导读:本文包含了多房棘球绦虫基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:泡型包虫病,多房棘球绦虫,免疫诊断,硫氧还蛋白过氧化物酶
多房棘球绦虫基因论文文献综述
孙立,林仁勇,房彬彬,李亮,毕晓娟[1]（2019）在《多房棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及其免疫诊断价值初步评价》一文中研究指出目的克隆多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase, TPx)基因,构建原核表达载体,诱导表达EmTPx蛋白,并初步评价其免疫诊断价值。方法从沙鼠中分离多房棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,采用RT-PCR方法获取EmTPx的cDNA片段,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-EmTPx,转化大肠埃希菌BL21进行目的蛋白的诱导表达及纯化,免疫小鼠制备抗EmTPx重组蛋白(rEmTPx)的多抗血清。通过Western blot对rEmTPx的免疫学特性进行鉴定,通过间接ELISA试验评价其免疫诊断价值。结果 PCR扩增EmTPx基因片段长度为582 bp,测序证实重组表达质粒pET-28a-EmTPx构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为26×10~3,与理论值相符。Western blot显示该蛋白可被鼠抗rEmTPx多抗血清识别,以rEmTPx为抗原采用间接ELISA法检测AE患者血清,特异抗体的敏感性为66.2%,特异性为87.5%。结论成功构建了pET28a-EmTPx原核表达载体,表达蛋白具有Em原头蚴天然TPx的生物学功能表位,且具有一定的免疫学诊断价值,可作为AE血清学诊断的候选靶抗原。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年06期）
王芬,赵明才,胡容,王洁,王明霞[2]（2019）在《多房棘球绦虫severin基因过表达慢病毒载体的构建及对人正常肝细胞侵袭、迁移能力的影响》一文中研究指出目的构建多房棘球绦虫肌切蛋白(Em severin)基因过表达慢病毒载体,并分析其对人正常肝细胞L02侵袭、迁移能力的影响。方法扩增Em severin基因片段,并将其插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,构建重组慢病毒pCDH-Em severin。用pCDH-Em severin感染293T细胞,进行病毒包装并检测病毒滴度。以MOI=50的慢病毒感染人正常肝细胞L02,采用RT-qPCR和Western blot检测Em severin mRNA和蛋白表达水平,并通过Transwell和划痕试验检测过表达Em severin对L02细胞侵袭、迁移能力的影响。结果成功构建重组慢病毒pCDH-Em severin,感染293T细胞并进行包装后,获得滴度为1×10~8 TU/ml的pCDH-Em severin慢病毒。RT-qPCR和Western blot检测pCDH-Em severin感染组Em severin mRNA和蛋白表达水平显着高于空白组和空载病毒组(F值分别为98.731和86.074,P<0.05)。Transwell和划痕试验结果表明,过表达Em severin可增强人正常肝细胞L02的侵袭、迁移能力(F值分别为15.439和53.082,P<0.05)。结论成功构建重组慢病毒pCDH-Em severin,过表达Em severin可增强人正常肝细胞L02的侵袭、迁移能力,可为研究Em severin在泡球蚴的侵袭、转移中的作用及机制奠定了基础(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年03期）
