徐飞鹤
湖州市妇幼保健院(浙江湖州313000）
【摘要】目的寻找方便、经济的葛根素含量测定方法。方法先薄层层析分离提取，再用紫外分光光度法测定含量和回收率。结果回归统计，标准曲线线性好(r=0.9997)，回收率高。结论薄层-紫外分光光度法方法简便，测定结果准确、重现性好，适用于葛根素胶囊的质量控制。
【关键词】葛根素薄层层析紫外分光光度法
［中图分类号］R961［文献标识码］A［文章编号］1810－5734(2010)1-0054-02
葛根素能增强心肌收缩力、保护心肌细胞，能扩张血管、降低血压、改善微循环，主要用于缺血性心脏病、冠心病、心绞痛、心肌梗塞以及脑缺血、脑梗塞、脑血栓，临床疗效明显［１］［２］。葛根素胶囊既避免了注射剂急性血管内溶血等不良反应，又方便病人服用和携带。现以葛根素作为控制指标，采用薄层-紫外分光光度法测定其含量。
1材料与方法
1.1药物与试剂：葛根素标准品(中国药品与生物制品检定所)；薄层层析硅胶G(青岛海洋化工有限公司)；葛根素胶囊(陕西生命华能健康科技有限公司,批号070416)，甲醇、乙醇、氯仿均为分析纯，羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。
1.2仪器：紫外-可见分光光度计(HITACHI557)；TG328光电分析天平；254nm紫外光。
1.3薄层层析板的制备：薄层层析硅胶G加0.5%CMC-Na溶液(1:4)，搅拌均匀，湿法制板，厚度0.3mm，大小20cm*10cm，自然晾干后，105℃活化lh，置干燥器中备用。展开剂为氯仿-甲醇-水(4：3：2)。
1.4标准溶液的制备：精密称取葛根素标准品3.120mg于25ml容量瓶中，加入95％乙醇振摇使溶解并定容。浓度为0．1248mg／ml。冷藏保存，备用。
1.5测定波长的选择：根据文献报道［３］，取标准品溶液0.4ml，置10ml容量瓶中，加0.6ml甲醇，用水稀释至刻度，得标准品溶液；取甲醇作空白，在紫外-可见分光光度计上扫描，在240～280nm范围内扫描得到扫描曲线，并在其最大吸收波长周围测得吸收度，最大吸收波长为251nm。
1.6回归方程的建立［４］：精密量取标准溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0m1分别置10ml容量瓶中，各加甲醇至刻度，摇匀，以甲醇为空白，在248nm的波长处测定吸光度。吸光度分别为0.134，0.250，0.366，0.482，0.598，以吸光度A为纵座标，浓度C(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线。经回归统计，得标准曲线方程：A=0.0181+46.45C，r=0.9997。
1.7实验方法［５］：取样品适量，剥开胶囊壳倒出颗粒，研细，精密称取细粉适量，加甲醇溶解，过滤液置于25ml容量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，精密吸取40μl与标准溶液20μl，分别点样于同一薄层板上，硅胶板下端点样，间隔1.5cm，以氯仿-甲醇-水(4：3：2)为展开剂，在254nm紫外分析仪下划出有效斑点范围，并在薄层空白处划出一块与标准品斑点范围相似的面积作对照，刮下斑点置于刻度离心管中，用玻棒碾碎，加4mL甲醇洗脱，弃去初滤液,取续滤液置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，甲醇为空白，按分光光度法在251m的波长处测定吸收度，计算样品中葛根素含量。
2实验结果
2.1含量测定：取样品5颗，去壳研细，精密称取细粉适量5份，分别按1．7所述方法操作，测定吸收度，计算样品中葛根素含量。结果见表2。
2.2回收率试验：精密称取标准品适量5份，分别加入已知浓度的样品溶液中，按1．7所述方法操作，测定吸收度，根据回归方程计算回收率。
3讨论
3．1TLC-UV法受薄层厚度、均匀程度、点样量的准确性以及刮取斑点的回收精确度等的影响，操作过程中要严格控制条件，才能保证较高的精确度。
3.2参考相关文献资料，对展开系统做过对比：用氯仿-甲醇-水(5：2：0．1)［６］氯仿-甲醇(4：1)［７］展开，效果都不如氯仿-甲醇-水(4：3：2)，故本文选用氯仿-甲醇-水(4：3：2)为展开剂。
3.3样品经本法分离后与标准品葛根素Rf值相同的斑点，其甲醇液在240～280nm波长范围内进行光谱扫描，在251±lnm波长处有最大吸收，而阴性溶液在此波长范围内不干扰,故本法选用251nm为测定波长。
3.4本实验以葛根素为指标，采用薄层-紫外分光光度法(TLC-UV)测定葛根素胶囊中葛根素含量，操作简单，结果准确，重现性好,有一定的专属性，平均回收率达到98.93%，RSD=0.14%，在无高压液相色谱仪的条件下可以作为控制质量的定量手段。
参考文献
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［2］孙军山.葛根素治疗短暂性脑缺血发作疗效观察［Ｊ］.现代中西医结合杂志,2009，18（28）：3444-3445.
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［4］杨振林,寇玉玺,李红举.紫外分光光度法测定葛根冲剂中葛根素含量［Ｊ］.医药论坛杂志,2005,26(6):57
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