进行离心收取,多次冻融后通过超滤、两部阴离子交换层析方法收集上清液,对重组葡激酶-水蛭素融合蛋白进行分离纯化,观察其纤溶比活性及在菌体中的高效表达价值。结果与结论:发酵培养工程菌,并在第17小时时予以诱导。结果发现,诱导0.5 h时,便能观察到重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达,且发酵时间越长重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达量相应越大;至发酵20 h时,表达达到顶峰。菌体干质量为32.20 g/L,目的蛋白表达量约为1.48 g/L。经过纯化处理后,重组葡激酶-水蛭素融合蛋白纯度高达98%,纤溶比活性约为2.6×104 IU/mg,回收活性的概率为56%。实验通过构建重组葡激酶-水蛭素融合蛋白纯化工艺,并分析其表达价值,提示该纯化工艺较为便捷,耗时较短,且能重复使用,可用于大规模生产。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组葡激酶论文参考文献
[1].董耘,徐昕,李斌,柯丽娜,陈武.重组葡激酶-水蛭素融合蛋白在体外的抗凝溶栓作用分析[J].血栓与止血学.2015
[2].徐华,董耘,杨进,刘少帮,刘少华.重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建表达[J].中国组织工程研究.2015
[3].徐华,徐昕,杨进国,杨剑,曾文强.抗凝溶栓重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建与表达[J].内科急危重症杂志.2015
[4].苟冶然,龙小滨,白磊,何泉,陈检.RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白原核表达、纯化及鉴定[J].基础医学与临床.2015
[5].丁有学,韩春梅,李响,毕华,史新昌.重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质控方法和质量标准的建立[J].中国生物制品学杂志.2014
[6].陈检,杨可,郭珍,张阳丽,张绍成.重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及功能鉴定[C].第15届中国南方国际心血管病学术会议专刊.2013
[7].陈检,杨可,郭珍,张阳丽,张绍城.重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志.2012
[8].周柏华,童巧霞.重组葡激酶与尿激酶治疗急性心肌梗死的疗效观察[J].中国医药导报.2012
[9].王国涛,杨萍.重组葡激酶对急性心肌梗死患者血浆GMP-140、TAT含量的影响[J].中国老年学杂志.2012
[10].杨可.重组葡激酶的表达纯化及其纤溶活性的鉴定[D].重庆医科大学.2012
论文知识图
