导读:本文包含了重组痘苗病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:痘苗,病毒,脑炎,疫苗,天坛,免疫,细胞。
重组痘苗病毒论文文献综述
辛佳亮[1]（2019）在《表达山羊痘病毒N1L基因重组痘苗病毒的构建及其生物学特性研究》一文中研究指出为探究山羊痘病毒(Goatpox virus,GTPV)N1L基因(gN1L)的生物学功能,本研究以痘苗病毒天坛株(vaccinia virus Tiantan,VTT)N1L基因(vN1L)片段为左右同源重组臂,构建了含有VACV早/晚期强复合启动子(PE/L)、绿色荧光蛋白(EGFP)基因及大肠杆菌黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(gpt)基因的转移载体质粒pLR-EGFP-gpt。分别向pLR-EGFP-gpt插入vN1L和gN1L基因表达盒,构建了转移载体质粒pLR-EGFP-gpt-N1Lrev和pLR-EGFP-gpt-gN1L。将上述构建的叁个转移载体分别与VTT共转染于BHK-21细胞中,通过逐代对表达绿色荧光蛋白的重组病毒蚀斑进行筛选和鉴定,最终获得了缺失vN1L基因的重组毒株VTTΔN1L、缺失后再拯救vN1L基因的重组毒株VTTN1Lrev及用gN1L基因替换vN1L基因的毒株VTTgN1L。通过体外细胞试验和动物体内试验评估重组病毒与亲本毒株的稳定性、宿主范围、复制以及毒力的差异。结果显示:构建的叁种重组病毒均可在BHK-21细胞中稳定遗传15代以上,且宿主范围无明显差异;VTT N1Lrev在BHK-21细胞中的复制速度最快,其次分别为VTTgN1L、VTT和VTTΔN1L。初步证实vN1L和N1L基因具有促进病毒复制速度的功能。体内外毒力试验显示:VTTN1Lrev毒力最强,其次分别为VTTgN1L、VTT和VTTΔN1L,其中VTTgN1L和VTT的毒力并无明显差异,VTTΔN1L毒力最低。结论,vN1L和gN1L基因均是病毒复制和毒力的相关基因,且gN1L基因可部分恢复gN1L基因的功能。(本文来源于《广西大学》期刊2019-06-01）
张迪,许丰雯,熊梓辰,郭斐[2]（2019）在《高效重组痘苗病毒天坛株载体系统的建立》一文中研究指出以痘苗病毒为载体的溶瘤病毒作为癌症治疗的新方向效果显着。同时,痘苗病毒还可以作为疫苗载体抵抗HIV、H5N1等病毒感染。因技术限制,重组痘苗病毒主要通过同源重组的方法获得,但此方法获得重组病毒的效率较低。随着CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat)-Cas9技术成功应用于多种动物、组织和细胞的基因编辑中,本研究拟利用CRISPR-Cas9技术建立高效重组痘苗载体系统。本研究首先构建了叁个靶向痘苗病毒天坛株TK区的gRNA-Cas9的质粒以及重组质粒pJ2R-EGFP,通过瞬时转染gRNA-Cas9或建立gRNA-Cas9稳定细胞系后,导入重组质粒pJ2R-EGFP并感染VTT,获得表达EGFP的重组病毒。此高效重组痘苗病毒载体系统的重组效率比传统的同源重组方法大大提高。因此,本研究建立的高效痘苗病毒载体重组系统,为其在疫苗载体构建、肿瘤免疫治疗等方面提供参考价值。(本文来源于《病毒学报》期刊2019年02期）
肖朋朋,刘昊,靖杰,韩继成,曹亮[3]（2019）在《乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗对猪体的免疫效果》一文中研究指出重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE投入使用之前需要进行本体动物免疫和攻毒保护试验,本研究将重组痘苗病毒rVTT-JEVE进行仔猪免疫接种,分别在体液免疫及细胞免疫水平上评价其免疫效果,并检测攻毒后仔猪体内乙型脑炎病毒载量,分析讨论乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE对猪体的免疫效果。经2次仔猪免疫接种后,重组痘苗病毒rVTT-JEVE组的IgG抗体水平是商品疫苗SA-14-14-2组的1.5倍,显着高于SA-14-14-2组(P<0.05),而且rVTT-JEVE组的中和抗体效价达到SA-14-14-2组的1.7倍,显着高于SA-14-14-2组(P<0.05)。rVTT-JEVE组的T淋巴细胞刺激指数为SA-14-14-2组的1.6倍,显着高于SA-14-14-2组(P<0.05)。本研究结果显示,rVTT-JEVE候选疫苗组和SA-14-14-2商品疫苗组JEV病毒载量均显着低于PBS对照组(P<0.05),均可有效保护仔猪感染JEV。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年02期）
