导读:本文包含了钩吻素子论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,胶质,疼痛,关节炎,理性,细胞因子,星形。
钩吻素子论文文献综述
金桂林,何赛娣,岳荣彩,许盈,叶丽香[1]（2019）在《钩吻素子对大鼠神经病理性痛行为学和脊髓机制研究》一文中研究指出目的观察钩吻素子对大鼠坐骨神经分支选择性损伤(SNI)的痛行为作用,并探讨其对脊髓自噬和星型胶质细胞活化的相关机制。方法将SNI及假手术大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、钩吻素子高剂量组(3 mg/kg)、钩吻素子低剂量组(0.6 mg/kg)和加巴喷丁对照组(加巴喷丁,800 mg/kg)。术后第3天通过灌胃给予相应药物,每日2次,连用7 d。以大鼠机械痛阈值为指标,观测钩吻素子对SNI诱导神经病理性疼痛(NP)大鼠的镇痛作用。行为学实验结束后,各组大鼠经灌注固定后取脊髓,采用Western-blot法检测胶质纤维酸性蛋白和自噬相关蛋白LC3,Beclin 1及p62的表达水平。结果与SNI模型组比较,钩吻素子高剂量组及加巴喷丁对照组大鼠的机械痛阈值显着增高。钩吻素子显着降低SNI大鼠脊髓的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平,并显着增强LC3和p62的表达,对Beclin 1无显着影响。结论钩吻素子具有显着的抗SNI大鼠机械刺激诱发痛的作用,其作用机制可能与降低脊髓星形胶质细胞活化水平及上调自噬水平有关。(本文来源于《福建医科大学学报》期刊2019年04期）
李佳艳,邬静,易金娥,杨成林,王吉[2]（2019）在《钩吻素子对H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞氧化应激和凋亡的影响》一文中研究指出目的:探讨钩吻素子(koumine)对H_2O_2诱导的猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)损伤的保护作用及其机制。方法:通过MTT法检测koumine对IPEC-J2细胞增殖的影响,并用H_2O_2诱导IPEC-J2细胞建立细胞损伤模型,通过MTT和LDH比色法检测分析koumine保护IPEC-J2细胞免受H_2O_2损伤的效果;生化方法检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹(western blot)技术检测凋亡相关蛋白bax和bcl-2的表达情况;用流式细胞仪检测氧自由基(ROS)释放量和细胞凋亡率。结果:检测浓度范围内koumine对IPEC-J2细胞没有毒性;koumine可以通过调控IPEC-J2细胞中SOD活性、LDH漏出率、MDA水平和ROS的产生,保护H_2O_2对IPEC-J2细胞的氧化损伤,抑制H_2O_2引起的IPEC-J2细胞凋亡;koumine在抑制H_2O_2引起的细胞凋亡过程中,减少了促凋亡蛋白Bax表达,增加了抑凋亡蛋白Bcl-2表达,使得Bax/Bcl-2的比值在药物作用时随剂量的增加逐渐降低。结论:koumine能够保护IPEC-J2细胞对抗H_2O_2诱导的氧化损伤,具有一定的时间和剂量依赖关系,其作用机制与抑制细胞凋亡有关。(本文来源于《中兽医医药杂志》期刊2019年03期）
罗达龙,钟家良,姚泳成[3]（2019）在《高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪测定小鼠钩吻素子中毒模型的研究》一文中研究指出目的通过动物急性钩吻素子染毒实验,建立一种测定小鼠钩吻素子的高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用方法。方法小鼠经钩吻浸泡药酒染毒后取材,其血液、胃液、尿液通过1%甲酸乙腈沉淀蛋白后,进行上机分析。采用5 mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸(A)和乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,质谱正离子化信号采用母离子模式和子离子模式对钩吻素子进行监测。结果该实验结果显示1 h取材的动物样本,经过分析,胃液与尿液的差异性更大,且胃内容物钩吻素子含量较高。结论应急采样中,优先提供胃液物进行检验,其次到尿液。(本文来源于《食品安全质量检测学报》期刊2019年05期）
