过表达Nrf2对氧化应激状态下骨髓间充质干细胞凋亡的保护作用

论文摘要

目的探讨Nrf2调节氧化应激状态下对骨髓间充质干细胞（Bone marrowmesenchymal stem cells,BMSCs）凋亡的作用及机制。方法原代培养SD大鼠BMSCs;构建过表达Nrf2重组慢病毒载体（pLV-hefla-EGFP）和沉默Nrf2重组慢病毒载体（pLV-Hu6-Nfe212 shRNA02-hEFLa-EGFP）,并以空载体质粒pLV-hefla-EGFP、基因沉默质粒pLV-Hu6-shRNA02-hEFla-EGFP作为实验空载体阴性对照,分别转染骨髓间充质干细胞,建立稳定过表达Nrf2及沉默Nrf2的骨髓间充质干细胞系;H2O2模拟心肌梗死后氧化应激状态;随机分为5组:空白对照组（Control）、Nrf2干扰空载体组（Nrf2-Vector）、Nrf2干扰组（si-Nrf2）、Nrf2过表达空载体组（Nrf2-Scramble）、Nrf2过表达组（LV-Nrf2）。Western Blot鉴定慢病毒转染Nrf2 BMSCs成功;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测BMSCs凋亡率;Western Blot检测Nrf2、HO-1、NQO1等抗氧化基因蛋白的表达。结果 Control组、si-Nrf2组、LV-Nrf2组总体凋亡率（%）分别为68.52±0.04、89.22±0.02、38.99±0.06;与Control组相比,LV-Nrf2组BMSCs的总体凋亡率显著降低（P<0.05）,si-Nrf2组BMSCs总体凋亡率显著升高（P<0.05）;此外,与Control组相比, LV-Nrf2组抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO1相对表达量显著上调（P<0.05）;si-Nrf2组抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO1相对表达量显著下调（P<0.05）。结论过表达Nrf2可有效减少氧化应激状态下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能是通过激活Nrf2/HO-1/NQO1信号通路。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验动物
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 主要仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 SD大鼠BMSCs的分离和培养
•     1.2.2 SD大鼠BMSCs的流式细胞术表型鉴定
•     1.2.3 SD大鼠BMSCs的Nrf2慢病毒载体转染
•     1.2.4 流式细胞术探讨H2O2模拟氧化应激环境的最佳浓度及时间
•     1.2.5 流式细胞术检测各组细胞凋亡
•     1.2.6 Western blot检测慢病毒转染Nrf2后Nrf2、HO-1及NQO1的表达水平
•   1.3 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 SD大鼠BMSCs形态学鉴定
•   2.2 SD大鼠BMSCs流式细胞术鉴定
•   2.3 BMSCs成功转染并表达Nrf2
•   2.4 H2O2模拟BMSCs氧化应激环境的最佳浓度及时间确定
•   2.5 过表达Nrf2降低氧化应激状态下BMSCs的凋亡
•   2.6 过表达Nrf2提升BMSCs抗氧化蛋白HO-1、NQO1水平
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 汤娅,石蓓,赵然尊

关键词: 骨髓间充质干细胞,氧化应激,细胞凋亡

来源: 遵义医学院学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 心血管系统疾病

单位: 遵义医科大学附属医院心血管内科

基金: 国家自然科学基金资助项目(NO:81660049),贵州省科技厅社发处项目(NO:黔科合SY字[2013] 3046)

分类号: R542.22

DOI: 10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2019.0127

页码: 509-516

总页数: 8

文件大小: 7755K

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