黄色色素生物合成论文_贾素娟

导读:本文包含了黄色色素生物合成论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:质体,霉素,色素,黄色,生物,论文,拟无枝酸菌。

黄色色素生物合成论文文献综述

贾素娟^[1]（2004）在《东方拟无枝酸菌HCCB10007遗传操作系统建立及黄色色素生物合成基因功能研究》一文中研究指出20世纪80年代首次报道发现对万古霉素耐药的肠球菌以来,万古霉素耐药肠球菌的出现呈增长趋势,同时也引发了人们对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌最终会产生对万古霉素耐药的担心。基于这种状况,开发治疗耐药菌所引起感染的新型糖肽类抗生素势在必行。随着对万古霉素等糖肽类抗生素生物合成的了解,对产生菌染色体上的基因进行改造将是产生新化合物的有效途径之一。遗传操作系统的建立则是进行基因改造的前提。通过对东方拟无枝酸菌HCCB10007原生质体制备、再生及质粒DNA转化等条件进行了探索,结果表明用含2%甘氨酸的TSB培养菌丝体。在28℃下经1mg/ml溶菌酶处理30min,原生质体形成达1.58×10~7/ml,原生质体再生率为2.5%。将地中海拟无枝酸菌-大肠埃希菌间带有安普霉素抗性基因的穿梭质粒,通过PEG介导转化东方拟无枝酸菌HCCB10007原生质体,PCR鉴定结果表明转化成功。东方拟无枝酸菌HCCB10007 DNA转化系统的建立,为基因中断/置换的进行奠定了基础。通过将安普霉素抗性基因插入到gtfE中从而构建了具有不同长度同源交换臂的gtfE基因破坏质粒。所构建质粒能够导入东方拟无枝酸菌HCCB10007原生质体中,但不能发生有效的同源交换从而得到基因破坏子,推测同源交换臂长度不够。从东方拟无枝酸菌HCCB10007中克隆了gtfE基因上游相邻的gtfD基因。该基因的获得可用于增长构建基因破坏质粒时同源区段的长度。同时也为基因中断系统建立后,进行基因改造提供了一个重要的靶点。链霉菌能产生包括抗生素、免疫调节剂等多种多样的次级代谢产物,并且具有复杂的形态变化。这些特点使其成为工业生产中的重要菌种和研究原核生物多细胞分化的模式菌株。链霉菌中的对形态分化和次级代谢的一些调节反应受到共同的基因或代谢物的调节,灰色链霉菌中的A因子(2-辛酰-3R-羟甲基γ-丁内酯)就是作为形态分化和次级代谢的“控制开关”。灰色链霉菌中黄色色素grixzone的产生也受到A因子的调控。为了搞清该色素的生物合成途径及受A因子的调控机制,对黄色色素grixazone生物合成途径中的griA、griB及griJ进行了研究: 利用质粒载体pUC19分别构建了将基因进行框内删除失活的griA及卡那霉素插入失活的griB,并都采用卡那霉素作为选择标记的重组质粒pUC-ΔgriA-Km~r和pUC-ΔgriB: :Km~r。经PEG介导将质粒分别导入S. griseus IFO13350的原生质体。通过同源交换并经Southern杂交验证得到了基因型正确的基因破坏子。griA基因破坏子子仍能产生grixazone,表明griA基因在Grixazone生物合成中有一定的作用并非所必需的基因。griB基因破坏子不能产生grixazone,利用E. coli-Streptomyces穿梭质粒pKU209构建griB基因互补质粒,实验结果上海医药工业研究院博士学位论文摘要表明ghxazone的产生能力部分恢复,进一步确定grl’B基因破坏子不能产生Grixazone是由于griB基因被破坏所致。综合基因破坏实验,同源搜索及结构预测的结果,推测GriB为一种转运蛋白。以质粒puc19作为载体连接分别含有gr口基因5’端和3’端的两DNA片段构建变异的岁口等位基因,并连接卡那霉素基因片段作为选择标记,从而构建了用于gr汀破坏的重组质粒PUC一△ghJ.Kmr,转化5. griseus IFO13350的原生质体,通过二次同源单交换得到了经southem杂交分析基因型正确,表型为卡那霉素敏感的gr口基因破坏子。该基因破坏子不能产生ghxazone。基因互补实验结果表明ghxazone的产生能力部分恢复,进一步确定岁口基因破坏子不能产生ghxazone是由于岁口基因被破坏所致。利用质粒pET-26b(+)构建了在T7启动子控制下,带有His一tag编码基因的『“基因表达质粒pET26一ghJ、 pET26一ghjap。利用质粒pucls构建了在Plac启动子控制下,含有以质粒pET26一ghJ为模板经PcR扩增获得的含有岁口序列和His一tag编码基因片段的重组质粒pUC18一ghJ、pUc18一ghjap。经过同源搜索发现,岁汀基因所编码的蛋白来源于细菌的天冬氨酸激酶有很高的同源性。将重组质粒pUc18一ghJ转化天冬氨酸激酶缺陷菌株E. coli GT3,发现转化子可以在基本培养基中生长,证明了GriJ具有天冬氨酸激酶活。关健词:东方拟无枝酸菌HCCB10O07;万古霉素;原生质体;转化;基因破坏;灰色链霉菌;A因子;黄色色素:生物合成(本文来源于《上海医药工业研究院》期刊2004-08-01）