金桂林,何赛娣,洪丽绵,俞昌喜[4]（2018）在《钩吻素子抗大鼠神经病理性疼痛及对星形胶质细胞活化和自噬的作用》一文中研究指出目的研究钩吻素子对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其对脊髓星形胶质细胞介导的炎症反应及自噬的作用。方法大鼠坐骨神经压榨性损伤(CCI)模型上,以机械痛阈值(MWT)为指标,观察钩吻素子对CCI模型大鼠的镇痛作用;取大鼠脊髓组织,采用免疫组织化学结合荧光显微技术、ELISA和Western蛋白质印迹等方法,检测大鼠脊髓背角星形胶质细胞标记物(GFAP)及促炎细胞因子的表达水平,检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,LC3-Ⅰ,P62和Beclin 1等表达水平,观察钩吻素子对CCI大鼠脊髓星形胶质细胞活化及自噬水平的影响;通过鞘内注射自噬抑制剂氯喹,观察其对钩吻素子的镇痛作用及星形胶质细胞活化水平的影响。结果钩吻素子7 mg·kg-1具有显着的抗CCI大鼠机械痛敏作用,并抑制脊髓背角星形胶质细胞GFAP的表达,同时减少促炎细胞因子TNF-α和IL-1β表达水平。CCI大鼠脊髓LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及P62表达水平显着降低,提示神经病理性疼痛过程中自噬流受阻,钩吻素子可显着改善CCI大鼠脊髓自噬的抑制水平;免疫荧光双标法提示,钩吻素子促自噬作用较大程度发生于脊髓星形胶质细胞。鞘内注射氯喹可拮抗钩吻素子的镇痛作用及其对星形胶质细胞活化的抑制作用,提示钩吻素子镇痛作用可能与其促进脊髓自噬水平有关。结论钩吻素子抗神经病理性疼痛作用可能与其抑制脊髓背角星形胶质细胞活化并减少促炎细胞因子释放有关,也与其促进脊髓星形胶质细胞自噬水平有关。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2018年09期）
杨渐,张晓昕,刘倩,陈冰,曾玉兰[5]（2018）在《钩吻素子对佐剂诱导关节炎大鼠T辅助细胞因子平衡偏移的调节作用》一文中研究指出目的观察钩吻素子对大鼠佐剂诱导关节炎(AIA)的治疗效应及其对模型大鼠T辅助(Th)细胞因子平衡偏移的调节作用。方法在Lewis大鼠AIA模型上,分别以注射足和对侧后足容积、机械痛阈(MWT)以及四肢关节炎指数(AI)评分为指标评价模型大鼠关节炎进展,并以ProcartaPlex多因子免疫检测及酶联免疫吸附实验(ELISA)观察各组大鼠血清Th细胞因子水平。大鼠分为对照组、AIA模型组以及钩吻素子处理组(0.6,3.0和15.0 mg·kg-1)、阳性对照药吲哚美辛组(2.5 mg·kg-1),每组10只。建模后第14天开始灌胃给药,每天1次,连续10 d,分别在建模前、给药前及给药后不同时间进行观察指标的测定,在建模前、给药前以及末次给药后1 h行眼球后静脉丛采血进行细胞因子水平检测。结果大鼠免疫后出现明显的注射足肿胀、红斑和机械痛敏,并随模型进展逐渐蔓延至对侧足。连续ig给予钩吻素子可缓解模型大鼠注射足和对侧足机械痛敏,并降低AI评分;细胞因子检测结果显示,AIA大鼠免疫后第12天起即出现显着的Th1/Th2和Th17/Treg细胞因子平衡的偏移,钩吻素子可降低模型大鼠IL-1β,IFN-γ和IL-17A水平并抑制IFN-γ/IL-4,IFN-γ/IL-10和IL-17A/TGF-β比值的升高,提示钩吻素子对AIA大鼠Th1/Th2和Th17/Treg细胞因子平衡的偏移具有调节作用,可恢复Th细胞亚群及细胞因子网络系统的平衡状态。结论钩吻素子对大鼠AIA具有显着治疗作用,并可调节模型大鼠Th细胞因子平衡的偏移,可能是其发挥抗类风湿关节炎的重要作用方式之一。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2018年09期）
肖洒,黄亚军,刘艳纯,孙志良,刘兆颖[6]（2018）在《钩吻素子在猪的体外代谢》一文中研究指出研究钩吻素子在猪体外肝S9的代谢,采用高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(HPLC/QqTOF MS)对孵育后的代谢物进行结构鉴定。结果表明,钩吻素子在猪肝S9中可生成7种代谢产物,根据原形及其代谢物的精确分子质量差、产物离子,鉴定了代谢物结构,包括N-脱甲基化代谢物(M1)、C18和C19的加氢代谢物(M3)、M3的去甲基代谢物(M4)、氧化代谢物(M6、M8和M12)和脱氢代谢物(M13)。钩吻素子在猪的代谢途径主要是氧化、还原、N-脱甲基化。其研究结果为钩吻素子在动物及人体内代谢研究奠定基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2018年08期）
