河南省猪源大肠杆菌耐药性调查及部分耐药基因分布特征研究

论文摘要

大肠杆菌病是猪群中常见多发的细菌性疾病,是严重危害仔猪安全的重要传染病之一,目前防治该病的主要手段是使用抗生素,因此导致耐药现象越来越严重。大肠杆菌是人与动物的重要共生病原菌,动物源耐药菌的大量出现与广泛流行,不仅严重影响到畜禽养殖业的持续健康发展,而且严重威胁动物性食品安全和人类健康。为指导临床科学选用抗生素,迫切需要对河南地区大肠杆菌临床耐药性进行监测,尤其是对氟苯尼考、头孢噻呋、粘杆菌素的主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1分布特征进行研究。因此,本文开展了河南省猪源大肠杆菌耐药性调查研究。1.本课题对2013年～2018年分离的856株猪源大肠杆菌进行了 8类13种抗菌药物的药物敏感性试验。结果显示,所有菌株均有不同程度的耐药,且对四环素、多西环素、磺胺异恶唑、复方新诺明、氨苄西林一直保持较高的耐药率（90%左右）;对其他药物耐药率依次为:氟苯尼考（79.8%）、大观霉素（74.8%）、恩诺沙星（45.6%）、氧氟沙星（32.2%）、粘杆菌素（31.1%）、阿莫西林/棒酸（30.0%）、庆大霉素（25.5%）、头孢噻呋（15.5%）;对粘杆菌素的耐药率从2013年～2015年持续增高,到2015年达到最高（56.6%）,2015年之后开始下降直到2018年的0%。2.建立了猪源大肠杆菌中对临床常用药物氟苯尼考、头孢噻呋、粘杆菌素的主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的多重PCR检测方法。通过对多重PCR体系的引物及退火温度等参数的优化,并考察了方法的灵敏度、特异性和重复性等。该方法的灵敏度为1.46× 105 CFU/mL,并且具有较高的特异性和稳定性,与单重PCR的符合率在98%左右,与传统的单重PCR相比,该多重PCR技术快速高效实用性强,为检测大肠杆菌临床常用药的耐药基因提供了新的技术手段。3.利用所建立的多重PCR检测方法,对分离的856株大肠杆菌主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1进行检测。结果显示,floR基因检出率为67.9%（581/856）,其中郑州72.3%、开封84.9%、许昌82.3%、焦作48.5%;CTX-M基因检出率为8.4%（72/856）,其中郑州2.1%、焦作6.3%、开封16.5%、许昌15.7%;mcr-1基因检出率为27.6%（236/856）,其中郑州10.2%、焦作7.2%、开封45.6%、许昌43.8%。对不同地域用药习惯对大肠杆菌耐药基因分布和流行影响进行了分析研究,探明了不同地域用药习惯对耐药基因的分布和流行所产生的影响。通过本课题的研究,调查了 2013年～2018年河南省猪源大肠杆菌临床耐药情况,建立了猪源大肠杆菌分别对氟苯尼考、头孢噻呋、粘杆菌素主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的多重PCR检测方法,初步掌握了河南省猪源大肠杆菌floR、CTX-M、mcr-1基因的分布特征,将对猪源大肠杆菌耐药性风险评估和临床科学用药提供参考,进而为保障食品安全、公共卫生安全和生态环境安全提供技术支撑。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 第一章 综述
•   1 大肠杆菌概述
•     1.1 病原学
•     1.2 流行病学
•     1.3 临床症状
•     1.4 致病性
•   2 猪源大肠杆菌耐药性研究进展
•     2.1 耐药现状
•     2.2 多重耐药现状
•   3 猪源大肠杆菌耐药基因的研究进展
•     3.1 耐药基因floR的研究进展
•     3.2 耐药基因CTX-M的研究进展
•     3.3 耐药基因mcr-1的研究进展
•   4 细菌耐药性检测方法研究进展
•   5 细菌耐药性的危害
•   6 研究目的意义
• 第二章 河南省猪源大肠杆菌的临床耐药性调查
•   1 引言
•   2 材料与方法
•     2.1 材料
•       2.1.1 样本
•       2.1.2 标准菌株
•       2.1.3 试剂
•       2.1.4 主要仪器设备
•     2.2 方法
•       2.2.1 样本采集