王芬,赵明才,胡容,王洁,王明霞[3]（2019）在《多房棘球绦虫SEVERIN蛋白基因的克隆及T、B细胞表位预测》一文中研究指出目的采用RT-PCR方法克隆多房棘球绦虫SEVERIN蛋白基因(EmSEVERIN),并进行T、B细胞表位等生物信息学分析。方法根据细粒棘球绦虫SEVERIN基因序列设计特异引物,以多房棘球绦虫原头蚴cDNA为模板扩增目的基因并测序。利用ProtParam、SMART、MotifScan、SWISS-MODEL等在线分析程序,结合DNAStar、DNAMAN等生物信息学软件分析、预测Emseverin基因编码蛋白的理化性质、保守结构域、翻译后修饰位点、叁维结构及T、B细胞表位。结果成功克隆了长度为1 002 bp的EmSEVERIN基因,该基因编码蛋白由333 aa组成,等电点为6.10,含有3个类凝溶胶蛋白结构域,属于凝溶胶蛋白超家族。多房棘球绦虫SEVERIN蛋白含有5个T、B细胞联合表位,分别为34-49 aa、78-97 aa、160-187 aa、251-272 aa、295-314 aa。结论通过生物信息学方法筛选出多房棘球绦虫SEVERIN蛋白的5个T、B细胞联合表位,为抗棘球蚴病短肽疫苗的研制提供了理论基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年02期）
王强,王志鑫,马艳艳,樊海宁,王虎[4]（2019）在《几种常用线粒体基因在多房棘球绦虫虫种鉴定中的应用现状及进展》一文中研究指出cox1、nad1等线粒体基因用于多房棘球绦虫虫种鉴定,克服了传统方法耗时、费力的缺点,并能保持较高灵敏性和特异性,还可承受大批量虫种鉴定工作,目前在多房棘球绦虫终宿主及中间宿主的感染筛查中应用广泛,本文通过介绍几种常用线粒体基因的结构特点、进化速度、相关研究结果,阐述研究现状及进展,探讨目前存在的主要问题。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2019年04期）
刘许诺[5]（2018）在《多房棘球绦虫水通道蛋白基因的研究》一文中研究指出目的分析多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)水通道蛋白(aquaporin,AQP)基因的序列及结构特征,并在非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞中验证其水通道功能,为探讨多房棘球绦虫水通道蛋白(EmAQPs)基因与泡球蚴囊液形成的关系奠定基础。方法利用生物信息学的方法分析多房棘球绦虫水通道蛋白基因的序列及结构特征;以泡球蚴的囊泡生发层总RNA为模板,利用RT-PCR的方法克隆多房棘球绦虫的CDS区,构建水通道蛋白基因的体外转录表达载体,并在非洲爪蟾卵母细胞中进行异源表达,以验证其水通道功能。结果1.EmAQPs属于MIP超家族成员,具有选择性通透水分子和其它小分子溶质的特征;6种EmAQPs分别含有2~5个跨膜结构域,除EmAQP9(accession number:CDS35949.1)具有两个保守的NPA基序外,其余5种EmAQPs蛋白的NPA基序均有突变;构建进化树结果显示6种EmAQPs分为两大支:两种EmAQP9与人AQP9聚为一支,属于水-甘油通道蛋白亚族;EmAQP、EmAQP1和两种EmAQP4与人AQP1聚为一支,属于经典的水通道蛋白亚族,EmAQPs与人AQPs氨基酸序列的相似性为27%~43%。2.多房棘球绦虫基因组存在6个AQPs编码基因,但本研究只成功扩增了EmAQP4(accession number:EmuJ_000124900)和EmAQP9(accession number:EmuJ_001190800)两个基因,并且成功构建了体外转录载体p CS-107-EmAQP4和pCS-107-EmAQP9,在异源表达系统非洲爪蟾卵母细胞中验证了EmAQP4(accession number:EmuJ_000124900)和EmAQP9(accession number:EmuJ_001190800)这两个基因未显示水通道功能。结论成功克隆了多房棘球绦虫EmAQP4(accession number:EmuJ_000124900)和EmAQP9(accession number:EmuJ_001190800)基因,并在非洲爪蟾卵母细胞中异源表达,验证了这两个基因未显示水通道功能。EmAQP4和EmAQP9基因未表现出水通道功能的原因可能是由这两个EmAQPs蛋白的结构与经典水通道蛋白结构不同引起的,从而使水份不能通过生发层细胞膜上的EmAQPs进入生发层细胞促使生发层细胞肿胀坏死,导致囊泡能在中间宿主体内长期存活、长大。如果能寻找到有效激活EmAQPs基因的方法,让水份或者药物能通过EmAQPs进入生发层细胞促使生发层细胞肿胀坏死从而切断囊泡不断浸润性生长的途径,则可以为筛选治疗包虫病的药物新靶点提供新思路。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2018-05-01）
