导读:本文包含了志贺样毒素型变异体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:毒素,水肿病,仔猪,微血管,内皮,毒性,单克隆抗体。
志贺样毒素型变异体论文文献综述
伊鹏霏[1]（2010）在《芪黄汤及其提取成分抗大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型变异体作用及其机理研究》一文中研究指出猪水肿病(Edema disease of pig,EDP)又称肠毒血症,是由几种特定血清型的致病性大肠杆菌(O138,O139和O141)引发的,而志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-IIv)是引发EDP的主要毒力因子之一。大肠杆菌菌株大多在消化道和小肠附着繁殖,产生的毒素以特异性机制进入血液循环,引起肠道、皮肤和大脑血管内皮细胞的病变和坏死,进一步引起血管通透性增强,从而导致受影响的器官出现水肿,最终导致动物死亡。这种疾病蔓延迅速,致死率高,给养猪业造成极大的伤害和损失。当前多利用母源抗体预防该病,但效果并不尽如人意。虽然抗生素或抗血清可以用于该病的防治,但是存在耐药性、药物残留和成本高等问题。中兽医学临床实践和现代中药药理学研究表明,许多中药能有效抑制和消除细菌病原体、清除细菌毒素,具有疗效高、毒性低、副作用小、耐药性低及药物残留水平低的优点,并被广泛用于预防和治疗传染病,所以,研究利用中药防治细菌性疾病已成为当今兽医界的热点。前期试验证实,芪黄汤具有很好的治疗SLT-IIv引发的水肿病的作用,本试验即在此基础上进行深入研究。本研究采用Affymetrix小鼠全基因组表达谱芯片和差异荧光凝胶电泳(DIGE)对芪黄汤抗志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-IIv)机理进行研究。以小鼠肠微血管内皮细胞(MIMVECs)为研究对象,先后加入SLT-IIv和芪黄汤作用12 h后,提取四个处理组的总RNA和总蛋白。基因芯片及差异荧光凝胶电泳技术检测各组基因、蛋白的变化情况并进行生物学分析。SLT-Ⅱv组与对照组比较共有63个差异表达基因,其中上调基因49个,下调基因14个,73个差异表达蛋白,其中表达下调共25个蛋白,48个蛋白表达上调;芪黄汤与对照组相比较有128个差异表达基因,其中上调基因44个,下调基因84个,26个差异表达蛋白,19个表达上调蛋白,7个蛋白表达下调;SLT-Ⅱv-芪黄汤与对照组比较有108个差异表达基因,其中上调基因72个,下调基因36个,126个差异表达蛋白,上调下调表达各63个蛋白;SLT-Ⅱv-芪黄汤与SLT-Ⅱv组比较有111个差异表达基因,其中上调基因74个,下调基因37个,224个差异表达蛋白,其中139个蛋白表达上调,85个蛋白表达下调。综合各组差异基因、蛋白发现,芪黄汤通过抑制抗凋亡基因的转录,促进受损细胞凋亡,加速机体蛋白的合成,增强细胞能量的代谢,减少不正常肌动蛋白的表达,回复正常细胞骨架排布等方面来改善SLT-Ⅱv所产生的细胞损伤、血管收缩和细胞通透性变化等各项毒理效应。为进一步研究芪黄汤的作用机理,本研究采用高效液相色谱法分离提纯芪黄汤的水溶性成分。以乙腈和0.5%乙酸水溶液为流动相按一定梯度洗脱条件分离提纯芪黄汤,获得15个可溶于水的提取成分,且通过分析型高效液相色谱和液质连用仪初步鉴定出:7峰为没食子酸,13峰为槲皮素,并进一步研究各成分对MIMVECs的作用。首先,为测定芪黄汤及其提取成分对经SLT-IIv诱导损伤的MIMVECs的影响,以MIMVECs感染SLT-IIv为细胞模型,芪黄汤及其提取成分分别作用12 h后收集细胞上清液,测定各项指标。结果显示,芪黄汤、醇沉上清组、醇沉沉淀组和2、4、6、11、12、14、15号提取峰部分浓度作用于受损细胞,能极显着(P<0.01)降低LDH的活力,而3、7、8、10和13号提取峰与毒素对照组无显着性差异;除醇沉沉淀组外,各组药物和成分在一定浓度范围内作用于受损细胞后,能极显着(P<0.01)提高受损细胞的SOD活力;芪黄汤组、醇沉上清组、醇沉沉淀和2、3、4、7、8、11、12、14、15号提取峰在部分浓度条件下,能极显着(P<0.01)降低MDA含量,而9、10号提取峰MDA含量与毒素对照组无显着性差异;除5号提取峰外,其余各组药物和成分在一定浓度作用下,GSH-Px活力极显着(P<0.01)高于毒素对照组。