•       2.2.2 预增菌
•       2.2.3 大肠杆菌分离纯化
•       2.2.4 大肠杆菌鉴定
•       2.2.5 微量肉汤稀释法抗菌药物敏感性实验
•   3 结果与分析
•     3.1 大肠杆菌分离鉴定结果
•     3.2 大肠杆菌分离株的耐药率
•       3.2.1 同一年份不同地区大肠杆菌的耐药率
•       3.2.2 不同年份同一地区大肠杆菌的耐药率
•     3.3 大肠杆菌的耐药谱
•       3.3.1 2013年大肠杆菌耐药谱
•       3.3.2 2014年大肠杆菌耐药谱
•       3.3.3 2015年大肠杆菌耐药谱
•       3.3.4 2016年大肠杆菌耐药谱
•       3.3.5 2017年大肠杆菌耐药谱
•       3.3.6 2018年大肠杆菌耐药谱
•     3.4 大肠杆菌的多重耐药情况
•   4 讨论
•     4.1 猪源大肠杆菌对常用抗菌药的耐药率
•     4.2 猪源大肠杆菌的耐药谱和多重耐药情况
•     4.3 猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药临床表型特征
•     4.4 猪源大肠杆菌头孢噻呋耐药临床表型特征
•     4.5 猪源大肠杆菌粘杆菌素耐药临床表型特征
•   5 小结
• 第三章 猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1多重PCR检测方法的建立
•   1 引言
•   2 材料与方法
•     2.1 材料
•       2.1.1 菌株
•       2.1.2 试剂
•       2.1.3 主要仪器设备
•     2.2 方法
•       2.2.1 引物设计
•       2.2.2 大肠杆菌模板DNA的制备
•       2.2.3 单基因PCR的扩增及测序
•       2.2.4 多重PCR方法的建立
•       2.2.5 多重PCR方法的验证
•   3 结果与分析
•     3.1 单基因PCR扩增和测序结果
•     3.2 多重PCR方法条件优化
•       3.2.1 引物浓度优化结果
•       3.2.2 退火温度优化结果
•       3.2.3 循环次数优化结果
•     3.3 多重PCR方法验证
•       3.3.1 多重PCR特异性实验结果
•       3.3.2 多重PCR敏感性实验结果
•       3.3.3 多重PCR灵敏度实验结果
•       3.3.4 多重PCR重复性实验结果
•       3.3.5 多重PCR符合性实验结果
•   4 讨论
•   5 小结
• 第四章 河南省猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的分子流行病学调查
•   1 引言
•   2 材料与方法
•     2.1 材料
•       2.1.1 菌株
•       2.1.2 试剂
•       2.1.3 主要仪器设备
•     2.2 方法
•       2.2.1 细菌培养
•       2.2.2 模板DNA的制备
•       2.2.3 耐药基因的检测
•   3 结果与分析
•     3.1 耐药基因的PCR检出结果
•     3.2 耐药基因的分子流行病学分析
•       3.2.1 同一年份不同地区大肠杆菌的耐药基因检出率
•       3.2.2 不同年份同一地区大肠杆菌的耐药基因分析
•       3.2.3 耐药基因与耐药表型相关性分析
•   4 讨论
•   5 小结
• 全文结论
• 参考文献
• ABSTRACT

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李孟

导师: 吴志明

关键词: 大肠杆菌,耐药性,分布特征

来源: 河南农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学

分类号: S852.61

DOI: 10.27117/d.cnki.ghenu.2019.000413

总页数: 65

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