肖朋朋,刘昊,靖杰,温树波,韩继成[4]（2018）在《乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗小鼠安全性评价》一文中研究指出目的对重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE进行动物安全性评价。方法用重组痘苗病毒rVTT-JEVE对BALB/c小鼠进行免疫接种,分别在体液免疫及细胞免疫水平上评价其免疫效果;并通过检测小鼠体内rVTT-JEVE病毒残留,分析乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE的安全性。结果 BALB/c小鼠经两次免疫接种后,重组痘苗病毒rVTT-JEVE组IgG抗体水平是商品疫苗SA-14-14-2组的1.4倍(t=3.704,P<0.05),中和抗体效价是SA-14-14-2组的1.6倍(t=4.418,P<0.05),T淋巴细胞增殖水平为SA-14-14-2组的1.7倍(t=3.092,P<0.05)。rVTT-JEVE接种小鼠后第1d各脏器均有rVTT-JEVE病毒残留,第3d颌下淋巴结已无病毒残留,第7d仅脾脏和雄性小鼠心脏有少量病毒残留,之后均无病毒残留。结论重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE免疫小鼠可产生较好的免疫效果及免疫安全性。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2018年11期）
田刚,金坚[5]（2018）在《重组溶瘤痘苗病毒VG9-MnSOD的构建及其对胃癌细胞的杀伤作用》一文中研究指出目的构建重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD,并探讨其对胃癌细胞的杀伤作用及可能的机制。方法利用同源重组的方法在痘苗病毒VG9的TK区插入锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)基因,构建重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD,经筛选及纯化后,测定病毒滴度。将重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD及痘苗病毒VG9分别按不同的MOI(0.01、0.1、1、10)及转染时间(12、24、36、48 h)转染至人胃癌细胞株7901,MTT法检测病毒对胃癌细胞的杀伤作用。按MOI=1将重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD及VG9分别转染人胃癌细胞株7901 48 h,同时以PBS作为对照,Western blot法检测胃癌细胞中Mn SOD的表达,流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡情况。结果经筛选及纯化后,重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD滴度为2×108 pfu/m L。MOI为1和10时,重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD对胃癌细胞的杀伤作用明显优于VG9(P<0.05);转染24和36 h,重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD对胃癌细胞的杀伤效果明显强于VG9(P<0.05)。转染后,Mn SOD蛋白可在胃癌细胞中呈高表达,且VG9-Mn SOD组胃癌细胞的凋亡率明显高于VG9组及对照组(P<0.05)。结论成功构建了重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD,其对胃癌细胞具有明显的杀伤作用,该作用可能是通过促进胃癌细胞凋亡产生的。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2018年06期）