沙垣坤[7]（2018）在《钩吻素子对脂多糖作用下IPEC-J2细胞的影响》一文中研究指出目的:钩吻具有抗肿瘤、镇静等作用,其发挥药理作用的主要成份为吲哚类生物碱,在我国从古至今均有使用钩吻全草来医治各种疾病的报道。钩吻素子(Koumine)是钩吻全草中含量最丰富的生物碱单体。本研究以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,构建小肠体外细胞炎症模型,应用现代分子生物学等方法,探索不同浓度的Koumine在脂多糖(Lipopolysaccharides、LPS)的作用下对IPEC-J2细胞的影响,为钩吻的综合利用与开发提供实验依据。方法:本研究以IPEC-J2细胞为研究对象,用不同浓度的Koumiine(25、50、1100μg/mL)处理24h后,用MTT法检测细胞活率;;用不同浓度的Konmine作用IPEC-J2细胞11h之后,加入LPS与细胞共同作用23 h后,用MTT法检测IPEC-J2细胞的活力;检测细胞中超氧化物歧化酶(Supweoxidedisnmutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)的活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)的含量,q-PCR检测细胞炎症因子中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA和肠道机械屏障中胞质紧密粘粘蛋白(Zonulaoccludens-1)、闭合蛋白(Ocdudin)和封闭蛋白(Claudin-1)mRNA的表达。用ELISA法检测细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-6的含量。Western blot检测肠道机械屏障中Zonula occludens-1、Ocdudin和Claudin-1蛋白的表达。结果:25、50、10100 g/mL浓度的Koumine可以提高IPEC-J2细胞的活力;用50 μ g/mL、100 μ g/mL的Koumine预作用于IPEC-J2 细胞 1 h之后,Koumine能够在一定程度上拮抗LPS引发的IPEC-J2细胞活率的下降,缓解LPS对IPEC-J2细胞形态的影响;降低细胞内的MDA、LDH的含量;有效的提高CAT、SOD的活性;降低细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-6的含量;降低IPEC-J2细胞中TNF-α,IL-6和IL-1βmRNA的表达;增加ZO-1、Ocdudin和Claudin-1 mRNA和蛋白的表达。结论:Koumine在一定的浓度范围对IPEC-J2细胞无毒副作用,能提高IPEC-J2细胞的活力,能够缓解LPS对IPEC-J2细胞活力及形态的影响;能提高IPEC-J2细胞的抗炎、抗氧化作用;并且能在一定程度上减少LPS所造成的肠道屏障功能损伤,进而维持动物肠道正常功能。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2018-06-01）
王洁[8]（2018）在《基于SPR技术分析钩吻素子与TSPO结合的亲和力及其增强TSPO正位配体与TSPO的亲和力的研究》一文中研究指出钩吻素子具有重大新药开发价值,但其作用靶点以及作用方式有待研究。转运蛋白(18 kDa)[translocator protein(18 kDa),TSPO],有望成为治疗神经精神疾病等疾病重要的药物作用靶点。本课题组先前和同期研究提示,钩吻素子对TSPO可能存在正性别构调节作用,但有待于论证。近年来,人们日益重视免标记的生物分子间相互作用技术的应用,其中表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术作为一种新型的免标记、实时在线研究生物分子间相互作用的高灵敏传感技术,可实时动态分析药物对膜蛋白的亲和力和相互作用的动力学变化,已应用于别构调节的研究,与放射配体结合分析法可相互印证,并弥补后者需要同位素标记的内源性配体的局限性。鉴此,本文首先采用分子对接分析TSPO与钩吻素子是否存在结合的可能。