抗伪狂犬病病毒干扰素刺激基因的筛选及IFIT3抗病毒活性的鉴定

论文摘要

为研究抗伪狂犬病病毒（PRV）特异性的干扰素刺激基因（ISGs）,本研究采用与表达增强型绿色荧光蛋白报告病毒相结合的高内涵筛选系统对具有抗病毒功能的10种ISGs进行筛选,之后利用过表达细胞系、间接免疫荧光（IFA）和q RT-PCR试验对显著抑制PRV复制的IFIT3 （p<0.01）进行抗病毒活性验证,通过q RT-PCR检测了PRV感染的猪肺泡巨噬细胞（PAM）和PRV感染猪的外周血单核细胞（PBMC）中IFIT3 m RNA的转录水平。高内涵筛选结果显示,5种潜在的抗PRV ISGs分子（IFIT3、ISG15、GBP2、Mx1和ISG20）对PRV的复制具有显著的抑制作用,其中IFIT3效果最显著;IFA和q RT-PCR试验结果显示,在PK-15细胞和PAM中,过表达IFIT3均可以显著降低PRV-TJ株的病毒滴度和基因组拷贝数;q RT-PCR试验结果显示,在PRV感染的PAM和PBMC中,IFIT3 m RNA的转录水平均显著上调。流式细胞术试验表明过表达IFIT3不影响PK-15细胞凋亡,推测IFIT3可能存在其它的抗病毒机制。本研究筛选到5种潜在的抗PRV ISGs并证实IFIT3是一种抗PRV的ISG,为抗PRV ISGs的相关研究,特别是猪源IFIT3抗病毒机制的研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒、质粒、细胞株及实验动物
•   1.2 主要试剂
•   1.3 重组质粒pCMV-HA-IS Gs表达的检测
•   1.4 抗P RV IS Gs的高内涵筛选
•   1.5 IFIT3过表达细胞系的构建与鉴定
•     1.5.1 IFIT3过表达细胞系的构建
•     1.5.2 IFIT3过表达细胞系的鉴定
•     1.5.3 过表达IFIT3对PK-15细胞活力影响的检测
•   1.6 IFIT3抗病毒活性的检测
•   1.7 动物感染试验
•   1.8 P AM和猪P BMC中IFIT3转录水平的检测根据GenBank中登录的猪IFIT3
•   1.9 细胞凋亡试验
•   1.1 0 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 IS Gs重组质粒的表达检测及抗P RV IS Gs的筛选
•   2.2 IFIT3过表达细胞系的构建与鉴定
•   2.3 IFIT3抗P RV活性的检测结果
•   2.4 P AM和P BMC中IFIT3转录水平的检测
•   2.5 过表达IFIT3对P K-15细胞凋亡的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张华伟,李连峰,周末,杨玉莹,仇华吉

关键词: 伪狂犬病病毒,抗病毒效应

来源: 中国预防兽医学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 长江大学动物科学学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

基金: 国家自然科学基金(31702220),黑龙江省自然科学基金(QC2017027)

分类号: S852.65

页码: 338-344

总页数: 7

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