以上结果说明,芪黄汤及其成分均可明显提高MIMVECs的SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,从而清除体内大量的对组织、细胞具有严重损害作用的自由基。经3、7、8、11号提取峰作用后,能极显着(P<0.01)降低受损细胞分泌NO的量;各药物成分组与毒素对照组比较,均能显着(P<0.05)或极显着(P<0.01)降低毒素作用后细胞的ET-1含量,而各组间ET-1含量差别不显着。表明,芪黄汤可在由NO和ET-1介导的机体腹泻、水肿等疾病中发挥治疗作用。其次,从测定BSA通过Transwell小室的OD值变化来探讨芪黄汤及其提取成分对SLT-IIv损伤的MIMVECs通透性的影响,结果表明各种提取成分均能不同程度降低SLT-IIv导致的MIMVECs通透性升高。最后,应用激光多普勒血流仪来测量芪黄汤及其提取成分导入前后对叁阴交穴位区微血管振幅的影响,结果显示,除醇沉沉淀物和5、8、12、14号提取峰作用后微血管振幅变化不显着外,其余芪黄汤部分和提取成分均可不同程度提高微血管振幅,表明芪黄汤和部分提取成分能够改善机体血液微循环。综上所述,芪黄汤及其提取成分能够有效抗SLT-IIv作用,其机理主要是通过改善MIMVECs损伤、降低微血管通透性和改善微循环,达到治疗猪水肿病的目的。(本文来源于《吉林大学》期刊2010-12-01）
张伟,索占伟,刘钟杰,穆祥,范开[2]（2010）在《志贺样毒素Ⅱ型变异体对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IL-8 IL-6和PGI_2的影响》一文中研究指出志贺样毒素Ⅱ型变异体[1](SLT-Ⅱe)是猪水肿病大肠杆菌导致仔猪形成水肿病的主要致病因子。研究证明,SLT-Ⅱe能损伤小肠上皮细胞和血管内皮细胞[2],引起细胞分泌功能障碍,进而导致微血管舒缩和通透性发生变化,最终形成猪水肿病。本试验通过研究SLT-(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2010年05期）
丁琳,师东方,付海兵,于迪,杨旭东[3]（2009）在《志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备》一文中研究指出为建立针对仔猪水肿病SLT-Ⅱe毒素的检测方法,应用PCR技术克隆SLT-ⅡeB基因,并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术获得6株稳定分泌抗SLT-ⅡeB的单克隆抗体(McAb)细胞株,其抗体亚类包括IgM、IgA、IgG2b和IgG2a,而且轻链均为κ链。阻断ELISA结果显示,6株McAb均能特异性识别天然SLT-Ⅱe毒素。相加ELISA结果显示,3G7和4F3两株是针对不同抗原表位的McAb。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2009年03期）
丁琳[4]（2008）在《志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备》一文中研究指出仔猪水肿病是由产Vero细胞毒素大肠杆菌(VTEC)引起的急性致死性传染病,该病发病急、死亡快,往往来不及治疗,死亡率很高。能引起断奶仔猪四肢麻痹、步态蹒跚、痉挛和昏迷等神经症状。剖检可见胃壁和肠系膜水肿,因此称之为“水肿病”。研究证明,该病的发生与产Vero细胞毒素大肠杆菌的两个致病因子——F18ab(F107)菌毛与志贺样毒素Ⅱ型变异体(Shiga-like ToxinⅡvariant,SLT-Ⅱe)密切相关,其中SLT-Ⅱe起主要的毒力作用。本研究应用PCR技术扩增了SLT-Ⅱe B基因,经序列测定,结果与参考序列的同源性达100%。将PCR产物克隆到原核表达载体pET-30a中,转化入大肠杆菌BL_(21)(DE_3)并用IPTG诱导表达。通过Ni离子亲和层析纯化融合表达的SLT-Ⅱe B蛋白,以此作为免疫原免疫BALB/c小鼠。利用细胞融合技术将小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,经间接ELISA检测和四次亚克隆,获得6株阳性杂交瘤细胞,分别命名为2B_(10)、3A_8、3C_(11)、3D_7、3G_7和4F_3。经单克隆抗体亚类试剂盒鉴定,6株单克隆抗体的亚类包括IgG2a、IgG2b、IgA和IgM,且均为κ轻链。经杂交瘤细胞染色体数目分析,6株杂交瘤细胞的平均染色体数是90～115,明显多于SP2/0骨髓瘤细胞数(55～65)。ELISA检测结果显示,6株杂交瘤细胞培养上清液的效价分别为1:128～1:512。以两株分泌IgG类单克隆抗体的杂交瘤细胞(3G_7、4F_3)制备的腹水,效价均为1:10~5。阻断ELISA结果显示,6株单克隆抗体均与天然毒素(SLT-Ⅱe)有良好的反应性,且不与天然毒素LT、ST反应。通过相加ELISA测定可知,3G_7和4F_3两株单克隆抗体是针对不同抗原表位的单抗。(本文来源于《东北农业大学》期刊2008-04-10）
