Lmo1在小鼠耳蜗中的表达模式及功能研究

论文摘要

小鼠的内耳是一个复杂的结构,在发育的过程中其结构分化较为明显。核蛋白LMO蛋白家族由4个转录调节因子所组成,在细胞分化中起不同的作用。Lmo1在胚胎期的小鼠耳蜗中有表达,且与我们正在研究的GATA3,ISL1,ISL2等转录因子存在交互作用的可能,所以确定Lmo1对耳蜗发育的影响有助于理解早期耳蜗发育的调控网络的机制。本课题研究Lmo1敲除后对小鼠耳蜗发育的影响以及对成年小鼠的听力所造成的影响。利用原位杂交的检测出Lmo1在小鼠中的表达模式;在小鼠体内敲入报告基因LacZ从而敲除基因Lmo1,免疫荧光技术检测在Lmo1敲除后对小鼠柯蒂氏器结构的影响,主要是观察毛细胞、支持细胞以及从螺旋神经节是否发生改变,从而确定敲除Lmo1后对小鼠耳蜗发育影响。根据Lmo4的敲除结果,构建Lmo1/Lmo4双敲除的小鼠,研究Lmo1和Lmo4在耳蜗中的相互作用。Lmo1在小鼠胚胎期E13.5天表达于耳蜗中,且持续表达到出生后。实验结果显示出Lmo1敲除后对毛细胞、支持细胞以及螺旋神经节等没有明显的影响。听觉脑干电位反应(ABR)统计结果发现,野生型和突变体小鼠听力对比差异不明显。实验结果表示不是所有的Lmo4基因敲除都对产生异常的柯蒂氏器,概率约为30%,但是敲除Lmo4会导致耳蜗管变短,结构变形。双敲除基因Lmo1/Lmo4的结果发现小鼠的柯蒂氏器在形态结构上没有变化。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 附表
•   附表一PCR引物序列
•   附表二免疫荧光一抗相关信息
•   附表三免疫荧光二抗相关信息
•   附表四缩略语表
• 1.引言
•   1.1 听觉系统的结构与功能
•   1.2 小鼠内耳的发育过程
•   1.3 耳蜗的结构
•   1.4 毛细胞和支持细胞
•   1.5 小鼠耳蜗发育过程中相关的转录因子
•   1.6 LIM蛋白的研究
•     1.6.1 LIM蛋白的结构与功能
•     1.6.2 LMO家族在耳蜗当中的研究进展
• 2.实验内容和实验设计
•   2.1 研究目的和意义
•     2.1.1 研究目的
•     2.1.2 研究意义
•   2.2 实验内容
•   2.3 小鼠交配方案
•     2.3.1 Lmo1 基因敲除小鼠的交配方案
•     2.3.2 Lmo1/Lmo4 基因敲除小鼠的交配方案
•   2.4 实验流程图
•     2.4.1 Lmo1 基因在小鼠耳蜗发育中的作用
•     2.4.2 Lmo1/Lmo4 在耳蜗发育过程中的相互关系
• 3.实验试剂仪器与方法
•   3.1 实验小鼠
•   3.2 实验试剂和仪器
•     3.2.1 基因鉴定实验试剂
•     3.2.2 原位杂交试剂
•     3.2.3 免疫荧光实验试剂
•     3.2.4 实验仪器
•   3.3 实验方法
•     3.3.1 基因鉴定
•     3.3.2 小鼠胚胎的准备过程
•     3.3.3 小鼠胚胎免疫荧光反应
•     3.3.4 原位杂交
•     3.3.5 听觉脑干电位反应（ABR）
•     3.3.6 Wholemount实验步骤
• 4.实验结果
•   4.1 小鼠基因鉴定结果分析
•   4.2 Lmo1 在耳蜗中的表达模式
•   4.3 Lmo1 敲除后对毛细胞形态的影响
•   4.4 Lmo1 敲除对支持细胞的影响
•   4.5 Lmo1 敲除后对Jag1 表达的影响
•   4.6 Lmo1 敲除对螺旋神经的影响
•   4.7 Lmo1 敲除后对小鼠听力的影响
•   4.8 Lmo1和Lmo4 敲除后对柯蒂氏器的影响
•   4.9 Lmo1和Lmo4 双敲后对柯蒂氏器的影响
• 5.总结与讨论
• 6.参考文献
• 7.作者简历

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 吴智焱

导师: 王慧,梁国庆

关键词: 柯蒂氏器,毛细胞,支持细胞

来源: 杭州师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 杭州师范大学

分类号: Q954

总页数: 52

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