张会雷,刘任强,张敏敏,王喜军,葛金英[6]（2017）在《非洲猪瘟病毒结构蛋白基因重组痘苗病毒的构建及鉴定》一文中研究指出非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种猪的传染病,发病率和死亡率几乎达100%,是尚未传入我国的重要的猪烈性病。为研制安全有效的ASF储备疫苗,本研究利用本实验室改造的痘苗病毒(VV),将ASFV的结构蛋白P72和P54或CD2v和P30的基因分别插入到VV基因组中,构建了同时表达P72和P54的重组VV(rVV-P72-P54)以及同时表达CD2v和P30的重组VV(rVV-CD2v-P30)。Western blot和间接免疫荧光试验表明外源基因在重组病毒感染的细胞中均能够正确表达。这两株重组病毒在体外细胞培养中的增殖效率与亲本病毒无显着差异。该研究为进一步的动物免疫实验奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2017年10期）
肖朋朋,靖杰,温树波,韩继成,鲁会军[7]（2017）在《乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗安全性评价研究》一文中研究指出引言近年来,乙型脑炎病毒(JEV)在我国甚至亚洲地区广泛流行,威胁着人和家畜的安全,经过这些年我国政府及相关部门的努力,乙型脑炎患者的发病率及死亡率不断下降,但是对于猪的乙型脑炎的预防还没有猪专用的乙型脑炎病毒疫苗,目前一般采用弱毒疫苗SA14-14-2对猪进行免疫。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集》期刊2017-08-20）
于海,王书晖,刘颖,王硕,邵一鸣[8]（2017）在《复制型重组痘苗病毒TTK-EG特异性T细胞表位研究》一文中研究指出目的筛选和确定TTK-EG包含的H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位。方法 6~8周龄雌性BALB/c小鼠0周时分别经肌肉注射、皮内注射和滴鼻途径免疫5×10~6PFU TTK-EG,间隔4个月进行加强免疫。末次免疫后2周取小鼠脾细胞,采用IFN-γELISPOT方法筛选HIV-1 Env和Gag肽库,反应阳性的肽库进行第二轮单肽筛选。用流式细胞术(胞内因子染色,intracellular cytokine staining,ICS)对筛选出的单肽进行验证(小鼠免疫途径为肌肉注射),确定H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位。结果经过ELISPOT筛选和ICS验证,确定2条Env多肽(gp140-9,氨基酸位点60~77;gp140-74,氨基酸位点548~565)和3条Gag多肽(Gag-49,氨基酸位点196~210;Gag-64,氨基酸位点256~270;Gag-65,氨基酸位点260~274)包含H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位,其中gp140-74(IVQQQSNLLRAIEAQQHL)是首次发现的H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位。Env、Gag优势表位肽与Env、Gag全肽池刺激小鼠T细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α三种细胞因子的能力基本相同。结论 Env多肽gp140-9、gp140-74和Gag多肽Gag-49、Gag-64、Gag-65包含H-2~d限制的T细胞表位,可用于重组痘苗病毒TTK-EG的T细胞免疫研究。(本文来源于《中国热带医学》期刊2017年05期）
吴冰冰[9]（2017）在《携带凝集素基因的重组腺病毒和痘苗病毒对肝癌细胞的作用机制研究》一文中研究指出第一部分携带凝集素基因的重组腺病毒和痘苗病毒对肝癌细胞的作用机制研究癌症严重威胁人类的生命和健康。肝癌是人类最常见癌症之一。随着分子生物学的发展和基因技术的进步,靶向基因—病毒联合治疗已成为肝癌治疗新的研究热点。凝集素是一类专一识别糖并与之非共价、可逆地结合的蛋白质或糖蛋白。过去几年本课题组应用病毒携带凝集素基因,通过病毒感染使凝集素基因在肿瘤细胞内表达,并对肿瘤细胞产生的细胞毒性作了一定的研究。但是,将携带不同凝集素的重组腺病毒和痘苗病毒对体外肝癌细胞的杀伤机制还没有深入研究。