导读:本文包含了包装细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:逆转录,病毒,载体,细胞系,细胞,基因,细胞株。
包装细胞论文文献综述
余飞,盛冠男,陈冠男,王南南,宁莉莉[1]（2019）在《MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞株的建立》一文中研究指出目的:构建迁移诱导基因(migration inducing gene 7,MIG7)的逆转录病毒表达载体并测序,初步建立其包装细胞株。方法:根据MIG7已知序列设计合成所需脱氧寡核苷酸序列,并与线性RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体连接。PCR扩增热转化后的连接产物,检测和挑取阳性克隆和阳性菌落,提取质粒后测序,与Gen-Bank中特异性MIG7-shRNA基因序列对比。包装并获取MIG7-shRNA重组逆转录病毒,qRT-PCR测定MIG7-shRNA重组逆转录病毒滴度并转染MHCC-97H细胞株。结果:构建的MIG7-shRNA表达载体与设计的完全一致,成功获得MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体质粒CTC698-1-1和CTC698-2N-1转染的PT67细胞克隆株,pSIREN-M1病毒和pSIREN-MN病毒颗粒数约为1.0×10~8v.p/ml,能高效转染MHCC-97H细胞株。结论:成功构建了MIG7的逆转录病毒表达载体并建立其包装细胞株。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2019年10期）
张杰,王彦刈,吕磊,郁建平[2]（2015）在《单嗜性包装细胞包装逆转录病毒方法研究》一文中研究指出逆转录病毒的感染范围(嗜性)是由所使用的包装细胞表达的包膜蛋白所决定的,因此改变现有的包装细胞的包膜蛋白就可以改变所包装的逆转录病毒的嗜性。为了达此目的,在稳定表达MMLV包膜蛋白的逆转录病毒包装细胞BOSC23细胞中共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出的逆转录病毒只能感染少量的人源性的293F细胞,说明VSV-G不能完全替换掉MMLV包膜蛋白。因此我们利用RNA干扰技术首先沉默BOSC23细胞中的MMLV包膜蛋白的表达,然后共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出了高滴度的泛嗜性的逆转录病毒。(本文来源于《贵州大学学报(自然科学版)》期刊2015年03期）
王文彬[3]（2015）在《缺失E1区猪3型腺病毒包装细胞系的构建》一文中研究指出猪3型腺病毒(PAdV-3)于1964年从健康猪肠道首次分离。在猪用口服疫苗研究方面,PAdV-3在肠道嗜性、免疫原性和逃逸自身载体免疫方面,显着优于目前普遍使用的人5型腺病毒(HAdV-5)。此外,在人用疫苗研究方面,由于PAdV-3与HAdV-5无血清交叉反应,避免了人体普遍存在HAdV-5载体免疫的干扰和造成潜在的组织损伤,因此PAdV-3比HAdV-5也更具安全性。充分发挥PAdV-3以上优势的前提是具备缺失E1区猪3型腺病毒(PAdV-3ΔE1)的感染性克隆和高效包装细胞系。本实验室目前已拥有PAdV-3ΔE1感染性克隆,但是由于已报道包装PAdV-3ΔE1的细胞系VR1BL(稳定表达HAdV-5 E1和PAdV-3 E1Blarge的猪视网膜上皮细胞系)受到多达13项专利保护,因此,基于PAdV-3ΔE1的口服疫苗及基因递送系统研究受到了极大的限制。考虑到野生型PAdV-3除了可在VR1BL中增殖外,还可在猪睾丸(swine testicular,ST)细胞中高效增殖,本研究基于第二代重组慢病毒包装系统,构建可稳定表达PAdV-3 E1Blarge和I-SceI的细胞系——ST-E1-E1Blarge-ISceI。与专利保护的VR1BL细胞相比,ST-E1-E1Blarge-ISce I细胞可实现PAdV-3ΔE1的成功包装和高效增殖,病毒包装能力略低于VR1BL细胞,但96 h内病毒增殖能力比VR1BL细胞高100倍。本研究的主要内容和结果如下:1.第二代重组慢病毒的包装构建第二代慢病毒包装用克隆载体。