杨健美,高崧,林矫矫,刘金明,陈兆国[5]（2006）在《抗志贺样毒素Ⅱ型变异体单克隆抗体的制备及特性鉴定》一文中研究指出志贺样毒素Ⅱ变异体(SLT-Ⅱe)是猪水肿病的主要致病因子之一,为了制备SLT-Ⅱe单克隆抗体(mAb),我们从TB1菌中用多粘菌素诱导提取了SLT-Ⅱe蛋白,并且用硫酸铵盐析沉淀法对该蛋白进行了提纯,以提纯蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞技术制备mAb。细胞融合后,培养上清经间接ELISA检测,共得到3株阳性杂交瘤细胞2E11、2H9和4F3,ELISA效价分别为1∶213、1∶213和1∶28,3株杂交瘤细胞培养上清分泌的mAb在Westernblot试验中均与提纯的毒素蛋白反应,在Vero细胞中和试验中均能够中和毒素对Vero细胞的毒性作用,从而为临床分离株SLT-Ⅱe产生的免疫学检测方法奠定了一定的基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2006年06期）
姜连连,董国雄,徐建生,董辉,黄兵[6]（2005）在《猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位与志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位的联合表达》一文中研究指出扩增、克隆和表达了水肿病大肠杆菌的致病因子F18ab 菌毛的主要亚单位FedA全基因(包括信号肽序列),并与现有的另一致病因子志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因(stx 2eA)连接,然后进行联合表达。同时用已制备的抗Stx 2eA 单克隆抗体和抗F18ab菌毛单克隆抗体对联合表达的融合蛋白质进行检测鉴定。(本文来源于《动物医学进展》期刊2005年05期）
徐建生,成大荣,陈雷,董国雄,李俊宝[7]（2004）在《志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位及酶活性部位的基因缺失、突变株表达产物免疫生物学特性》一文中研究指出重组志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位pGEX＿Ansp及其酶活性部位的基因缺失株pGEX＿Ade及突变株pGEX＿Amu转化的大肠杆菌经诱导后,表达产物经超声波裂解并滤过除菌。ICR小鼠腹腔注射叁种重组质粒转化菌诱导后菌体裂解物的除菌滤液,以检验重组表达产物的毒性和免疫原性;在Vero细胞上检测重组菌表达产物对Vero细胞的半数致死量(CD50)及免疫鼠血清对SLT＿Ⅱe毒素的中和实验叁方面来比较pGEX＿Ansp、pGEX＿Ade和pGEX＿Amu的生物学特性,结果表明这叁种基因工程菌表达产物经腹腔注射后可以诱导机体产生一定程度的保护性抗体。在Vero细胞上,pGEX＿Ansp的表达产物可在一定程度上使Vero细胞产生细胞病变,pGEX＿Amu的表达产物可在一定程度上抑制Vero细胞单层形成时间,而pGEX＿Ade对Vero细胞的生长无影响。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2004年06期）