在此基础上,建立SPR技术,检测钩吻素子与TSPO结合的亲和力,探索钩吻素子能否增强TSPO正位配体与人源TSPO重组蛋白、鼠源TSPO重组蛋白的亲和力,从化学生物学角度进一步论证钩吻素子对TSPO存在别构调节。主要研究内容如下:1.分子对接分别计算PK11195、钩吻素子与TSPO的亲和力基于分子对接技术,用AutoDock程序计算TSPO与其配体PK11195亲和力大小。分子对接技术结果显示,配体PK11195与TSPO亲和力57.31μM,主要通过范德化力、疏水作用进入蛋白的活性中,活性中心处的PRO18,ALA19,THR20,THR21,GLY22,ALA23,LEU25,LYS26,PRO27,ARG43,TRP44,PHE46,PRO47,TRP50,THR51,THR54,PHE92等氨基酸与PK11195相互作用。钩吻素子与TSPO亲和力为25.34μM,主要通过范德化力、疏水作用进入蛋白的活性中,TSPO活性中心处的GLY22,ALA23,LEU24,LEU25,LYS26,PRO27,ARG43,TRP44,PHE46,PRO47,TRP50,PHE92等氨基酸与钩吻素子相互作用。2.钩吻素子对人源TSPO重组蛋白与其正位配体亲和力的影响2.1钩吻素子及TSPO正位配体与人源TSPO重组蛋白的亲和力采用SPR技术,通过在CM5芯片上氨基偶联人源TSPO重组蛋白,测得TSPO外源性配体PK11195、外源性配体Ro5-4864、内源性配体PPIX与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值分别为199.77±0.12μM、176.93±2.70μM、156.93±5.50μM,进一步检测钩吻素子与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值为155.33±11.0μM。2.2测定钩吻素子对人源TSPO重组蛋白与其正位配体亲和力的影响分别依次测定运行缓冲液中含有10~(-11)、10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)、10~(-4)、10~-33 M钩吻素子时,浓度为0.1 K_D值即20.0μM PK11195、17.7μM Ro5-4864、15.7μM原卟啉IX二钠盐流过蛋白固定通道和参比通道时的响应信号。结果显示当钩吻素子浓度分别为10~(-5)、10~(-7)与10~(-6) M时,PK11195、Ro5-4864及PPIX与TSPO相互作用的响应值达到最大值。采用多循环动力学检测在10~(-5) M钩吻素子存在的条件下,PK11195与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值为95.27±0.62μM,对比运行缓冲液不含钩吻素子的PK11195与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值,钩吻素子能够明显增强PK11195与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值,有统计学意义(P<0.001);10~-77 M钩吻素子存在的条件下,Ro5-4864与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值为77.73±0.87μM。对比运行缓冲液不含钩吻素子的Ro5-4864与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值,钩吻素子能够明显增强Ro5-4864与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值,有统计学意义(P<0.001);10~-66 M钩吻素子存在的条件下,测得PPIX与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值为66.07±3.32μM。对比运行缓冲液不含钩吻素子的PPIX与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值,钩吻素子能够明显增强PPIX与人源TSPO重组蛋白结合的K_D值,有统计学意义(P<0.001)。3.钩吻素子对鼠源TSPO重组蛋白与其正位配体亲和力的影响3.1钩吻素子及TSPO正位配体与鼠源TSPO重组蛋白的亲和力通过原核表达获得鼠源TSPO重组蛋白,经Ni~(2+)亲和色谱柱纯化蛋白并通过Western blot对蛋白进行初步表征。利用SPR技术,通过捕获带有His标签的鼠源TSPO重组蛋白来固定蛋白。