本课题利用已构建好的携带鲈鱼凝集素(Dicentrarchus labrax lectin,DIFBL)、紫海胆凝集素(Strongylocentrotus purpuratus lectin,SPL)、盘鲍鱼凝集素(Haliotis discus discus Lectin,HddSBL)和掌叶半夏凝集素(Pinellia pedatisecta agglutinin,PPA)的重组腺病毒Ad-DIFBL、Ad-SPL、Ad-HddSBL和重组溶瘤痘苗病毒OncoPox-PPA、OncoPox-SPL,感染肝癌细胞,研究凝集素对细胞的毒性作用机制。本课题将人的肝癌细胞SMMC-7721的肌纤维膜关联蛋白(Sarcolemma associated protein,SLMAP)和Striatin靶点Knock Down,然后用等量感染复数的Ad-DIFBL感染细胞,MTT检测以及荧光显微镜观察显示,Ad-DIFBL对SLMAP和Striatin Knock Down的SMMC-7721细胞的毒性作用明显低于对照细胞,说明SLMAP和Striatin这两种基因可能与凝集素的毒性有一定的关系,但其深入的机制尚需进一步研究。通过Western blot实验,发现用Ad-DIFBL和Ad-HddSBL处理后的细胞中组蛋白Histone H3表达量下降;用Ad-SPL和Ad-HddSBL处理后的细胞中ISG15表达量下降。OncoPox-PPA和OncoPox-SPL相较于对照病毒OncoPox-pCB,使肿瘤细胞中C-myc、SLMAP、Beclin 1表达水平明显下降;β-catenin微量下降;β-tubulin产生二聚体和叁聚体。用OncoPox-PPA、OncoPox-SPL与Onco Pox-pCB分别去感染SMMC-7721肿瘤细胞,将样品进行转录组数据分析,结果显示凝集素对多种基因水平产生影响。OncoPox-PPA处理与Onco Pox-pCB处理相比,细胞中Caspase8,FGFR1,MAVS,SIKE1上调;而TMEM173,STRIP1,IFIH1,CTTNBP2NL,Striatin4,FGFR4下调;OncoPox-SPL感染的细胞与Onco Pox-pCB感染相比,CTTNBP2NL,Striatin4,FGFR2,FGFR3,SIKE1上调;AKT1,Caspase9,FGFR4,PRMT5,STRIP1,FGFR1,MAVS,CERK下调。综上所述,Ad-DIFBL对SLMAP和Striatin Knock Down的SMMC-7721细胞的毒性相比于对照细胞明显降低,说明凝集素DIFBL与SLMAP、Striatin之间存在某种相互作用,具体是什么样的作用需要后续深入研究;Western blot,免疫共沉淀,转录组数据分析等结果显示,凝集素对多种基因表达水平产生影响。本研究为今后将凝集素基因应用于肝癌治疗研究提供了一定的基础。第二部分DIFBL、HddSBL凝集素与腺病毒受体连接的融合蛋白的抗肿瘤机制研究利用已构建好的sCAR-DIFBL和sCAR-HddSBL两种融合凝集素基因,连接到原核表达载体pQE30上,将质粒分别转到M15原核表达菌株中。通过IPTG诱导剂成功诱导出两种融合蛋白的表达,并且是以包涵体的形式表达。将诱导出的蛋白进行Ni离子亲和层析纯化及包涵体复性。融合蛋白的sCAR部分是腺病毒受体的膜外片段,能够和5型腺病毒结合;融合蛋白的凝集素部分可与肿瘤细胞膜上的某些糖蛋白结合。因此,这些融合蛋白可以通过桥连作用,使腺病毒通过细胞膜糖蛋白感染凝集素识别的肿瘤细胞。所以本课题利用这两种融合蛋白作为工具蛋白,和Ad-EGFP联合作用感染多种肿瘤细胞,通过荧光显微镜观察不同融合蛋白对Ad-EGFP感染肿瘤细胞效率的影响,发现两种融合蛋白不仅能够增强Ad-EGFP对K562/ADR和U87-MG细胞中的感染。流式检测GFP表达量结果与荧光显微镜下观察结果一致,提示凝集素DIFBL和HddSBL能识别某些肿瘤细胞膜上的糖蛋白。分别用重组腺病毒Ad-DIFBL和Ad-PPA与融合蛋白s CAR-DIFBL和sCAR-HddSBL单独或联合作用,MTT和Annexin V-FITC/PI双标记流式结果表明融合蛋白sCAR-DIFBL能够与重组病毒协同作用,增强对肿瘤细胞的杀伤效果;sCAR-HddSBL虽然也能增加病毒感染率,却能够抑制Ad-DIFBL和Ad-PPA的对肿瘤细胞的杀伤作用。Western blot结果显示,用重组腺病毒Ad-DIFBL和Ad-PPA与融合蛋白sCAR-DIFBL和sCAR-HddSBL联合作用U87-MG细胞后,p-ERK水平上升,说明凝集素DIFBL和HddSBL对细胞毒性作用无关;sCAR-HddSBL无论是与病毒联合还是单独作用于U87-MG后,E2F-1的表达量都呈上升的趋势,表明HddSBL很可能激活E2F-1的表达,达到保护肿瘤细胞生长的目的,进一步揭示了凝集素DIFBL和HddSBL对肿瘤细胞的作用机制。(本文来源于《浙江理工大学》期刊2017-03-20）
