基于恒定链载体不同抗原表位串联嵌合体免疫原性分析

基于恒定链载体不同抗原表位串联嵌合体免疫原性分析

论文摘要

为研究多抗原表位串联在恒定链(inviraint chain,Ii)功能片段载体增强免疫作用中的特性,自行设计一系列引物,克隆新城疫病毒HN和鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因片段,用连接序列将其串联,并进一步连接小鼠Ii功能片段Cyt/TM,构建HN/VP2、Cyt/TM/VP2、Cyt/TM/HN、Cyt/TM/HN/VP2和Cyt/TM/VP2/HN共5个嵌合体,定向插入pET-32a原核表达载体,转化大肠杆菌诱导表达并纯化融合蛋白,分别免疫小鼠,经间接ELISA法测定血清抗体效价。结果显示,Ii功能片段可增强小鼠分泌特异性抗体,无论是Ii功能片段连接单一抗原表位,还是Ii功能片段连接多抗原表位串联,均比单用抗原表位免疫组提高抗体效价3倍以上,而多抗原表位串联不同试验组之间差异不明显。结果表明,Ii功能片段(Cyt/TM)具有增强免疫的作用,其连接的抗原表位串联不影响其免疫原性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验动物
  •   1.2 工具酶与试剂
  •   1.3 引物的设计与合成
  •   1.4 病毒抗原基因片段及其串联表位嵌合体的制备
  •   1.5 重组质粒的构建
  •   1.6 融合蛋白的原核诱导表达及嵌合体抗原的制备
  •   1.7 小鼠免疫
  •   1.8 间接ELISA测定抗体效价
  •   1.9 免疫印迹检测抗原肽的免疫原性
  • 2 结果
  •   2.1 抗原表位基因及其串联嵌合体重组质粒的鉴定
  •   2.2 原核表达的抗原表位及其串联嵌合体蛋白的鉴定
  •   2.3 抗原肽及其嵌合体融合蛋白的免疫原性鉴定
  •   2.4 免疫小鼠特异性抗体效价的检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 熊冉,艾珊珊,萧晟

    关键词: 恒定链载体,串联基因,免疫原性,新城疫病毒,鸡传染性法氏囊病病毒

    来源: 中国兽医学报 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 芜湖职业技术学院

    基金: 安徽省高校科学研究基金资助项目(KJ2018A0693),芜湖职业技术学院校级科研基金资助项目(Wzyzr201711),安徽省特色(品牌)专业动物防疫与检疫专业基金资助项目(2016tszy087)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.08.07

    页码: 1460-1465

    总页数: 6

    文件大小: 1232K

    下载量: 47

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