测定TSPO外源性配体PK11195、TSPO外源性配体Ro5-4864、TSPO内源性配体PPIX与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值分别为161.33±6.1μM、169.75±6.07μM、95.85±4.36μM,进一步检测钩吻素子与鼠源重组TSPO蛋白结合的K_D值为97.37±1.76μM。3.2测定钩吻素子对鼠源TSPO重组蛋白与其正位配体亲和力的影响分别依次测定运行缓冲液中含有10~(-11)、10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)、10~(-4)、10~-33 M钩吻素子时,浓度为0.1K_D值即16.1μM PK11195、17.0μM Ro5-4864、9.6μM原卟啉IX二钠盐流过鼠源TSPO重组蛋白固定通道和参比通道时响应信号。结果显示当钩吻素子浓度分别为10~(-7)、10~(-6)与10~-77 M时,PK11195、Ro5-4864及PPIX与鼠源TSPO重组蛋白相互作用的响应值达到最大值。采用多循环动力学检测在10~(-7) M钩吻素子存在的条件下,PK11195与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值为95.32±1.80μM,对比运行缓冲液不含钩吻素子的PK11195与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值,钩吻素子能够明显增强PK11195与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值,有统计学意义(P<0.001);10~(-6)M钩吻素子存在的条件下,Ro5-4864与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值为67.68±11.09μM。对比运行缓冲液不含钩吻素子的Ro5-4864与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值,钩吻素子能够明显增强Ro5-4864与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值,有统计学意义(P<0.001);10~-77 M钩吻素子存在的条件下,测得PPIX与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值为39.87±3.87μM。对比运行缓冲液不含钩吻素子的PPIX与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值,钩吻素子能够明显增强PPIX与鼠源TSPO重组蛋白结合的K_D值,有统计学意义(P<0.001)。4.钩吻素子对TSPO正位配体与鼠源TSPO脂蛋白体亲和力的影响结合相关文献,我们首次利用SPR技术,采用芯片表面重构的方法研究PK11195及钩吻素子与鼠源TSPO脂蛋白体亲和力。测得PK11195与鼠源TSPO重组蛋白的K_D值为8.04±1.42 nM,进而检测钩吻素子与鼠源TSPO重组蛋白的K_D值为0.61±0.11 nM。后期工作将用表面重构法继续测定钩吻素子对于TSPO正位配体与TSPO亲和力的影响。本文研究结果提示,可用SPR技术检测钩吻素子以及TSPO正位配体与TSPO结合的亲和力,分析钩吻素子对TSPO正位配体与TSPO蛋白亲和力的影响;钩吻素子可显着增强TSPO正位配体PK11195、Ro5-4864或PPIX与TSPO的亲和力,提示钩吻素子对TSPO存在正性别构调节。(本文来源于《福建医科大学》期刊2018-06-01）
方梦寒[9]（2018）在《钩吻素子对小鼠原代培养脾细胞活化增殖、Th细胞极化偏移及其TSPO表达的调节作用》一文中研究指出类风湿关节炎(RA)是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜病变为主的免疫系统疾病,目前临床上尚不能有效根治。抗原依赖性CD4~+T淋巴细胞的过度活化增殖和极化偏移被认为是RA发病机制中的关键环节,通过调节体内Th1/Th2细胞或Th17/Treg细胞的平衡可调节机体免疫状态,并实现对RA的发病及病情恶化的控制。