苏梦,郭小腊,杨静,邵忠伟,丁军涛[6]（2016）在《多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及潜在应用》一文中研究指出目的筛选多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)apomucin基因(Em-apo)的qPCR最佳引物,探索该基因的表达水平。方法根据Gene DB中4种Em-apo序列,设计引物并通过荧光定量PCR(q PCR)对引物进行分析,确定每对引物的特异性、PCR扩增效率。利用筛选得到的最佳引物,分别检测经阿苯达唑(5μg/ml)和胰岛素(100 ng/ml)培养处理的多房棘球绦虫原头节(1 000个)Em-apo表达水平的变化,用稀释阿苯达唑的DMSO和胰岛素的PBS作为各自的对照。结果筛选分别得到了Em-apo-1、Em-apo-2/3、Em-apo-4和内参基因actin的特异引物各1对,qPCR熔解曲线分析结果显示,每对引物的扩增产物只出现单峰,且扩增效率均为95%~101%。qPCR分析结果显示,与DMSO对照组(1.00)相比,多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑处理后,Emapo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平均有所上升,分别为1.51±0.27、1.39±0.30和1.14±0.18,叁者差异无统计学意义(P>0.05);与PBS对照组(1.00)相比,原头节经胰岛素处理后,Em-apo表达水平的变化不一,其中Em-apo-1的表达水平基本不变,Em-apo-4的表达水平有所下降,而Em-apo-2/3明显下调(0.73±0.09),但叁者差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验筛选确定的Em-apo基因的qPCR引物特异,可用于Em-apo基因表达水平的检测。多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑和胰岛素处理后,对Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平有一定的影响。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2016年05期）
苏梦,郭小腊,郑亚东[7]（2016）在《多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及其应用》一文中研究指出目的筛选多房棘球蚴apomucin基因(emu-apo)的qP CR最佳引物,并加以应用。方法根据GeneD B中4种emu-apo序列,设计引物并通过qP CR对引物进行分析,确定每对引物的特异性、PCR扩增效率。利用筛选得到的最佳引物,分析经阿苯达唑(5μg/mL)和胰岛素(100ng/mL)共培养处理后多房棘球蚴emu-apo表达水平的变化。结果筛选分别得到了emu-apo-1、emu-apo-2/3、emu-apo-4和内参基因actin的特异引物各1对,qP CR溶解曲线分析表明,每对扩增产物只出现单峰,且扩增效率均在95%-101%之间。qP CR分析结果表明,经阿苯达唑处理后,emu-apo-1、emu-apo-2/3和emu-apo-4的表达水平均有所上升,分别为对照组的1.51、1.39和1.14倍;经胰岛素处理后,emu-apo表达水平的变化不一,其中emu-apo-1的表达水平基本不变,emu-apo-4的表达水平有所下降,而emu-apo-2/3明显下调,约为对照的0.73倍。结论本实验筛选确定的emu-apo基因的q PCR引物特异、PCR扩增效率可比较,可用于emu-apo基因表达水平的qP CR验证。经阿苯达唑和胰岛素处理后,多房棘球蚴emu-apo-1、emu-apo-2/3和emu-apo-4的表达水平出现一定的变化,提示它们可能在阿苯达唑和胰岛素诱导的反应中发挥作用,其作用机制有待进一步研究。(本文来源于《中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会论文摘要集》期刊2016-08-08）
