希金斯刺盘孢T-DNA插入突变体表型筛选及其特性分析

论文摘要

以希金斯刺盘孢菌株Ch-1为供试野生型菌株,通过农杆菌介导转化方法获得含2 000个转化子的T-DNA插入突变体库,筛选菌落生长异常或致病缺陷突变体,分析致病缺陷突变体的T-DNA插入拷贝数和位点。结果显示,筛选到14株菌落异常突变体,包括2株生长缓慢突变体Ch-1-E393和Ch-1-C135、12株菌落形态异常突变体（包括色素异常、菌落扇变或菌丝坍塌现象）,另外筛选到1株致病缺陷突变体Ch-1-G090。致病性测定结果表明,致病缺陷突变体Ch-1-G090接种拟南芥后,叶片发病明显减弱,且未产生水渍状病斑。显微观察发现该突变体分生孢子在叶片上仅能产生少量初生菌丝,不能正常形成次生菌丝。Southern杂交显示,致病缺陷突变体Ch-1-G090为T-DNA双拷贝插入;通过Inverse-PCR法获得插入T-DNA的侧翼序列,明确该突变体T-DNA插入位点分别为假定蛋白（Ch06310682）和RNA加工蛋白FCF1（CH06310671）编码区。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材 料
•   1.2 希金斯刺盘孢的T-DNA插入突变体库构建
•   1.3 转化子的遗传稳定性和PCR鉴定
•   1.4 转化子的菌落形态观察
•   1.5 转化子的致病性测定
•   1.6 转化子的侵染过程观察
•   1.7 T-DNA插入位点侧翼序列的克隆、测序和分析
•   1.8 数据分析
• 2 结果与分析
•   2.1 希金斯刺盘孢T-DNA插入突变体库构建及转化子分析
•   2.2 希金斯刺盘孢菌落生长异常突变体分析
•   2.3 希金斯刺盘孢致病缺陷突变体的筛选及侵染特性分析
•   2.4 致病缺陷突变体Ch-1-G090的Southern杂交检测及T-DNA插入位点侧翼序列分析
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 周鹏,顾琼楠,黄俊斌,郑露

关键词: 希金斯刺盘孢,农杆菌介导转化,突变体,致病性,插入位点

来源: 华中农业大学学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

单位: 湖北省烟草公司襄阳市公司,华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室,湖北省农业科学院植保土肥研究所/农业农村部华中作物有害生物综合治理重点实验室/农作物重大病虫草害防控湖北省重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31101399)

分类号: S432.44

DOI: 10.13300/j.cnki.hnlkxb.2019.04.005

页码: 33-39

总页数: 7

文件大小: 2500K

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