钩吻素子是中国钩吻生物碱单体中含量最高的一种有效成分,课题组前期工作在钩吻素子抗RA及其作用机制的研究中,在整体动物水平发现钩吻素子可显着抑制RA模型动物脾脏Th1/Th2、Th17/Treg细胞及血清相关细胞因子的异常升高,提示其对Th细胞的极化偏移可能具有调节作用,进一步的研究发现,钩吻素子对Th细胞极化偏移起始阶段免疫细胞增殖具有显着抑制作用,但其对Th细胞极化偏移调节作用还需要进一步研究确证,其作用机制尤其是作用靶点和作用方式还不明确,有待于深入研究探索。此外,课题组前期研究发现,线粒体18 kDa转位蛋白(TSPO)是钩吻素子重要的体内作用靶点,但其是否有钩吻素子抗RA效应有关以及其在Th细胞极化偏移时的表达情况尚不明确。鉴此,本文首先在原代培养小鼠脾细胞中探明钩吻素子对T细胞活化增殖及细胞周期的影响,进而在离体细胞水平验证钩吻素子对Th细胞极化偏移的调节作用,最后观察TSPO在Th细胞极化偏移时的表达情况以及钩吻素子对其表达的影响。本研究将有助于进一步阐明钩吻素子治疗RA的分子机制,为钩吻素子有望开发为治疗RA新药提供依据。1钩吻素子对小鼠T细胞活化增殖的抑制作用1.1钩吻素子对混合淋巴细胞诱导的小鼠脾细胞增殖的抑制作用制备健康BALB/c小鼠脾脏细胞悬液,使用丝裂霉素C处理作为供体刺激细胞,同时制备健康C57BL/6小鼠脾脏细胞悬液作为受体应答细胞,在此基础上给予钩吻素子(4、0.8、0.16、0.032 mmol/L)共培养48 h,观察其对混合培养淋巴细胞增殖的抑制作用,结果显示钩吻素子可呈浓度依赖性抑制混合培养淋巴细胞的增殖,IC_(50)为1.448 mmol/L。1.2钩吻素子对抗CD3/CD28抗体诱导小鼠初始T细胞增殖的抑制作用为观察钩吻素子对T细胞受体(TCR)交联诱导的初始T细胞增殖是否具有抑制作用,以竞争性TCR抗体刺激T细胞模拟TCR/CD3+CD28共刺激信号诱导初始T细胞活化。提取正常BALB/c小鼠脾细胞并以免疫磁珠纯化获得初始T细胞,与抗CD3及抗CD28抗体共培养96 h后,加入梯度浓度的钩吻素子(15、3、0.6、0.12、0.024、0.0048 mmol/L)继续培养48 h,以BrdU掺入法检测细胞增殖情况。结果提示抗CD3+抗CD28抗体可有效诱导初始T细胞增殖;钩吻素子可显着抑制抗CD3+抗CD28抗体诱导的初始T细胞增殖,作用呈剂量依赖性IC_(50)为3.253 mmol/L,与钩吻素子对混合淋巴细胞反应抑制作用的IC_(50)水平均接近钩吻素子细胞毒性水平,综合二者表现,提示钩吻素子对T细胞活化的第1信号与第2信号具有一定抑制作用,但其作用较弱,可能不是钩吻素子抑制T细胞活化增殖的主要作用环节。1.3钩吻素子对伴刀豆蛋白A(Con A)诱导小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用为进一步探明钩吻素子对Con A诱导小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用,制备正常BALB/c小鼠脾细胞悬液,利用荧光染料CFSE处理后接种于96孔细胞培养板,加入Con A诱导细胞增殖,同时加入梯度浓度的钩吻素子(5000、1250、312.5、78.125、19.531、4.883μmol/mL)共培养48 h,以荧光标记的抗CD3 APC抗体标记后,流式细胞术检测荧光信号。在Con A诱导增殖的小鼠脾细胞中给予钩吻素子处理,结果发现随着钩吻素子剂量增加,CFSE法检测获得的荧光信号图中增殖峰的数量逐渐减少,提示钩吻素子可显着抑制Con A诱导的小鼠脾脏淋巴细胞细胞增殖,与课题组前期以BrdU掺入法检测钩吻素子对Con A诱导小鼠脾细胞增殖的抑制作用结果相一致。1.4钩吻素子对Con A诱导小鼠脾细胞增殖周期的影响制备BALB/c小鼠脾细胞悬液以Con A诱导增殖,同时给予梯度浓度的钩吻素子(93.75、187.5、375μmol/L)共培养48 h后PI染色,流式细胞仪检测。肉眼观察各处理组G0/G1期信号峰形状相似,而S期信号峰则出现随着钩吻素子浓度增加而上抬的趋势,G2/M期信号峰的变化趋势则与之相反。根据细胞周期G0/G1-S-G2/M期进程中各期细胞相对数量的改变,上述结果提示钩吻素子可呈浓度依赖性阻滞Con A诱导小鼠脾细胞增殖的细胞周期进程,使其阻滞于S期。2钩吻素子对离体水平诱导Th细胞极化偏移的调节作用制备小鼠脾悬液,在体外与Con A共培养,同时加入梯度浓度的钩吻素子(20000、5000、1250、312.5、78.125、19.531、4.883μg/mL),连续培养48 h后,用BD公司的小鼠Th1/Th2/Th17 CBA试剂盒处理,流式细胞仪FACSVerse检测,FCAP软件数据读取,根据拟合的标准曲线,将检测结果代入换算获得炎症细胞因子表达水平。