吴川川[8]（2016）在《中国西部地区多房棘球绦虫mtDNA基因多态性分析》一文中研究指出目的:泡球蚴病(AE)是由多房棘球绦虫以啮齿类动物为主要中间宿主,以狗、狐为终末宿主之间传播的威胁人类生命的寄生虫病。多房棘球绦虫在整个北半球分布有30余种啮齿动物作为中间宿主,这有很大可能在基因上引起大的遗传变异。方法:本研究中,我们从AE患者(n=44)和中国西部采集寄生于啮齿类动物体内多房棘球绦虫的线粒体基因(Cob,Nad2和Cox1)的叁个片段。采用PCR获得序列,测序,并通过Bio Edit,多个序列的对比,用Meg Align进行遗传距离的计算。再用MEGA6.0软件对所获得序列进行聚类分析,以及系统进化树的制作,通过NETWORK4.6.1.3进行单倍体网格的制作。结果:在这些菌株中发现存在了相对较低的遗传变异性。从啮齿动物体内的多房棘球绦虫序列显示存在两个单倍型。从AE患者Cob基因序列中显示两个单倍型,而Nad2有4个单倍型。与发表在Gen Bank数据库中的序列相结合,我们分别收集到Cob,Nad2和Cox1片段的各44,41和62的序列,对比发现5基因型包括叁个亚洲基因型,一个来自欧洲,一个来自北美。结论:在两大流行区域(青海、新疆)这些单倍型共存,大多数AE患者都为亚洲I型,这可能是其终末宿主对生活环境的要求或者其本身对人类的致病性。还需要求进一步进行研究。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2016-06-01）
商桂华[9]（2014）在《多房棘球绦虫OCT4基因的克隆及功能鉴定》一文中研究指出泡球蚴病是由多房棘球绦虫幼虫(泡球蚴)寄生于人畜等中间宿主肝脏等部位引起的寄生虫病,是世界性最危险的人畜共患寄生虫病之一。泡球蚴生发层细胞类似于哺乳动物胚胎干细胞,具有很强的自我更新能力和分化能力,它在泡球蚴的生长发育以及生活史循环中起着关键作用。生发层细胞多潜能性的维持是一个复杂的调控系统,其中OCT4基因是维持干细胞多潜能性的内源性因子。因此我们希望通过对泡球蚴内源性基因OCT4的研究,探讨泡球蚴生长发育的内在机制。本项目研究利用RACE技术获得了泡球蚴中编码OCT4同源基因的全长序列,利用生物信息学技术对基因结构进行分析,结果显示该基因编码的蛋白包含POU功能域,并且该功能域具有高度保守性。在此基础上,我们对泡球蚴OCT4可能同源性基因编码的蛋白(暂命名为EmOCT4)进行一系列功能分析。实验中,我们通过原核表达技术获得重组抗体,通过免疫组化技术对EmOCT4进行表达定位,结果表明EmOCT4蛋白在细胞核中表达。我们通过逆转录病毒载体介导的方法,将泡球蚴EmOCT4基因与鼠SOX2、KLF4、cMYC基因一同导入鼠成纤维细胞中,将其重编程,并且成功诱导出多能干细胞(iPSC)。这一结果表明EmOCT4在诱导鼠成纤维细胞中发挥了重要作用,是鼠OCT4蛋白的功能同源物,实验结果为进一步探讨EmOCT4在泡球蚴生发层细胞多潜能性维持中的作用提供了帮助。(本文来源于《厦门大学》期刊2014-05-01）
武坚坚[10]（2014）在《多房棘球绦虫Sox2基因的克隆与功能鉴定》一文中研究指出多房棘球绦虫中绦期幼虫(泡球蚴)在人体内以类似肿瘤的方式不断增殖发育,引起严重的人兽共患泡球蚴病。泡球蚴生发层细胞属于全能成体干细胞,具有自我更新和分化能力,是其不断增殖发育的基础。Sox2是哺乳动物胚胎干细胞核心转录因子之一,对干细胞多潜能性的维持起关键作用。本文运用RACE技术克隆得到编码多房棘球绦虫SOX2可能同源基因的全长序列,命名为EmSOX2;运用生物信息学分析其基因结构和功能域,构建原核表达载体,制备多克隆抗体,结合免疫印迹、RT-PCR、实时荧光定量PCR、体外真核表达和免疫组化等方法对EmSOX2表达和定位进行了研究；利用iPS技术,研究EmSOX2在胚胎干细胞多潜能性维持中的作用。主要结果如下：(1) EmSOX2基因全长为1422bp,包括70bp的3'UTR和29bp的5'UTR,含一个长为138bp的内含子,编码阅读框为1185bp; EmSOX2基因只存在一种转录形式,编码394个氨基酸,其HMG box保守功能区域与其他生物的Sox2的HMG box区域相似度达90%以上。(2) EmSOX2蛋白的表达主要定位于泡球蚴生发层细胞的细胞核中：EmSOX2表达定位于真核细胞的细胞核中；实时荧光定量PCR与Western Blot结果表明：EmSOX2蛋白在囊泡的表达量明显高于原头节。(3)iPS诱导技术的结果表明：EmSOX2可替代小鼠外源Sox2,与小鼠的外源Oct4、c-Myc及Klf共感染小鼠胚胎成纤维细胞后,可以将其诱导成iPS细胞。综上所述,本文对泡状棘球蚴Sox2可能同源基因EmSOX2进行了克隆与功能鉴定,得到了EmSOX2全长序列,发现EmSOX2蛋白在泡球蚴生发层细胞中高表达,且对于维持小鼠胚胎干细胞的多潜能性起关键作用,与小鼠Sox2功能类似,提示EmSOX2为哺乳类Sox2的功能同源基因。此研究将有助于了解维持泡球蚴生发层多能性的内源因子及其作用机制,发现新的药物靶点,为研发新型抗泡球蚴药物提供理论依据。(本文来源于《厦门大学》期刊2014-05-01）