姜连连,陈雷,严振龙,徐建生,董国雄[8]（2003）在《志贺样毒素II型变异体A亚单位单抗的制备》一文中研究指出将表达志贺样毒素II型变异体A亚单位重组蛋白的菌株ppSLT -IIeA在含氨苄青霉素的 2×YTA培养基中培养 ,至对数生长期时加入IPTG诱导 ,诱导的重组菌超声波裂解后 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达重组蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白 ,测定纯化蛋白的浓度 ,免疫BALB/c小鼠 ,细胞融合后经ELISA检测 ,得到一株阳性杂交瘤细胞 ,命名为A2 _D3 ,制备的单抗腹水ELISA效价为 2 4log2 ,免疫印迹结果表明此单抗仅与重组蛋白反应 ,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测 13株水肿病菌株 ,发现均产志贺样毒素II型变异体(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2003年02期）
陈雷[9]（2001）在《志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位(SLT-ⅡeA)的突变与缺失株构建及其表达产物的免疫生物学特性鉴定》一文中研究指出为了深入研究志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位（SLT-ⅡeA）的免疫生物学特性，为水肿病的预防提供可靠的试验依据，也为更进一步开展对志贺样毒素的分子生物学特性的研究，我们参照已发表的志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位（SLT-ⅡeA）基因序列，利用PCR方法对SLT-ⅡeA基因片段进行了叁种方式的修饰，并分别构建了重组质粒。 1、信号肽缺失株：设计一对引物P_f、P_r（分别含有EcoRI、BamHI位点），通过扩增N端298bp到1201bp的基因片段，去掉了slt-ⅡeA基因5’端的信号肽部分。以EcoRI、BamHI克隆进pUC18质粒载体，构建了重组质粒pUC-A_(nsp)，并进行序列测定。 2、酶活性序列突变株：设计一对引物Pb、Pc（含有803～823bp的同源区），在两条引物中将806～808位的叁联密码子GAA变为CAA，使对应的氨基酸残基由谷氨酸Glu变为谷氨酰胺Gln；将815～817位的密码子由CGG变为AAG，使其相应氨基酸残基由Arg变为Lys。再设计一对引物Pa、Pd，含有slt-ⅡeA基因的5’端起始密码子及3’末端，利用重迭延伸法对slt-ⅡeA基因进行扩增：即首先利用引物Pa、Pb扩增出298-823bp片段，Pc、Pd扩增出797-1201bp片段，然后以Pa、Pd为引物利用上述两种PCR的扩增产物混合物为模板，利用其交叉片段（即中间重迭区797-823bp）作为中间天然引物进行第二次扩增。扩增产物经BamHI、EcoRI克隆进pUC18相同的酶切位点后进行序列测定。结果与预计相符，即成功的将第167位编码Glu密码子变为编码Gln的密码子，170位编码Arg密码子变为编码Lys密码子。此重组克隆命名为pUC-A_(mu)。 3、酶活性序列缺失株：设计两对引物Pm、Pn（含EcoRI、KpnI酶切位点），Px、Py（含KpnI、BamHI酶切位点），以SLT-ⅡeA基因为模板，分别扩增出MN（298-805bp），XY（818-1201bp）两片段，缺失了第806bp到817bp编码167～170位氨基酸残基（Glu-Ala-Leu-Arg）的序列，然后利用KpnI、EcoRI、BamHI酶切消化后克隆进pUC18质粒载体，序列分析结果与预计结果相符。将此重组质粒命名为pUC-A_(de)。 陈 雷SLT．IleA的分子生物学研究 将叁种重组质粒 pUC－Ansp、pUC－A＊u、pUC－Ane分另利用 EcoE、Sail双 酶切后把A亚单位基因片段克隆进pGEX6P八中谷脱昔肽S－转移酶（GST） 基因下游，得到的重组PGEX质粒分别命名为PGEX－A。卜PGEX－A哑， pGEX－A。卯经分别转化进宿主大肠杆菌BLZI后，在37’C利用IPTG诱导表 达。菌体表达产物经 12O的 SDS聚丙烯酚胺凝胶电泳（SDS巾AGE）分离鉴 定，都检测到预期的60山融合蛋白表达条带，分别命名为GST二leAm卜 ．GS＊IIeAm、GST－IIeAse．用抗SLT－IIeA特异性单抗对表达产物做免疫印迹 （Western七lotting）试验，结果均检测出一条特异性条带，表明我们正确表达 了SLT－fleA毒素蛋白。 为了研究经过不同修饰的SLTlleA亚单位编码蛋白的免疫生物学特性， 我们在ICR小鼠及Vero细胞上进行了体内、体外实验，包括基因工程菌小鼠 肠内憎殖能力、以及重组蛋白的免疫原性、中和及毒性实验。