在本实验室已构建的克隆载体的基础上,合成连接肽3HA-MCS1-2A-MCS2,将合成片段连接到克隆载体上构建成pTrip-CMV-3HA-MCS1-2A-MCS2-IRES-Hygro。在MSC1处插入3NLS-ISceI基因,在MSC2处插入His-E1Blarge基因序列。PCR、酶切鉴定及测序正确的载体,按照操作步骤将包装载体psPAX2、病毒衣壳载体pMD2.G、克隆载体共转染293T细胞,包装慢病毒后测定病毒滴度。进而从慢病毒抗性筛选和蛋白表达两个方面验证重组慢病毒包装成功。2.ST-E1-E1Blarge-ISceI细胞系的筛选10 MOI重组慢病毒转导ST-E1细胞,按照标准操作步骤进行潮霉素筛选细胞,连续筛选3轮后,挑取细胞单克隆传代培养,分别收集第5代、第10代和第30代细胞样品,用Western blot方法检测细胞中是否稳定表达PAdV-3 E1Blarge和I-SceI,分别用抗HA鼠单抗和抗His鼠单抗作为一抗。实验结果表明,ST-E1-E1Blarge-ISceI细胞筛选成功并能稳定表达PAdV-3 E1Blarge和I-SceI。3.检测PAdV-3ΔE1在VR1BL和ST-E1-E1Blarge-ISceI上拯救和增殖能力将本实验室已有的PAd V-3ΔE1基因组载体,经Pac I酶切线性化,使用Lipofectin reagent转染VR1BL和ST-E1-E1Blarge-ISceI细胞,包装E1区表达绿色荧光的PAdV-3病毒(PAdV219),观察转染效率和测定包装病毒的滴度。实验结果表明,本实验室筛选的细胞可以包装PAd V-3ΔE1,但病毒基因组转染效率和病毒包装效率略低于VR1BL细胞。在病毒增殖能力方面,72 h内本文构建细胞与VR1BL细胞具有相似增殖能力。但在72-96 h之间,由于本文构建细胞存活率仍接近50%,而VR1BL细胞全部脱落死亡,所以本文构建细胞病毒增殖滴度比VR1BL细胞高出100倍。综合以上实验结果表明,本实验室筛选细胞系具有高效PAdV-3ΔE1包装和增殖能力,并有望极大促进基于PAdV-3ΔE1口服载体疫苗和基因递送系统的研究。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
丁宁,李坤,常明[4]（2014）在《增强型绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子包装细胞系的建立及鉴定》一文中研究指出目的:建立及鉴定产生绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子(hRI)的PA317包装细胞系。方法:采用脂质体转染法将pLNCX-EGFP-C1-hRI质粒转染至PA317包装细胞,分为空白细胞组(未转染组)、pLNCX-EGFP-C1转染组(对照组)、pLNCX-EGFP-C1-hRI转染组(实验组),每组设3个复孔,转然后用RT-PCR和Western blot方法检测egfp-hRI基因在PA317细胞的表达。结果:RT-PCR和Western blot方法显示,转染后在PA317细胞中检测到egfp-hRI基因表达;用脂质体转染法获得了G418阳性的PA317包装细胞克隆。结论:实验成功建立了产生绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子的PA317包装细胞系,为后续试验奠定了基础。(本文来源于《中国医学装备》期刊2014年09期）
岳翠青,邵华明,林志娟,刘艳菲,吴国庆[5]（2013）在《叁质粒慢病毒包装细胞体系的构建及其感染效率检测》一文中研究指出目的建立一种基于叁质粒的慢病毒包装细胞体系并对其感染效率进行检测。方法利用双酶切方法构建一个pLVTHM重组慢病毒表达载体,然后与pSPAX2,pMD2.G共转染HEK293T获取慢病毒原液,利用高速离心的方法对其进行浓缩纯化。设定不同感染复数(1,5,10,15,20),将上述制备的慢病毒制品感染HEK293T和HepG2肝癌细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达水平以确认制备的病毒是否成功,其感染效率如何。结果利用一段非沉默性基因片段,构建了一个pLVTHM重组慢病毒表达载体,将其与两个包装质粒共转染HEK293T细胞后,荧光显微镜下可见发出明亮绿色荧光,证明上述载体成功转染到包装细胞中。于转染后42h和66h分别收集细胞培养上清,获得含有慢病毒的原液,对病毒进行浓缩后获得浓度为1×10~8TU/ml的病毒浓缩液。利用浓缩的病毒感染HEK293T和HepG2细胞,随着感染时间及感染复数值的增加,细胞内绿色荧光表达明显增强,感染后24h时HEK293T细胞内即可见明亮绿色荧光,其感染效率约为60%;在较难进行基因转染的HepG2细胞中,感染后24h后约40%的细胞可见明亮绿色荧光。结论成功建立了叁质粒慢病毒包装细胞体系,该体系可成功表达含有目的基因的慢病毒,为后续系列研究提供了重要的工作平台。(本文来源于《潍坊医学院学报》期刊2013年01期）
