ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达

论文摘要

[目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产生慢病毒并转导RAW264.7细胞;转导后的细胞进行嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达的细胞;利用RT-qPCR和Western blot方法检测ERO1α的表达效果。[结果]ERO1α慢病毒过表达载体构建成功,病毒滴度为5×106～10×106TU/mL;慢病毒成功转导RAW264.7细胞并且稳定高表达。[结论]成功构建ERO1α慢病毒过表达载体,并在RAW264.7细胞中稳定高表达,为进一步研究ERO1α在免疫系统中的功能提供了技术支持。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 主要细胞、载体和细菌。
•     1.1.2 主要试剂。
•     1.1.3 主要仪器。
•   1.2 方法
•     1.2.1 引物设计与合成。
•     1.2.2 ERO1α基因扩增和重组慢病毒过表达载体的构建。
•     1.2.3 ERO1α过表达慢病毒的包装。
•     1.2.4 ERO1α过表达慢病毒滴度测定。
•     1.2.5 ERO1α慢病毒转导RAW264.7细胞及稳定表达筛选。
•     1.2.6 RT-qRCR检测ERO1α
•     1.2.7 Western blot检测ERO1α蛋白水平的表达。
• 2 结果与分析
•   2.1 pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体的构建和鉴定
•   2.2 pCD513B-ERO1α慢病毒包装和滴度测定
•   2.3 pCD513B-ERO1α慢病毒转导RAW264.7细胞及稳定表达筛选
•   2.4 pCD513B-ERO1α过表达效果的测定
• 3 结论与讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 戴安娜,胡佳慧,屈玉杏,刘婉洋,许显玉,陈风雷

关键词: 慢病毒,过表达,细胞

来源: 安徽农业科学 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 扬州大学兽医学院,江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

基金: 国家自然科学基金项目(31702298),中国博士后科学基金项目(2017M621843),江苏省自然科学基金项目(BK20170498),江苏省高校自然科学研究计划资助项目(17KJD230002),江苏高校优势学科建设工程资助项目,扬州大学大学生科创基金项目(x20180623)

分类号: Q78

页码: 89-93

总页数: 5

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