LncRNA FQ223609促进血管平滑肌细胞增殖

论文摘要

[目的]构建lncRNA FQ223609真核表达载体,并且探讨其促进血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖的调控机制。[方法]通过RT-PCR扩增得到735 bp的lncRNA FQ223609基因序列,以质粒p CMV-CHA为骨架构建FQ223609真核表达载体,通过HindⅢ/XhoⅠ酶切及测序进行鉴定;将FQ223609真核表达载体及其对照空载体p CMV-C-HA分别转染VSMCs,CCK-8分析细胞活力,Western Blot检测脂蛋白酯酶（lipoprotein lipase,LPL）和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达水平。[结果]双酶切及测序鉴定显示插入lncRNA FQ223609 c DNA序列正确; CCK-8结果表明过表达lncRNA FQ223609使VSMCs增殖活力提高22%; Western Blot结果表明LPL和PCNA的表达水平显著上调。[结论]lncRNA FQ223609真核表达载体成功构建; lncRNA FQ223609通过上调LPL的表达,促进VSMCs增殖。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 质粒、菌株及细胞
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 仪器
•     1.1.4 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 细胞培养
•     1.2.2 RNA提取及RT-PCR获取目的基因
•       1.2.2. 1 RNA提取及反转录:
•       1.2.2. 2 引物设计及PCR扩增:
•     1.2.3 lncRNA FQ223609重组载体构建与鉴定
•     1.2.4 CCK-8细胞活力检测
•     1.2.5 miRNA结合位点预测分析
•     1.2.6 Western Blot
•       1.2.6. 1 细胞转染:
•       1.2.6. 2 蛋白提取:
•       1.2.6. 3 Western Blot:
•     1.2.7 统计学处理
• 2 结果与分析
•   2.1 RNA提取及目的基因的获取
•   2.2 lncRNA FQ223609重组载体构建与鉴定
•   2.3 过表达lncRNA FQ223609对VSMCs细胞活力的影响
•   2.4 lncRNA FQ223609与LPL 3'UTR共有miRNA结合位点分析
•   2.5 过表达lncRNA FQ223609对LPL和PCNA表达水平的影响
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴仙华,陈伟,尚丹,林嘉杰,许馨,李芳芳,孙绍光

关键词: 血管平滑肌细胞,细胞增殖,脂蛋白酯酶

来源: 生物技术 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 河北医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,北京铁路局石家庄卫生防疫站

基金: 国家自然科学基金项目(81670273,81200215),河北省科技厅社会发展科技领域项目(14277785D),大学生创新性实验计划项目(USIP2017159)

分类号: R329.2

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.02.0030

页码: 171-176+182

总页数: 7

文件大小: 299K

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