结果显示与对照组比较,模型组IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-4的信号出现向右偏移,提示在Con A诱导下IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-4出现高表达趋势。而钩吻素子处理组与模型组比较,其信号偏移随着钩吻素子浓度增大而呈现不同程度恢复性改变。将测得值代入标准曲线获得各组细胞因子表达水平,钩吻素子对Con A诱导小鼠脾细胞IL-17A、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-4、IL-10及IL-2细胞因子表达水平的改变均呈现不同程度抑制效应。钩吻素子对模型组IFN-γ/IL-4比值的升高具有显着抑制作用,提示其对离体水平诱导的Th1/Th2细胞的极化偏移具有调节作用。钩吻素子可显着降低模型组细胞IL-17A的表达水平,提示其可抑制Th0细胞向Th17细胞的极化,以IL-17A/IL-10比值衡量Th17/Treg细胞相对关系,钩吻素子亦可显着抑制模型组IL-17A/IL-10比值的升高,提示钩吻素子对离体水平诱导Th17/Treg细胞的极化偏移也具有调节作用。此外,钩吻素子对Con A诱导小鼠脾细胞促炎细胞因子TNF-α及IL-6表达水平的升高也呈现显着抑制作用。而在Con A模型组表达水平降低的IL-10与IL-2,给予钩吻素子处理后,高浓度钩吻素子处理组IL-10(1.25-20 mmol/L钩吻素子)与IL-2(0.3125-20 mmol/L钩吻素子)水平均未呈现显着性改变,与Con A模型组比较均无显着性差异,但低浓度钩吻素子处理组可显着升高IL-10(4.88-312.5μmol/L钩吻素子)与IL-2(4.88-78.13μmol/L钩吻素子)的表达。因此综合课题组前期在整体动物水平观察到的实验结果,可确证钩吻素子对Th1/Th2、Th17/Treg细胞极化偏移具有显着调节作用,可恢复RA发病时Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群及其下游致炎/抗炎细胞因子之间的平衡状态而发挥对RA的治疗效应。3钩吻素子处理下调TSPO在Th细胞极化偏移时的表达制备小鼠脾细胞悬液,接种于含Con A及10%血清的RPMI 1640培养基,在接种时分别给予终浓度为500、50μmol/L钩吻素子处理,同时设置培养液仅含10%血清的RPMI 1640培养基为对照组和不含血清RPMI 1640培养基的空白组,经过48 h连续培养后提取各组细胞总蛋白。结果显示,接种于含10%血清RPMI 1640培养基中的小鼠脾细胞TSPO表达水平显着高于空白组,而Con A诱导模型组TSPO的表达量则出现进一步的升高,显着高于空白组和对照组。Con A模型钩吻素子处理组脾细胞β-actin蛋白表达水平与其他组接近,而TSPO表达水平则均出现显着性抑制,显着低于Con A模型组和对照组。提示TSPO在Th细胞极化偏移时高表达,钩吻素子处理后其表达水平下调,该结果支持钩吻素子的抗炎效应,但钩吻素子在调节Th细胞极化时TSPO表达的下调究竟来源于钩吻素子的直接作用还是继发于钩吻素子抗炎作用,还需要进一步研究阐明。上述结果提示1.钩吻素子对免疫细胞的活化增殖具有显着抑制作用,可使细胞周期停滞于S期,其对抗原依赖性T细胞活化起始阶段TCR识别抗原的第1信号与第2信号也具有一定抑制作用;2.钩吻素子对Th细胞极化偏移具有显着调节作用,可恢复Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群及其下游致炎/抗炎细胞因子之间的平衡状态;3.钩吻素子在Th细胞极化偏移时可使TSPO表达水平出现下调。(本文来源于《福建医科大学》期刊2018-05-01）
洪丽绵[10]（2018）在《钩吻素子抗糖尿病大鼠神经病理性疼痛作用与其抑制脊髓小胶质细胞M1极化的关联机制》一文中研究指出近几十年来中国乃至全球糖尿病患病率迅速增加,糖尿病及其并发症是造成患者死亡的最主要原因之一,严重威胁人类健康。糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)是糖尿病的严重并发症之一,属于慢性疼痛。现有的医疗手段对于DNP不仅很难治愈,还有较大的副作用,所以亟待开发新型有效副作用少的治疗药物。钩吻素子(koumine,KM)为药用植物钩吻(Gelsemium elegans)中含量最高的吲哚生物碱成分,本课题组研究发现钩吻素子具有高效低毒抗DNP作用。