王晓辉,惠玲,吕同德,哈小琴,王剑峰[6]（2011）在《携带钙整合素结合蛋白基因逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞系的建立》一文中研究指出目的:构建钙整合素结合蛋白(CIB)的逆转录病毒表达载体,并建立包装细胞系。方法:质粒pet32-CIB经EcoRI和XhoI双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建重组逆转录病毒表达载体pLXSN-CIB,PCR及双酶切鉴定后,通过脂质体转染导入包装细胞pA317,G418稳定筛选后获得抗性克隆,NIH3T3细胞进行逆转录病毒颗粒滴度测定。结果:重组逆转录病毒表达载体pLXSN-CIB质粒测序结果与GenBank中序列一致,经PCR及酶切鉴定证实,获得了大约574bp的基因片段,且正确插入pLXSN-CIB载体中;建立了pA317-CIB包装细胞系,采用NIH3T3细胞测定病毒滴度为6.81×105CFU/mL。结论:pLXSN-CIB结构正确,成功构建了CIB基因的逆转录病毒表达载体并建立了pLXSN-CIB包装细胞系。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2011年10期）
李洋,钱明,井宏宇,钱东华[7]（2011）在《HSV-TK逆转录病毒包装细胞系建立及病毒滴度测定》一文中研究指出目的建立HSV-TK逆转录病毒包装细胞系并获得高产病毒的细胞株。方法将TK基因与逆转录表达载体PLEGFP-N1连接后转染到包装细胞PA317中,经G418及荧光蛋白双重筛选得到高产病毒的细胞株。结果经酶切鉴定成功构建PlEGFP-N1-TK重组载体,含HSV-TK基因重组逆转录病毒包装细胞PA317成功建立,经病毒滴度测定获得高产病毒的PA317/TK细胞株。结论制备的重组病毒具有感染靶细胞的活性,为进一步应用HSV-TK基因进行肺癌的自杀基因治疗研究奠定基础。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2011年16期）
张靖,王天云,张俊河,杨保胜,张继红[8]（2010）在《MAR介导的逆转录病毒包装细胞系的建立》一文中研究指出根据GenBank登录的序列号,使用primer5.0进行引物设计,提取人的外周血基因组DNA为模板,PCR方法扩增出人β-珠蛋白MAR序列,将MAR序列插入到逆转录病毒表达载体pLXSN,构建MAR序列介导的逆转录病毒载体。酶切和测序鉴定后,阳离子聚合物转染PA317细胞,G418筛选出阳性细胞克隆,提取病毒液上清,测定逆转录病毒颗粒滴度,逆转录病毒颗粒的最高滴度为1.6×106CFU/mL,成功建立了MAR介导的逆转录病毒包装细胞系。(本文来源于《生物技术通报》期刊2010年12期）
和艳敏,朱发明,严力行[9]（2010）在《同源盒基因HoxA10的重组逆转录病毒载体及稳定包装细胞株的建立和鉴定》一文中研究指出本研究构建携带同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株。通过PCR扩增获得hoxA10基因编码区全长序列,克隆至逆转录病毒载体MSCVneo,并测序鉴定插入的hoxA10基因。将重组载体及空载体经脂质体分别转染包装细胞系PT67,以G418筛选稳定产毒细胞株。收集病毒悬液并测定病毒滴度。结果表明:重组逆转录病毒载体MSCVneo插入的hoxA10基因序列正确。将筛选所得的高效产毒细胞株命名为PT67/MSCVneo、PT67/MSCVneo-hoxA10。测定病毒滴度分别为5×105CFU/ml、4×104 CFU/ml。结论:成功构建了同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,建立了稳定、高效、准确产生逆转录病毒的细胞株,为探讨hoxA10基因在造血干细胞的增殖和分化功能提供了实验基础。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2010年03期）
