新型Red重组质粒pRO38的构建及Red系统的定向进化

论文摘要

[目的]构建新型Red同源重组质粒,对red基因进行分子定向进化,获取高重组效率的red突变基因。[方法]采用PCR的方法扩增不同的功能片断,通过体外同源重组的方法构建Red同源重组质粒pRO38。采用双链重组的实验验证质粒的同源重组功能后,随机突变red基因,通过修复neo缺失突变的方法筛选具有高重组效率的red基因突变质粒库。[结果]构建了长为5 593 bp的pRO38质粒,pRO38质粒具备正常的重组功能,可以有效地将kan-sac B片段插入大肠杆菌染色体。对pRO38中的red基因进行随机突变后,获得了约60个成功修复了neo缺失突变的菌落,而原始的pRO38质粒则无菌落生长。[结论]构建了新型的Red同源重组质粒。通过定向进化的手段,成功获得了高重组效率的red突变基因库,为从根本上提高Red重组效率打下了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验材料
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 仪器
•     1.1.4 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 pRO1质粒的构建
•     1.2.2 pRO38质粒的构建
•     1.2.3 pRO38质粒重组功能的验证
•     1.2.4 Red重组系统的定向进化
• 2 结果与分析
•   2.1 pRO1质粒的构建
•   2.2 pRO38质粒的构建
•   2.3 pRO38质粒重组功能的验证
•   2.4 red基因的定向进化
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈如意,李玉娟,陈伟

关键词: 重组系统,大肠杆菌,双链重组,单链重组,缺失突变,分子定向进化

来源: 生物技术 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 广东药科大学生命科学与生物制药学院,广东省生物技术候选药物研究重点实验室

基金: 广东省科技计划项目(2015A010107014),国家自然科学基金项目(31501895)

分类号: Q78

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.06.0084

页码: 513-518+524

总页数: 7

文件大小: 344K

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