为了深入探索钩吻素子抗DNP的作用靶标与作用途径,本研究在链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的大鼠DNP模型上,观察钩吻素子抗DNP的作用与其抑制脊髓小胶质细胞M1极化的关联规律;进而阐释钩吻素子抑制小胶质细胞M1极化作用的分子机制,明确其作用的分子通路以及关键效应分子。主要研究内容如下:本文采用单次腹腔注射STZ溶液(70 mg/kg)建立SD大鼠Ⅰ型DNP模型,研究发现灌胃给予钩吻素子可以显着减轻糖尿病大鼠的机械痛敏,提示钩吻素子具有显着的抗DNP的作用,并具有剂量依赖性。为了进一步探究钩吻素子抗大鼠DNP的作用是否与小胶质细胞活化及M1极化有关,而干扰素调节因子8(Interferon Regulatory Factor 8,IRF8)是调控小胶质细胞极化(激活态)的关键效应分子,因此本文运用RT-q PCR和western blot方法来检测大鼠脊髓小胶质细胞IRF8、小胶质细胞活化标志物iba-1及M1极化标志物CD86、CD68、TNF-α和IL-1β等m RNA和蛋白的表达水平,结果发现,钩吻素子可能通过下调IRF8的表达而抑制小胶质细胞M1极化,降低致炎细胞因子CD86、CD68、TNF-α、IL-1β等的表达,从而抗DNP。Jagged 1是Notch受体的重要配体之一,Jagged 1与Notch受体水平结合并激活Notch信号通路。为了探索钩吻素子抗DNP的作用是否通过调控Notch信号通路实现,本研究在大鼠Ⅰ型DNP模型上,以动物痛阈为指标,观察脊髓鞘内注射Jagged 1对灌胃给予钩吻素子镇痛作用的可能拮抗作用。结果发现,钩吻素子可以抑制STZ诱导的DNP,但给予Jagged 1激活Notch信号通路后可拮抗钩吻素子的抗DNP效应,使痛敏增加,提示钩吻素子抗DNP的作用可能与其调控Notch信号通路有关。在此基础上,采用RT-q PCR和western blot方法来检测大鼠脊髓小胶质细胞IRF8、小胶质细胞活化标志物iba-1及M1极化标志物CD86、CD68、TNF-α和IL-1β等的表达水平,结果观察到,与STZ+PBS+KM组相比,STZ+Jagged 1+KM组的IRF8、iba-1、CD86、CD68、TNF-α和IL-1β表达显著增加,表明脊髓鞘内给予Jagged 1可以拮抗钩吻素子的效应,表现为脊髓小胶质细胞IRF8上调,小胶质细胞M1极化增强,致炎细胞因子表达增加,痛敏加剧。综上,本文研究结果提示,钩吻素子对大鼠糖尿病神经病理性疼痛具有显着的镇痛作用;钩吻素子可能通过Notch信号通路下调IRF8的表达,进而抑制脊髓小胶质细胞M1极化,从而降低致炎细胞因子的表达,发挥抗糖尿病神经病理性疼痛的作用。(本文来源于《福建医科大学》期刊2018-05-01）
钩吻素子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨钩吻素子(koumine)对H_2O_2诱导的猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)损伤的保护作用及其机制。方法:通过MTT法检测koumine对IPEC-J2细胞增殖的影响,并用H_2O_2诱导IPEC-J2细胞建立细胞损伤模型,通过MTT和LDH比色法检测分析koumine保护IPEC-J2细胞免受H_2O_2损伤的效果;生化方法检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹(western blot)技术检测凋亡相关蛋白bax和bcl-2的表达情况;用流式细胞仪检测氧自由基(ROS)释放量和细胞凋亡率。结果:检测浓度范围内koumine对IPEC-J2细胞没有毒性;koumine可以通过调控IPEC-J2细胞中SOD活性、LDH漏出率、MDA水平和ROS的产生,保护H_2O_2对IPEC-J2细胞的氧化损伤,抑制H_2O_2引起的IPEC-J2细胞凋亡;koumine在抑制H_2O_2引起的细胞凋亡过程中,减少了促凋亡蛋白Bax表达,增加了抑凋亡蛋白Bcl-2表达,使得Bax/Bcl-2的比值在药物作用时随剂量的增加逐渐降低。结论:koumine能够保护IPEC-J2细胞对抗H_2O_2诱导的氧化损伤,具有一定的时间和剂量依赖关系,其作用机制与抑制细胞凋亡有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
钩吻素子论文参考文献
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