体内增殖能力 实验表明，重组质粒转化菌在小鼠肠内的增殖定居能力较差，8天左右即不能 从粪便中检测出所口服接种的大肠杆菌；以诱导表达后的重组质粒转化菌体 超声波裂解物（含0．2oAI（OH）3佐剂）兔疫小鼠两次，二免后 8天采集的 血清与以SLT工Ie粗提毒素包被的酶标板做ELISA，测得的抗GST二IeAns小 GST工IeAm山GST－IIeAd重组蛋白免疫血清的效价分别为2“、2‘’、2＊，表明 这叁种重组蛋白均具有免疫原性；以叁种免疫血清分别对粗提毒素在Ver。细 胞上做中和试验，中和效价分别为 2＼ 27、2＼将重组质粒转化菌超声波破碎， 上清通过0．45urn滤膜滤过除菌，倍比稀释后接种Vero细胞。结果表明 GST－IIeA＊。对Vero细胞的CDS。为2＼GST丁IeA皿能显着抑制Vero细胞的生 长速度，而缺失株对Vero细胞无肉眼可见变化。这为进一步研究志贺样毒素 11型变异体A亚单位用作仔猪水肿病的预防打下基础。 本研究成功地构建了类志贺氏菌毒素A亚单位及其酶活性部位缺失、 突变的重组质粒，并在大肠杆菌中进行了高效表达，这在国内尚属首次。 同时通过对Vero细胞的毒性实验，首次观察到单独的A亚单位对Vro细 胞也具有一定毒性作用。通过对s卜11＊A基因的167门0位的氨基酸残基进 行突变和缺失，进一步验证了Schlossman等所认为的第167、170位氨基酸 ·残基是SLTlleA酶活性部位的观点。(本文来源于《扬州大学》期刊2001-05-01）
志贺样毒素型变异体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
志贺样毒素Ⅱ型变异体[1](SLT-Ⅱe)是猪水肿病大肠杆菌导致仔猪形成水肿病的主要致病因子。研究证明,SLT-Ⅱe能损伤小肠上皮细胞和血管内皮细胞[2],引起细胞分泌功能障碍,进而导致微血管舒缩和通透性发生变化,最终形成猪水肿病。本试验通过研究SLT-
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
志贺样毒素型变异体论文参考文献
[1].伊鹏霏.芪黄汤及其提取成分抗大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型变异体作用及其机理研究[D].吉林大学.2010
[2].张伟,索占伟,刘钟杰,穆祥,范开.志贺样毒素Ⅱ型变异体对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IL-8IL-6和PGI_2的影响[J].中国兽医杂志.2010
[3].丁琳,师东方,付海兵,于迪,杨旭东.志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备[J].中国预防兽医学报.2009
[4].丁琳.志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备[D].东北农业大学.2008
[5].杨健美,高崧,林矫矫,刘金明,陈兆国.抗志贺样毒素Ⅱ型变异体单克隆抗体的制备及特性鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志.2006
[6].姜连连,董国雄,徐建生,董辉,黄兵.猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位与志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位的联合表达[J].动物医学进展.2005
[7].徐建生,成大荣,陈雷,董国雄,李俊宝.志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位及酶活性部位的基因缺失、突变株表达产物免疫生物学特性[J].中国预防兽医学报.2004
[8].姜连连,陈雷,严振龙,徐建生,董国雄.志贺样毒素II型变异体A亚单位单抗的制备[J].中国预防兽医学报.2003
[9].陈雷.志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位(SLT-ⅡeA)的突变与缺失株构建及其表达产物的免疫生物学特性鉴定[D].扬州大学.2001
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