范园园,李一权,张诺娜,邢彬,胡宁宁[10]（2016）在《重组痘苗病毒TTVAC7理化特性》一文中研究指出探讨重组痘苗病毒TTVAC7的理化特性,对重组痘苗病毒活载体疫苗的规模化生产、保存、运输和净化具有一定的指导意义。将重组痘苗病毒TTVAC7和天坛株痘苗病毒VTT经热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、紫外线照射及超声波破碎处理后,接种于BHK-21细胞,通过测定TCID50观察上述理化因子处理前后TTVAC7和VTT毒价的变化,并分析这些理化因子对TTVAC7和VTT的影响。结果显示,TTVAC7经55℃作用15min,VTT经55℃作用30min即可完全被灭活;在pH值3~9的范围内,pH值的变化不会引起TTVAC7和VTT病毒滴度的显着变化;紫外线垂直距离10、30cm照射病毒液60min,不能完全灭活病毒粒子;对氯仿敏感;经1%胰蛋白酶37℃处理60min,TTVAC7和VTT的病毒滴度下降2个滴度以上;对乙醚不敏感;经40、80Hz的非接触式超声处理60min,TTVAC7和VTT的病毒滴度下降低于2个滴度。结果表明,重组痘苗病毒TTVAC7和天坛株痘苗病毒VTT理化性质相似,均不耐高温,耐酸、碱、乙醚、紫外线及超声波,对氯仿和胰蛋白酶敏感。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2016年09期）
重组痘苗病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以痘苗病毒为载体的溶瘤病毒作为癌症治疗的新方向效果显着。同时,痘苗病毒还可以作为疫苗载体抵抗HIV、H5N1等病毒感染。因技术限制,重组痘苗病毒主要通过同源重组的方法获得,但此方法获得重组病毒的效率较低。随着CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat)-Cas9技术成功应用于多种动物、组织和细胞的基因编辑中,本研究拟利用CRISPR-Cas9技术建立高效重组痘苗载体系统。本研究首先构建了叁个靶向痘苗病毒天坛株TK区的gRNA-Cas9的质粒以及重组质粒pJ2R-EGFP,通过瞬时转染gRNA-Cas9或建立gRNA-Cas9稳定细胞系后,导入重组质粒pJ2R-EGFP并感染VTT,获得表达EGFP的重组病毒。此高效重组痘苗病毒载体系统的重组效率比传统的同源重组方法大大提高。因此,本研究建立的高效痘苗病毒载体重组系统,为其在疫苗载体构建、肿瘤免疫治疗等方面提供参考价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组痘苗病毒论文参考文献
[1].辛佳亮.表达山羊痘病毒N1L基因重组痘苗病毒的构建及其生物学特性研究[D].广西大学.2019
[2].张迪,许丰雯,熊梓辰,郭斐.高效重组痘苗病毒天坛株载体系统的建立[J].病毒学报.2019
[3].肖朋朋,刘昊,靖杰,韩继成,曹亮.乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗对猪体的免疫效果[J].中国兽医学报.2019
[4].肖朋朋,刘昊,靖杰,温树波,韩继成.乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗小鼠安全性评价[J].中国病原生物学杂志.2018
[5].田刚,金坚.重组溶瘤痘苗病毒VG9-MnSOD的构建及其对胃癌细胞的杀伤作用[J].中国生物制品学杂志.2018
[6].张会雷,刘任强,张敏敏,王喜军,葛金英.非洲猪瘟病毒结构蛋白基因重组痘苗病毒的构建及鉴定[J].中国预防兽医学报.2017
[7].肖朋朋,靖杰,温树波,韩继成,鲁会军.乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗安全性评价研究[C].中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集.2017
[8].于海,王书晖,刘颖,王硕,邵一鸣.复制型重组痘苗病毒TTK-EG特异性T细胞表位研究[J].中国热带医学.2017
[9].吴冰冰.携带凝集素基因的重组腺病毒和痘苗病毒对肝癌细胞的作用机制研究[D].浙江理工大学.2017
[10].范园园,李一权,张诺娜,邢彬,胡宁宁.重组痘苗病毒TTVAC7理化特性[J].中国兽医学报.2016
论文知识图