多房棘球绦虫基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建多房棘球绦虫肌切蛋白(Em severin)基因过表达慢病毒载体,并分析其对人正常肝细胞L02侵袭、迁移能力的影响。方法扩增Em severin基因片段,并将其插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,构建重组慢病毒pCDH-Em severin。用pCDH-Em severin感染293T细胞,进行病毒包装并检测病毒滴度。以MOI=50的慢病毒感染人正常肝细胞L02,采用RT-qPCR和Western blot检测Em severin mRNA和蛋白表达水平,并通过Transwell和划痕试验检测过表达Em severin对L02细胞侵袭、迁移能力的影响。结果成功构建重组慢病毒pCDH-Em severin,感染293T细胞并进行包装后,获得滴度为1×10~8 TU/ml的pCDH-Em severin慢病毒。RT-qPCR和Western blot检测pCDH-Em severin感染组Em severin mRNA和蛋白表达水平显着高于空白组和空载病毒组(F值分别为98.731和86.074,P<0.05)。Transwell和划痕试验结果表明,过表达Em severin可增强人正常肝细胞L02的侵袭、迁移能力(F值分别为15.439和53.082,P<0.05)。结论成功构建重组慢病毒pCDH-Em severin,过表达Em severin可增强人正常肝细胞L02的侵袭、迁移能力,可为研究Em severin在泡球蚴的侵袭、转移中的作用及机制奠定了基础
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
多房棘球绦虫基因论文参考文献
[1].孙立,林仁勇,房彬彬,李亮,毕晓娟.多房棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及其免疫诊断价值初步评价[J].中国病原生物学杂志.2019
[2].王芬,赵明才,胡容,王洁,王明霞.多房棘球绦虫severin基因过表达慢病毒载体的构建及对人正常肝细胞侵袭、迁移能力的影响[J].中国病原生物学杂志.2019
[3].王芬,赵明才,胡容,王洁,王明霞.多房棘球绦虫SEVERIN蛋白基因的克隆及T、B细胞表位预测[J].中国病原生物学杂志.2019
[4].王强,王志鑫,马艳艳,樊海宁,王虎.几种常用线粒体基因在多房棘球绦虫虫种鉴定中的应用现状及进展[J].中国人兽共患病学报.2019
[5].刘许诺.多房棘球绦虫水通道蛋白基因的研究[D].重庆医科大学.2018
[6].苏梦,郭小腊,杨静,邵忠伟,丁军涛.多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及潜在应用[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2016
[7].苏梦,郭小腊,郑亚东.多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及其应用[C].中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会论文摘要集.2016
[8].吴川川.中国西部地区多房棘球绦虫mtDNA基因多态性分析[D].新疆农业大学.2016
[9].商桂华.多房棘球绦虫OCT4基因的克隆及功能鉴定[D].厦门大学.2014
[10].武坚坚.多房棘球绦虫Sox2基因的克隆与功能鉴定[D].厦门大学.2014
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