楚元奎,吕长荣,陈冬梅,曹晖,窦忠英[10]（2010）在《人神经元素3基因重组逆转录病毒表达载体的构建及其包装细胞株的建立》一文中研究指出为构建表达人神经元素3基因(neurogenin 3,ngn3)的重组逆转录病毒载体,建立稳定表达ngn3的包装细胞株,本研究以流产人胎儿胰腺组织为材料,通过RT-PCR方法克隆出人ngn3基因,将其连接到pMD18-T载体上并测序,结果表明,测序得到的基因序列与发表的人ngn3基因序列(GenBank Accession No.BC126468)完全一致。将EcoRI和HpaI双酶切后的基因片段构建到pMSCV-neo逆转录病毒载体中,酶切鉴定结果表明,pMSCV-ngn3重组逆转录病毒载体构建成功。脂质体法将pMSCV-ngn3重组载体导入PT67包装细胞,G418筛选后,对得到的细胞株进行RT-PCR和免疫组化检测,结果显示,该细胞株在mRNA水平和蛋白水平均稳定表达Ngn3;收集该细胞株的培养上清液,进行RT-PCR检测及电镜观察,结果表明,该细胞株将导入的重组逆转录病毒载体pMSCV-ngn3包装成了具有感染性的病毒颗粒,并将其释放到了培养上清液中。以上结果表明PT67-ngn3包装细胞株建立成功。该细胞株的成功建立,为下一步将ngn3基因应用于提高人胎儿胰腺祖细胞诱导分化效率方面的研究奠定了基础。(本文来源于《生物工程学报》期刊2010年04期）
包装细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
逆转录病毒的感染范围(嗜性)是由所使用的包装细胞表达的包膜蛋白所决定的,因此改变现有的包装细胞的包膜蛋白就可以改变所包装的逆转录病毒的嗜性。为了达此目的,在稳定表达MMLV包膜蛋白的逆转录病毒包装细胞BOSC23细胞中共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出的逆转录病毒只能感染少量的人源性的293F细胞,说明VSV-G不能完全替换掉MMLV包膜蛋白。因此我们利用RNA干扰技术首先沉默BOSC23细胞中的MMLV包膜蛋白的表达,然后共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出了高滴度的泛嗜性的逆转录病毒。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
包装细胞论文参考文献
[1].余飞,盛冠男,陈冠男,王南南,宁莉莉.MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞株的建立[J].现代肿瘤医学.2019
[2].张杰,王彦刈,吕磊,郁建平.单嗜性包装细胞包装逆转录病毒方法研究[J].贵州大学学报(自然科学版).2015
[3].王文彬.缺失E1区猪3型腺病毒包装细胞系的构建[D].西北农林科技大学.2015
[4].丁宁,李坤,常明.增强型绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子包装细胞系的建立及鉴定[J].中国医学装备.2014
[5].岳翠青,邵华明,林志娟,刘艳菲,吴国庆.叁质粒慢病毒包装细胞体系的构建及其感染效率检测[J].潍坊医学院学报.2013
[6].王晓辉,惠玲,吕同德,哈小琴,王剑峰.携带钙整合素结合蛋白基因逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞系的建立[J].细胞与分子免疫学杂志.2011
[7].李洋,钱明,井宏宇,钱东华.HSV-TK逆转录病毒包装细胞系建立及病毒滴度测定[J].中国老年学杂志.2011
[8].张靖,王天云,张俊河,杨保胜,张继红.MAR介导的逆转录病毒包装细胞系的建立[J].生物技术通报.2010
[9].和艳敏,朱发明,严力行.同源盒基因HoxA10的重组逆转录病毒载体及稳定包装细胞株的建立和鉴定[J].中国实验血液学杂志.2010
[10].楚元奎,吕长荣,陈冬梅,曹晖,窦忠英.人神经元素3基因重组逆转录病毒表达载体的构建及其包装细胞株的建立[J].生物工程学报.2010
论文知识图
