论文摘要
目的本研究旨在通过慢病毒转染的方法用人生长激素（Human growth hormone,hGH）和人胸腺素β4（Human Thymosin beta 4,hTβ4）基因真核过表达载体转染至人脂肪间充质干细胞（hADSCs）,并检测其在hADSCs中的表达以及对其生物学特性的影响,为研究组织工程皮肤探索新的种子来源。方法收集我院手术病人废弃正常脂肪组织标本,分离培养原代hADSCs,进行细胞鉴定,并传代。慢病毒转染法制备hGH与hTβ4过表达hADSCs细胞系。病毒载体中携带嘌呤霉素（Puromysin）抗性基因,使用含Puromysin的培养基筛选感染后的细胞来以到稳转株。对转染后的细胞进行生物学特性检测,分别使用RT-PCR检测转染后的hADSCs在基因水平上的变化、Elisa和Weston-blot检测转染后的hADSCs在蛋白水平上的变化。结果经细胞表面标志物鉴定,hADSCs表面标志物CD90和CD44呈阳性表达,而CD34呈阴性。RT-PCR检测结果表明,转染hGH的hADSCs较未转染的hADSCs,hGH表达量提高1.78倍,转染hTβ4的hADSCs较未转染的hADSCs,hTβ4表达量提高1.65倍。Weston-Blot条带灰度分析数据显示过表达hGH的hADSCs hGH表达量高于hADSCs;过表达hTβ4的hADSCs hTβ4表达量高于hADSCs;过表达hGH的hADSCs和过表达hTβ4的hADSCs的ERK表达量高于hADSCs;过表达hGH的hADSCs和过表达hTβ4的hADSCs的p-ERK表达量高于hADSCs。Elisa结果显示hGH-hADSCs上清蛋白含量显著高于hADSCs上清蛋白（*P<0.01）;hGH-hADSCs胞浆蛋白含量显著高于hADSCs胞浆蛋白含量（**P<0.01）;hTβ4-hADSCs上清蛋白含量显著高于hADSCs上清蛋白含量（*P<0.01）;hTβ4-hADSCs胞浆蛋白含量显著高于hADSCs胞浆蛋白含量（**P<0.01）。结论（1）慢病毒转染法可以成功构建hADSCs过表达hGH与hTβ4细胞系。（2）hADSCs过表达hGH与hTβ4细胞系较hADSCs细胞系的hGH与hTβ4表达量显著提高。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 安黛
导师: 王凌峰
关键词: 慢病毒,生长激素,胸腺素,细胞疗法
来源: 内蒙古医科大学
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学,基础医学
单位: 内蒙古医科大学
分类号: R329.2
总页数: 49
文件大小: 3546K
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