犬左室三层细胞的分离和电生理记录

犬左室三层细胞的分离和电生理记录

论文摘要

目的探讨分离耐钙犬左室三层细胞的方法,并利用全细胞膜片钳技术进行电生理记录。方法采用改良的Langendorff灌流装置,经主动脉左冠窦插管灌流带有左室前降支的犬心肌组织块,分离出单个耐钙心室肌细胞。先根据解剖部位将心室肌细胞分为内、中、外三层;再采用全细胞膜片钳技术,在电流钳模式下,各层随机选取8个细胞记录动作电位(AP)、快激活延迟整流钾电流(IKr)、慢激活延迟整流钾电流(IKs)、晚钠电流(INa-L),分析三层的心室肌细胞的电生理特性。结果分离状态良好的单个心室肌细胞率为90%以上,呈杆状,表面光滑,横纹清晰,边缘锐利,静止不动;内层(Endo)心室肌细胞没有尖峰-圆顶样形态,动作电位复极90%的时程(APD90)最短;中层(Mid)心室肌细胞也有尖峰-圆顶样形态,但不如外层(Epi)细胞明显,APD90最长;Epi心室肌细胞有明显的尖峰-圆顶样形态,APD90介于Mid与Endo之间。在-30 mV电压下,Mid细胞INa-L电流密度较Endo、Epi的电流密度稍大,但无统计学差异;三层细胞IKr的电流密度无明显差异;Mid细胞的IKs的电流密度在三层心肌细胞中最小,Endo、Epi中无明显差异。结论该方法更加易于操作,节约实验成本和时间,分离的细胞数量多、活性高;结合解剖部位和电生理特点,能有效鉴别各层心室肌细胞;成功分离出细胞,可用于离子通道特性的研究。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验动物
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 溶液配制 (单位:mmol/L)
  •   1.4 器械和仪器
  •   1.5 实验方法
  •     1.5.1 准备
  •     1.5.2 获取犬左室灌流组织块和单个心室肌细胞
  •     1.5.3 全细胞膜片钳技术
  •   1.6 数据测量和统计分析
  • 2 结果
  •   2.1 心室肌细胞的分离情况
  •   2.2 三层心肌细胞AP比较
  •   2.3 三层心肌细胞的INa-L、IKr、IKs
  • 4 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 纪荣静,赵永辉,藏小彪,张静,王现青,马继芳,宋卫峰

    关键词: 电生理学,心室肌细胞,分离,膜片钳

    来源: 中国心脏起搏与心电生理杂志 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 锦州医科大学河南省人民医院规培基地临床医学-心血管内科,华中阜外医院

    基金: 国家自然科学基金(项目编号:U1504802)

    分类号: R329.2

    DOI: 10.13333/j.cnki.cjcpe.2019.04.011

    页码: 333-338

    总页数: 6

    文件大小: 3791K

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